本文關(guān)鍵詞：自噬在姜黃素對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞的增殖抑制和凋亡誘導(dǎo)中的作用研究

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【摘要】：研究目的:姜黃素(Curcumin),是從中藥姜黃中提取的活性多酚,可以調(diào)節(jié)生物機(jī)體內(nèi)的多條信號(hào)通路。大量的臨床前研究以及臨床研究已證實(shí),姜黃素具有抗HIV、抗突變、神經(jīng)保護(hù)等多種藥理作用,也用作治療許多慢性疾病,如糖尿病、過(guò)敏性疾病、神經(jīng)退行性病、骨質(zhì)疏松、腫瘤等。研究表明,姜黃素對(duì)乳腺癌、胃癌、前列腺癌、肺癌等多種惡性腫瘤均具有抑制作用。而針對(duì)目前許多肝癌晚期患者病死率高,術(shù)后易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移,且單純化療療效不佳的現(xiàn)狀。國(guó)內(nèi)外研究者開(kāi)展了大量有關(guān)姜黃素治療原發(fā)性肝癌方面的基礎(chǔ)研究,但具體機(jī)制仍未明了。本研究以人肝癌SMMC-7721細(xì)胞為研究對(duì)象,探究:(1)姜黃素對(duì)肝癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響及其機(jī)制研究;(2)姜黃素對(duì)肝癌細(xì)胞自噬的影響及其相關(guān)信號(hào)通路研究;(3)自噬在姜黃素誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞增殖抑制和凋亡中的作用研究;以期為天然抗癌成分,姜黃素的抗腫瘤機(jī)制及其在肝癌方面臨床試驗(yàn)的開(kāi)展提供理論依據(jù)。研究方法:1、以不同劑量姜黃素處理人肝癌SMMC-7721細(xì)胞一定時(shí)間后,以MTT法檢測(cè)各組肝癌細(xì)胞活力,并以流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組肝癌細(xì)胞凋亡率,并與空白對(duì)照組分析比較;2、以不同劑量姜黃素處理人肝癌SMMC-7721細(xì)胞一定時(shí)間后,提取各組細(xì)胞總蛋白,以Western Blot技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白(LC3-Ⅱ、Beclin1、p62蛋白)及自噬相關(guān)信號(hào)通路蛋白(p-Akt、p-m TOR蛋白)的表達(dá)情況,以此分析姜黃素對(duì)肝癌細(xì)胞自噬及自噬相關(guān)信號(hào)通路的影響;3、以不同劑量姜黃素處理人肝癌SMMC-7721細(xì)胞一定時(shí)間后,以免疫熒光技術(shù)檢測(cè)各組肝癌細(xì)胞自噬的發(fā)生情況,并與空白對(duì)照組分析比較;4、通過(guò)藥理學(xué)干預(yù)自噬,以自噬特異性抑制劑(CQ/3-MA)預(yù)處理肝癌細(xì)胞,再以姜黃素處理肝癌細(xì)胞一定時(shí)間。分別以MTT法檢測(cè)肝癌細(xì)胞活力,以流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)肝癌細(xì)胞凋亡率,以Western Blot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá),并與姜黃素單獨(dú)處理組分析比較;研究結(jié)果:1、隨著姜黃素濃度的升高及處理時(shí)間的延長(zhǎng),人肝癌SMMC-7721細(xì)胞的相對(duì)活力逐漸下降,同時(shí),肝癌細(xì)胞凋亡率也隨著姜黃素劑量的增加而上升,呈時(shí)間-劑量依賴關(guān)系;2、Western blot結(jié)果顯示隨著姜黃素劑量的不斷增加,自噬相關(guān)蛋白(Beclin-1,LC3-II和p62蛋白)的表達(dá)量明顯增加,并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);此外,自噬相關(guān)信號(hào)通路蛋白(p-Akt、p-m TOR蛋白)的表達(dá)量隨姜黃素濃度的增高逐漸下降,并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。提示在人肝癌SMMC-7721細(xì)胞,姜黃素可能通過(guò)抑制Akt/m TOR信號(hào)通路的活性來(lái)激活自噬;3、以自噬特異性抑制劑,氯喹(CQ)預(yù)處理人肝癌SMMC-7721細(xì)胞,再以姜黃素處理肝癌細(xì)胞一定時(shí)間。與姜黃素單獨(dú)處理組對(duì)比,LC3-II蛋白的表達(dá)量明顯上升,并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);4、免疫熒光結(jié)果顯示姜黃素促進(jìn)了肝癌細(xì)胞漿內(nèi)LC3綠色熒光的聚集,提示姜黃素誘了肝癌細(xì)胞自噬的發(fā)生;5、以自噬特異性抑制劑(CQ/3-MA)預(yù)處理人肝癌SMMC-7721細(xì)胞,再以姜黃素處理一定時(shí)間;結(jié)果顯示與姜黃素單獨(dú)處理組對(duì)比,肝癌細(xì)胞活力明顯下降(p0.05),此外,細(xì)胞凋亡率也明顯增加(p0.05);結(jié)論:姜黃素可明顯抑制人肝癌SMMC-7721細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,并呈時(shí)間-劑量依賴效應(yīng);同時(shí),姜黃素可能通過(guò)抑制Akt/m TOR信號(hào)通路的活性,進(jìn)而激活人肝癌SMMC-7721細(xì)胞自噬的發(fā)生。此外,自噬特異性抑制劑(CQ/3-MA)預(yù)處理肝癌細(xì)胞后,可明顯增強(qiáng)姜黃素對(duì)肝癌細(xì)胞的增殖抑制及凋亡誘導(dǎo)作用。這對(duì)提高姜黃素治療肝癌的臨床療效,改善患者的生命質(zhì)量,都有著重大的意義。
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7

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