本文關(guān)鍵詞：MiRNA-182調(diào)控RECK在非小細胞肺癌進展中的作用研究

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【摘要】：背景:肺癌是全世界范圍內(nèi)癌癥死亡的最主要原因之一。在我國每年大約有60萬人因為肺癌而死亡。這種較高的死亡率主要歸因于該疾病的不良預(yù)后。發(fā)現(xiàn)診斷晚,不同組織分型的異質(zhì)性,以及對該腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機制認識的不足都是其不良預(yù)后的關(guān)鍵因素。非小細胞肺癌(NSCLC)大約占全部肺癌的80%。深入探討NSCLC發(fā)生發(fā)展過程中的分子作用機制,對NSCLC的診斷、治療和預(yù)后的改善都有著十分重要的臨床意義與價值。MicroRNAs(mi RNAs)作為一類新的癌基因或抑癌基因,其表達失衡與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。近年來,miRNAs與NSCLC發(fā)病的關(guān)系正越來越受關(guān)注,已證實miR-128、mi R-195、miR-483、mi R-451、miR-630等參與了NSCLC的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后密切相關(guān)。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)包括miR-182在內(nèi)的Micro RNAs在肺癌細胞系中異常表達,可能在肺癌的發(fā)生、發(fā)展中有重要作用。目的:觀察miR-182在NSCLC患者血漿和組織中的表達及其生物學(xué)意義,并通過對其靶基因抑癌因子RECK的鑒定,闡明其在NSCLC的增殖、侵襲與轉(zhuǎn)移侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用。旨在為深入探討NSCLC的發(fā)生機制提供新的線索,為篩選NSCLC新的生物標志物和治療靶點提供新的思路。方法:1.實時熒光定量PCR(q RT-PCR)檢測NSCLC細胞系、配對的30例NSCLC癌組織和癌旁正常肺組織樣本、50例NSCLC患者與30例正常健康者的血漿中mi R-182的表達水平,比較分析NSCLC癌組織和正常組織中mi R-182的表達差異、NSCLC患者與正常健康者的血漿中mi R-182的表達水平的差異。整理NSCLC患者的相關(guān)臨床資料,并結(jié)合臨床數(shù)據(jù)分析mi R-182的表達水平與NSCLC患者組織的分化程度、病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TNM分期的關(guān)系。2.在NSCLC細胞株A549和H1299中過表達mi R-182后,測定細胞增殖,侵襲和轉(zhuǎn)移能力。構(gòu)建熒光素酶載體(p MIR-RECK)(含有mi R-182結(jié)合位點的RECK的3'UTR片段),雙熒光素酶活性實驗鑒定RECK是mi R-182的靶基因。在A549細胞系中,過表達miR-182 mimics和inhibitors,檢測RECK和MMP9的蛋白表達水平。qRT-PCR檢測30例配對的NSCLC癌組織和癌旁正常肺組織樣本中的RECK的表達水平。最后分析NSCLC癌組織和正常組織中RECK的表達差異及其與miR-182表達的相關(guān)性。結(jié)果:MiR-182在A549、H1299、PC9和NCI-H460四種肺癌細胞系中的表達顯著高于胎兒肺成纖維細胞系MRC-5。30例NSCLC患者癌組織中miR-182顯著高表達于癌旁正常肺組織(P0.05),且有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中mi R-182的表達水平顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者(P0.05)。NSCLC患者血漿中mi R-182的表達水平顯著高表達于正常健康者血漿中miR-182的表達水平(P0.05)。NSCLC患者血漿mi R-182的表達水平與NSCLC患者的年齡、性別、腫瘤的分化程度、以及腫瘤的病理類型無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。血漿miR-182的表達水平與NSCLC患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。在NSCLC細胞株A549和H1299中過表達mi R-182后促進了NSCLC細胞系的增殖,侵襲以及遷移(P0.01)。共轉(zhuǎn)染miR-182和RECK3'UTR WT組的熒光素酶活性與其他3組相比顯著降低(P0.05),證實miR-182對pMIR-RECK3'UTR表達有抑制作用,且發(fā)揮該抑制功能是通過mi R-182與pMIR-RECK 3'UTR區(qū)結(jié)合實現(xiàn)。MiR-182模擬物顯著下調(diào)了A549細胞中RECK的mRNA(P0.05)和蛋白的表達;MiR-182抑制物顯著上調(diào)了A549細胞中RECK的m RNA(P0.05)和蛋白的表達。RECK在NSCLC癌組織中的表達水平顯著低于癌旁正常肺組織(P0.001),RECK的表達水平與miR-182的表達水平呈負相關(guān)(r=-0.482,P0.01)。結(jié)論:NSCLC患者血漿中mi R-182的表達水平顯著高表達于正常健康者,且與NSCLC患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期相關(guān)且成正相關(guān)。提示miR-182可以用作預(yù)測NSCLC預(yù)后的腫瘤生物標志物。MiR-182能夠增強NSCLC細胞系的增殖,侵襲以及遷移能力,這種作用是通過負調(diào)控RECK信號通路而實現(xiàn)的。
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2

【參考文獻】

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1 Pooja Joshi;Justin Middleton;Young-Jun Jeon;Michela Garofalo;;MicroRNAs in lung cancer[J];World Journal of Methodology;2014年02期

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本文編號：1243670