本文關(guān)鍵詞：整合素α5通路通過激活NMHCⅡA調(diào)控乳腺癌轉(zhuǎn)移的研究

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【摘要】：乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤之一,轉(zhuǎn)移是乳腺癌患者死亡的主要原因。了解乳腺癌的侵襲、轉(zhuǎn)移機制對于乳腺癌的治療具有重大社會意義。非肌細胞肌球蛋白Ⅱ(NMⅡ)為細胞骨架的重要組成部分,參與細胞多種生命活動過程。NMⅡ是一個由重鏈(NMHC)和輕鏈(NMLC)組成的六聚體結(jié)構(gòu),輕鏈對重鏈起著穩(wěn)定和調(diào)節(jié)作用,重鏈通過磷酸化活化調(diào)控細胞的運動。因而,NMHCⅡ?qū)δ[瘤細胞運動是否存在調(diào)控作用引起我們的關(guān)注。我們前期的研究結(jié)果顯示,NMHCⅡ在乳腺癌細胞的遷移、侵襲等腫瘤的轉(zhuǎn)移的起始階段起著重要的調(diào)控作用。沉默NMHCⅡ各亞型時,乳腺癌細胞的遷移侵襲等過程都受到了很大的限制。但是調(diào)控這一現(xiàn)象的機制尚不清楚。整合素是由α亞基和β亞基組成的位于細胞膜上的異二聚體,屬于黏附分子超家族的一員。整合素的特殊的跨膜結(jié)構(gòu)可以分為胞外域和胞內(nèi)域。胞外域可以與不同的細胞外基質(zhì)分子相結(jié)合,從而傳遞相應的化學信號,胞內(nèi)域可以與細胞骨架蛋白相連,引發(fā)骨架蛋白的重排。已有研究顯示,增加整合素的表達可以增加腫瘤的惡性程度和侵襲能力,這些改變與細胞骨架重構(gòu)和收縮力的產(chǎn)生密切相關(guān),其機制可能與α5β1細胞對于MLC磷酸化活化有關(guān),但是否與NMHC有關(guān)尚未可知。綜上所述,我們推測,腫瘤轉(zhuǎn)移過程的起始階段,整合素可能通過NMLC活化調(diào)控NMHCⅡ磷酸化活化,導致細胞骨架重構(gòu)和收縮力的產(chǎn)生,從而引發(fā)腫瘤細胞的遷移、侵襲等一系列生物學活動。研究目的:研究乳腺癌轉(zhuǎn)移過程中,整合素α5通路對NMHCⅡA的調(diào)控及對乳腺癌細胞的生物學行為的影響。研究方法:1、利用免疫組織化學染色的方法觀察整合素α5、NMHCⅡA活化形(p-S1943)2、在乳腺組織中的表達情況。3、在乳腺癌中,整合素α5與NMHCⅡA及其活化形式的關(guān)系。(1)通過慢病毒轉(zhuǎn)染沉默MDA-MB-231細胞中整合素α5,通過免疫熒光和流式細胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染效率,通過western blot、流式細胞術(shù)和免疫熒光染色檢測其沉默效率。(2)通過Western Blot檢測沉默整合素α5后細胞內(nèi)NMHCⅡA及其活化形式p-S1943的表達水平。(3)沉默整合素α5后對腫瘤細胞生物學行為的影響。(1)應用CCK-8檢測沉默整合素α5后對細胞增殖的影響。(2)通過流式細胞術(shù)檢測沉默整合素α5后細胞周期的改變。(3)通過細胞的劃痕實驗來分析沉默整合素α5后細胞遷移能力的改變。(4)通過transwell體外侵襲實驗來檢測沉默整合素α5后,細胞侵襲力的改變。(5)通過黏附實驗檢測沉默整合素α5后,細胞粘附力的改變。(6)通過免疫細胞爬片測量單個細胞的鋪展面積檢測細胞鋪展能力的改變。研究結(jié)果:1、免疫組化染色的結(jié)果發(fā)現(xiàn),浸潤性導管癌中的整合素α5、P-S1943的表達高于纖維腺瘤及乳腺增生;且浸潤性導管癌與乳腺增生的組間差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。整合素α5與p-S1943的表達具有共定位的現(xiàn)象;且整合素α5與p-S1943存在相關(guān)性(R=0.76)。在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌中p-S1943、整合素α5的表達均高于非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組,組間有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2、整合素α5與NMHCⅡA及其活化形式的關(guān)系。(1)獲得轉(zhuǎn)染后的MDA-MB-231細胞株,通過熒光和流式細胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染效率,發(fā)現(xiàn)三組細胞都在90%以上,利用Western Blot、流式細胞術(shù)和免疫熒光染色檢測沉默效率,發(fā)現(xiàn)序列號為16381的慢病毒具有最高的沉默效率(P0.05)。(2)Western Blot的結(jié)果顯示,沉默整合素α5后,細胞內(nèi)NMHCⅡA及其活化形式p-S1943表達均降低,與空載組和未轉(zhuǎn)染組相比,組間差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。(3)沉默整合素α5后對腫瘤細胞生物學行為的影響。(1)細胞生長曲線和流式細胞術(shù)檢測細胞周期的結(jié)果均顯示,沉默整合素α5對MDA-MB-231細胞的增殖和周期均沒有明顯影響,與空載組和未轉(zhuǎn)染組相比,組間差異沒有統(tǒng)計學意義(P0.05)。(2)細胞劃痕實驗結(jié)果說明,沉默整合素α5后,細胞遷移能力減弱,與空載組和未轉(zhuǎn)染組相比,組間差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。(3)細胞侵襲實驗結(jié)果表明,沉默整合素α5后,細胞穿過人工基底膜的數(shù)目明顯降低,與空載組和未轉(zhuǎn)染組相比,組間差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。(4)細胞黏附實驗表明,沉默整合素α5后,細胞黏附能力明顯將低,與空載組和未轉(zhuǎn)染組相比,組間差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。(5)沉默整合素α5后,單個細胞的鋪展面積明顯低于空載組和未轉(zhuǎn)染組,組間差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:1.乳腺癌中,整合素α5對NMHCⅡA有調(diào)控作用。2.乳腺癌中,整合素α5對腫瘤細胞的侵襲、遷移、黏附、鋪展等生物學行為有調(diào)節(jié)作用。3.整合素α5可能通過調(diào)控NMHCⅡA來調(diào)節(jié)乳腺癌細胞的生物學行為。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9

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本文編號：1270045