本文關鍵詞：自噬在姜黃素對人肝癌SMMC-7721細胞的增殖抑制和凋亡誘導中的作用研究

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【摘要】：研究目的:姜黃素(Curcumin),是從中藥姜黃中提取的活性多酚,可以調(diào)節(jié)生物機體內(nèi)的多條信號通路。大量的臨床前研究以及臨床研究已證實,姜黃素具有抗HIV、抗突變、神經(jīng)保護等多種藥理作用,也用作治療許多慢性疾病,如糖尿病、過敏性疾病、神經(jīng)退行性病、骨質(zhì)疏松、腫瘤等。研究表明,姜黃素對乳腺癌、胃癌、前列腺癌、肺癌等多種惡性腫瘤均具有抑制作用。而針對目前許多肝癌晚期患者病死率高,術后易復發(fā)轉移,且單純化療療效不佳的現(xiàn)狀。國內(nèi)外研究者開展了大量有關姜黃素治療原發(fā)性肝癌方面的基礎研究,但具體機制仍未明了。本研究以人肝癌SMMC-7721細胞為研究對象,探究:(1)姜黃素對肝癌細胞增殖和凋亡的影響及其機制研究;(2)姜黃素對肝癌細胞自噬的影響及其相關信號通路研究;(3)自噬在姜黃素誘導肝癌細胞增殖抑制和凋亡中的作用研究;以期為天然抗癌成分,姜黃素的抗腫瘤機制及其在肝癌方面臨床試驗的開展提供理論依據(jù)。研究方法:1、以不同劑量姜黃素處理人肝癌SMMC-7721細胞一定時間后,以MTT法檢測各組肝癌細胞活力,并以流式細胞術檢測各組肝癌細胞凋亡率,并與空白對照組分析比較;2、以不同劑量姜黃素處理人肝癌SMMC-7721細胞一定時間后,提取各組細胞總蛋白,以Western Blot技術檢測細胞自噬相關蛋白(LC3-Ⅱ、Beclin1、p62蛋白)及自噬相關信號通路蛋白(p-Akt、p-m TOR蛋白)的表達情況,以此分析姜黃素對肝癌細胞自噬及自噬相關信號通路的影響;3、以不同劑量姜黃素處理人肝癌SMMC-7721細胞一定時間后,以免疫熒光技術檢測各組肝癌細胞自噬的發(fā)生情況,并與空白對照組分析比較;4、通過藥理學干預自噬,以自噬特異性抑制劑(CQ/3-MA)預處理肝癌細胞,再以姜黃素處理肝癌細胞一定時間。分別以MTT法檢測肝癌細胞活力,以流式細胞術檢測肝癌細胞凋亡率,以Western Blot檢測凋亡相關蛋白的表達,并與姜黃素單獨處理組分析比較;研究結果:1、隨著姜黃素濃度的升高及處理時間的延長,人肝癌SMMC-7721細胞的相對活力逐漸下降,同時,肝癌細胞凋亡率也隨著姜黃素劑量的增加而上升,呈時間-劑量依賴關系;2、Western blot結果顯示隨著姜黃素劑量的不斷增加,自噬相關蛋白(Beclin-1,LC3-II和p62蛋白)的表達量明顯增加,并具有統(tǒng)計學意義(p0.05);此外,自噬相關信號通路蛋白(p-Akt、p-m TOR蛋白)的表達量隨姜黃素濃度的增高逐漸下降,并具有統(tǒng)計學意義(p0.05)。提示在人肝癌SMMC-7721細胞,姜黃素可能通過抑制Akt/m TOR信號通路的活性來激活自噬;3、以自噬特異性抑制劑,氯喹(CQ)預處理人肝癌SMMC-7721細胞,再以姜黃素處理肝癌細胞一定時間。與姜黃素單獨處理組對比,LC3-II蛋白的表達量明顯上升,并具有統(tǒng)計學意義(p0.05);4、免疫熒光結果顯示姜黃素促進了肝癌細胞漿內(nèi)LC3綠色熒光的聚集,提示姜黃素誘了肝癌細胞自噬的發(fā)生;5、以自噬特異性抑制劑(CQ/3-MA)預處理人肝癌SMMC-7721細胞,再以姜黃素處理一定時間;結果顯示與姜黃素單獨處理組對比,肝癌細胞活力明顯下降(p0.05),此外,細胞凋亡率也明顯增加(p0.05);結論:姜黃素可明顯抑制人肝癌SMMC-7721細胞增殖并誘導細胞凋亡,并呈時間-劑量依賴效應;同時,姜黃素可能通過抑制Akt/m TOR信號通路的活性,進而激活人肝癌SMMC-7721細胞自噬的發(fā)生。此外,自噬特異性抑制劑(CQ/3-MA)預處理肝癌細胞后,可明顯增強姜黃素對肝癌細胞的增殖抑制及凋亡誘導作用。這對提高姜黃素治療肝癌的臨床療效,改善患者的生命質(zhì)量,都有著重大的意義。
【學位授予單位】：江蘇大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7

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