本文關(guān)鍵詞：泛素連接酶hrd1及氨基酸轉(zhuǎn)運載體LAT1在胃癌細胞中表達水平研究

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【摘要】：目的:研究泛素連接酶hrd1(hydroxymethylglutaryl reductase degradation 1,hrd1)與L型氨基酸轉(zhuǎn)運載體1(L-type amino acid transporter 1,LAT-1)在胃癌及癌旁正常細胞中的表達水平,探討hrd1與LAT1在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其相互作用。方法:采集我院胃癌手術(shù)切除標本63例,取距癌灶邊緣5cm以上的癌旁正常胃組織作為對照組。標本離體后分為兩部分,一部分(約500mg)離體后1小時內(nèi)放入-80℃冰箱保存,以Q-PCR及Western-blot方法檢測胃癌(實驗組)及癌旁組織(對照組)中hrd1及LAT1表達水平;大部分標本常規(guī)送病理科,后取病理蠟塊用SP法進行免疫組化,分別檢測胃癌及癌旁組織中hrd1及LAT1蛋白表達水平。結(jié)果:1免疫組化結(jié)果1.1 hrd1蛋白表達定位于胃癌細胞和正常胃黏膜中的細胞質(zhì)。胃癌組織中hrd1表達明顯高于癌旁正常組織,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。hrd1表達水平與患者的年齡、性別、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移及腫瘤臨床分期等臨床病理參數(shù)均無相關(guān)性,即不同年齡、性別,腫瘤分化程度及臨床分期等不同的樣本之間,hrd1表達水平無明顯差異。hrd1表達水平與腫瘤大小有一定相關(guān)性,癌灶≥5cm的標本中,hrd1表達水平明顯高于癌灶5cm的標本。1.2LAT1蛋白表達定位于細胞的細胞質(zhì)及細胞核。胃癌組織中LAT-1表達水平明顯高于癌旁正常組織,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。LAT1表達水平與患者的年齡、性別、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移等臨床病理參數(shù)均無相關(guān)性,與胃癌臨床分期及腫瘤大小有一定相關(guān)性,癌灶≥5cm的標本中,LAT1表達水平明顯高于癌灶5cm的標本;腫瘤分期Ⅰ期、Ⅱ期的標本中,LAT1表達水平明顯低于Ⅲ期、Ⅳ期的標本。2 Q-PCR實驗結(jié)果基因的相對表達量用比較CT值計算,計算公式:F=2-ΔΔCT,ΔΔCT值=(胃癌組目的基因CT值-胃癌組內(nèi)參基因CT值)-(癌旁組目的基因CT值-癌旁組內(nèi)參基因CT值)。實驗結(jié)果顯示,胃癌組織中hrd1及LAT1基因相對表達量高于癌旁正常組織,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3 Western-Blot實驗結(jié)果分別測出各組目的基因條帶與各組內(nèi)參條帶灰度值,兩者比值為相對灰度值,相對灰度值越大者,蛋白表達水平越高。實驗結(jié)果顯示,胃癌組織中hrd1與LAT1蛋白表達水平高于癌旁正常組織,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4 hrd1與LAT1在胃癌組織中表達水平的相關(guān)性分析用hrd1與LAT1相對表達量分析二者表達相關(guān)性,結(jié)果顯示,hrd1與LAT1相對表達量之間存在線性趨勢,根據(jù)SPSS15.0軟件計算出相關(guān)系數(shù)r=0.820(P0.001),可認為胃癌組織中hrd1與LAT1表達水平有正相關(guān)關(guān)系。結(jié)論:hrd1與LAT1在胃癌細胞中表達水平均高于癌旁正常細胞,提示hrd1與LAT1可能在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要的作用。
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2

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