本文關(guān)鍵詞：整合素α5通路通過激活NMHCⅡA調(diào)控乳腺癌轉(zhuǎn)移的研究

  更多相關(guān)文章： 乳腺癌 腫瘤轉(zhuǎn)移 NMHCⅡA 整合素 磷酸化

【摘要】：乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤之一,轉(zhuǎn)移是乳腺癌患者死亡的主要原因。了解乳腺癌的侵襲、轉(zhuǎn)移機制對于乳腺癌的治療具有重大社會意義。非肌細(xì)胞肌球蛋白Ⅱ(NMⅡ)為細(xì)胞骨架的重要組成部分,參與細(xì)胞多種生命活動過程。NMⅡ是一個由重鏈(NMHC)和輕鏈(NMLC)組成的六聚體結(jié)構(gòu),輕鏈對重鏈起著穩(wěn)定和調(diào)節(jié)作用,重鏈通過磷酸化活化調(diào)控細(xì)胞的運動。因而,NMHCⅡ?qū)δ[瘤細(xì)胞運動是否存在調(diào)控作用引起我們的關(guān)注。我們前期的研究結(jié)果顯示,NMHCⅡ在乳腺癌細(xì)胞的遷移、侵襲等腫瘤的轉(zhuǎn)移的起始階段起著重要的調(diào)控作用。沉默NMHCⅡ各亞型時,乳腺癌細(xì)胞的遷移侵襲等過程都受到了很大的限制。但是調(diào)控這一現(xiàn)象的機制尚不清楚。整合素是由α亞基和β亞基組成的位于細(xì)胞膜上的異二聚體,屬于黏附分子超家族的一員。整合素的特殊的跨膜結(jié)構(gòu)可以分為胞外域和胞內(nèi)域。胞外域可以與不同的細(xì)胞外基質(zhì)分子相結(jié)合,從而傳遞相應(yīng)的化學(xué)信號,胞內(nèi)域可以與細(xì)胞骨架蛋白相連,引發(fā)骨架蛋白的重排。已有研究顯示,增加整合素的表達(dá)可以增加腫瘤的惡性程度和侵襲能力,這些改變與細(xì)胞骨架重構(gòu)和收縮力的產(chǎn)生密切相關(guān),其機制可能與α5β1細(xì)胞對于MLC磷酸化活化有關(guān),但是否與NMHC有關(guān)尚未可知。綜上所述,我們推測,腫瘤轉(zhuǎn)移過程的起始階段,整合素可能通過NMLC活化調(diào)控NMHCⅡ磷酸化活化,導(dǎo)致細(xì)胞骨架重構(gòu)和收縮力的產(chǎn)生,從而引發(fā)腫瘤細(xì)胞的遷移、侵襲等一系列生物學(xué)活動。研究目的:研究乳腺癌轉(zhuǎn)移過程中,整合素α5通路對NMHCⅡA的調(diào)控及對乳腺癌細(xì)胞的生物學(xué)行為的影響。研究方法:1、利用免疫組織化學(xué)染色的方法觀察整合素α5、NMHCⅡA活化形(p-S1943)2、在乳腺組織中的表達(dá)情況。3、在乳腺癌中,整合素α5與NMHCⅡA及其活化形式的關(guān)系。(1)通過慢病毒轉(zhuǎn)染沉默MDA-MB-231細(xì)胞中整合素α5,通過免疫熒光和流式細(xì)胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染效率,通過western blot、流式細(xì)胞術(shù)和免疫熒光染色檢測其沉默效率。(2)通過Western Blot檢測沉默整合素α5后細(xì)胞內(nèi)NMHCⅡA及其活化形式p-S1943的表達(dá)水平。(3)沉默整合素α5后對腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。(1)應(yīng)用CCK-8檢測沉默整合素α5后對細(xì)胞增殖的影響。(2)通過流式細(xì)胞術(shù)檢測沉默整合素α5后細(xì)胞周期的改變。(3)通過細(xì)胞的劃痕實驗來分析沉默整合素α5后細(xì)胞遷移能力的改變。(4)通過transwell體外侵襲實驗來檢測沉默整合素α5后,細(xì)胞侵襲力的改變。(5)通過黏附實驗檢測沉默整合素α5后,細(xì)胞粘附力的改變。(6)通過免疫細(xì)胞爬片測量單個細(xì)胞的鋪展面積檢測細(xì)胞鋪展能力的改變。研究結(jié)果:1、免疫組化染色的結(jié)果發(fā)現(xiàn),浸潤性導(dǎo)管癌中的整合素α5、P-S1943的表達(dá)高于纖維腺瘤及乳腺增生;且浸潤性導(dǎo)管癌與乳腺增生的組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。整合素α5與p-S1943的表達(dá)具有共定位的現(xiàn)象;且整合素α5與p-S1943存在相關(guān)性(R=0.76)。在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌中p-S1943、整合素α5的表達(dá)均高于非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組,組間有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2、整合素α5與NMHCⅡA及其活化形式的關(guān)系。(1)獲得轉(zhuǎn)染后的MDA-MB-231細(xì)胞株,通過熒光和流式細(xì)胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染效率,發(fā)現(xiàn)三組細(xì)胞都在90%以上,利用Western Blot、流式細(xì)胞術(shù)和免疫熒光染色檢測沉默效率,發(fā)現(xiàn)序列號為16381的慢病毒具有最高的沉默效率(P0.05)。(2)Western Blot的結(jié)果顯示,沉默整合素α5后,細(xì)胞內(nèi)NMHCⅡA及其活化形式p-S1943表達(dá)均降低,與空載組和未轉(zhuǎn)染組相比,組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(3)沉默整合素α5后對腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。(1)細(xì)胞生長曲線和流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期的結(jié)果均顯示,沉默整合素α5對MDA-MB-231細(xì)胞的增殖和周期均沒有明顯影響,與空載組和未轉(zhuǎn)染組相比,組間差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2)細(xì)胞劃痕實驗結(jié)果說明,沉默整合素α5后,細(xì)胞遷移能力減弱,與空載組和未轉(zhuǎn)染組相比,組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(3)細(xì)胞侵襲實驗結(jié)果表明,沉默整合素α5后,細(xì)胞穿過人工基底膜的數(shù)目明顯降低,與空載組和未轉(zhuǎn)染組相比,組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(4)細(xì)胞黏附實驗表明,沉默整合素α5后,細(xì)胞黏附能力明顯將低,與空載組和未轉(zhuǎn)染組相比,組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(5)沉默整合素α5后,單個細(xì)胞的鋪展面積明顯低于空載組和未轉(zhuǎn)染組,組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.乳腺癌中,整合素α5對NMHCⅡA有調(diào)控作用。2.乳腺癌中,整合素α5對腫瘤細(xì)胞的侵襲、遷移、黏附、鋪展等生物學(xué)行為有調(diào)節(jié)作用。3.整合素α5可能通過調(diào)控NMHCⅡA來調(diào)節(jié)乳腺癌細(xì)胞的生物學(xué)行為。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 宋佳希;寇俊萍;余伯陽;;非肌肉肌球蛋白重鏈ⅡA(NMHCⅡA)生理病理功能研究進展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展;2009年20期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 韓志偉;張美根;王勤根;;生態(tài)NMHC對臭氧影響的數(shù)值模擬研究[A];第九屆（2001）全國大氣環(huán)境與污染學(xué)術(shù)會議論文集[C];2001年

2 徐振強;張劍波;馮金敏;;我國新時期綠道建設(shè)的科學(xué)思考——基于對城市綠化植物NMHC排放與大氣環(huán)境質(zhì)量的響應(yīng)關(guān)系研究[A];第十五屆中國科協(xié)年會第8分會場：環(huán)境科技創(chuàng)新與生態(tài)環(huán)境建設(shè)研討會論文集[C];2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 魏蕊芳;PiggyBac轉(zhuǎn)座子介導(dǎo)的過表達(dá)NMHCⅡ-A羧基端蛋白（PRA） MARC-145細(xì)胞系的建立及其對PRRSV感染的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2014年

2 付曉宇;整合素α5通路通過激活NMHCⅡA調(diào)控乳腺癌轉(zhuǎn)移的研究[D];吉林大學(xué);2016年

3 宋佩燁;沉默NMHC Ⅱ不同亞型基因?qū)θ橄侔w內(nèi)外生物學(xué)行為的影響[D];吉林大學(xué);2015年

4 黃先順;P25-MnCO_3系列可見光催化降解NMHC污染物性能的研究[D];河南大學(xué);2015年

，

本文編號：1270045