本文關(guān)鍵詞：原發(fā)性肝癌組織中經(jīng)典HLAⅠ類等位基因特異性mRNA表達(dá)與肝癌細(xì)胞免疫逃逸相關(guān)性的研究

  更多相關(guān)文章： 肝癌 HLAⅠ類等位基因 KIR 免疫逃逸

【摘要】：經(jīng)典HLAⅠ類基因包括HLA-A、-B、-C三個座位,在人群中具有高度多態(tài)性,每個基因座位來自父母的兩種等位基因產(chǎn)物共顯表達(dá)于有核細(xì)胞表面,作為NK細(xì)胞和CTL的重要配體在調(diào)節(jié)免疫效應(yīng)細(xì)胞功能中發(fā)揮著重要作用。細(xì)胞毒性T細(xì)胞(Cytotoxicity T lymphocyte,CTL)和自然殺傷(Natural Killer,NK)細(xì)胞是免疫監(jiān)視中最重要的兩類效應(yīng)細(xì)胞。HLA Ⅰ類分子在調(diào)節(jié)CTL和NK細(xì)胞的殺傷功能中均發(fā)揮了關(guān)鍵作用。CTL殺傷靶細(xì)胞時必須首先識別HLAⅠ類分子遞呈的抗原肽,即T細(xì)胞的MHC限制性。因此經(jīng)典HLA Ⅰ類分子表達(dá)缺失或降低有利于腫瘤細(xì)胞對CTL的免疫逃逸。NK細(xì)胞表面表達(dá)的抑制性殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體(killer cell immunoglobulin-like receptor, KIR),與經(jīng)典HLA Ⅰ類分子結(jié)合后抑制NK細(xì)胞的活化。因此HLAⅠ類分子表達(dá)上調(diào)或者不變有利于腫瘤細(xì)胞對NK細(xì)胞的免疫逃逸。在絕大多數(shù)腫瘤中,經(jīng)典HLAⅠ類分子表達(dá)缺失或降低,使得腫瘤細(xì)胞逃逸CTL殺傷；而在肝癌中發(fā)現(xiàn),絕大多數(shù)肝癌組織的經(jīng)典HLA Ⅰ類分子表達(dá)上調(diào)或不變。不同于外周血及其他臟器,肝臟中NK細(xì)胞的比例約30%,和T細(xì)胞數(shù)目相當(dāng),在NK細(xì)胞和CTL的雙重免疫監(jiān)視下,肝癌細(xì)胞必須具有獨(dú)特的免疫逃逸機(jī)制。由于經(jīng)典HLAⅠ類分子與KIR分子均具有高度多態(tài)性,不同等位基因編碼的經(jīng)典HLA I類分子在調(diào)節(jié)NK細(xì)胞的殺傷活性中發(fā)揮了不同作用,因此,為了逃逸NK細(xì)胞和CTL的殺傷,肝癌中可能存在HLAⅠ類等位基因的選擇性異常表達(dá),即同一位點(diǎn)的兩條等位基因表達(dá)水平變化不同。目前肝癌中經(jīng)典HLA I類等位基因表達(dá)水平的檢測未見報道。我們以原發(fā)性肝細(xì)胞癌為研究對象,首先對肝癌組織標(biāo)本HLA基因和KIR基因進(jìn)行分型,根據(jù)HLA分型結(jié)果設(shè)計HLA-A,-B,-C等位基因特異性定量PCR引物并驗證,然后通過real time PCR對72例原發(fā)性肝癌組織樣本進(jìn)行HLA Ⅰ類等位基因mRNA表達(dá)的檢測,結(jié)合KIR分型結(jié)果探討肝癌細(xì)胞的免疫逃逸機(jī)制。研究結(jié)果如下：1.本實驗利用PCR-SBT方法完成HLA-A、-B、-C基因分型的樣本例數(shù)分別為40例、3l例、72例；PCR-SSP方法完成33例樣本的12個KIR基因分型。2.本實驗完成HLA-A/C等位基因特異性定量PCR引物的設(shè)計與驗證,共設(shè)計完成符合實驗要求的20對HLA-C和4對HLA-A等位基因特異性定量PCR引物。3.本實驗完成80個HLA-A、62個HLA-B及144個HLA-C等位基因mRNA在肝癌和癌旁組織中表達(dá)水平的檢測。結(jié)合本實驗室前期的研究結(jié)果,共統(tǒng)計了144個HLA-A、140個HLA-B、144個HLA-C等位基因]mRNA定量表達(dá)的結(jié)果,其中肝癌相比于癌旁,HLA-A等位基因上調(diào)表達(dá)36.11%,表達(dá)一致47.92%,下調(diào)表達(dá)15.97%；HLA-B等位基因上調(diào)表達(dá)26.43%,表達(dá)一致43.57%,下調(diào)表達(dá)30%；HLA-C等位基因上調(diào)表達(dá)27.78%,表達(dá)一致41.67%,下調(diào)表達(dá)30.55%。4.作為抑制性KIR配體的HLA-Bw4表達(dá)上調(diào)比例(45.46%)高于非KIR配體的HLA-Bw6表達(dá)上調(diào)比例(20.95%),具有統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.006)。抑制性KIR配體HLA-C*03在NK細(xì)胞活性高的KIR-BX個體中上調(diào)比例(62.5%)高于KIR-AA個體中的上調(diào)比例(14.29%),具有統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.011)。綜合以上實驗結(jié)果,我們設(shè)計并驗證完成經(jīng)典HLA I類等位基因特異性的定量PCR引物,能夠定量分析同一HLA基因座位不同等位基因mRNA表達(dá)水平。在72例肝癌和癌旁組織中的研究結(jié)果表明,肝癌細(xì)胞中存在經(jīng)典HLA I類等位基因選擇性得異常表達(dá),且抑制NK細(xì)胞活性的HLA等位基因選擇性高表達(dá),可能是肝癌細(xì)胞在NK細(xì)胞與CTL雙重免疫壓力下的免疫逃逸機(jī)制之一。經(jīng)典HLAⅠ類等位基因特異性定量PCR引物的設(shè)計為同一HLA基因座位不同等位基因mRNA表達(dá)的定量定性分析提供了方法,在HLA表達(dá)相關(guān)的病毒免疫、腫瘤免疫、自身免疫等領(lǐng)域研究中具有重要應(yīng)用價值；HLA基因具有高度多態(tài)性,本研究為深入探討肝癌細(xì)胞免疫逃逸機(jī)制奠定了實驗基礎(chǔ),還需擴(kuò)大樣本量對實驗結(jié)果進(jìn)一步驗證。
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 魏建春;張建中;張恩民;馬鳳琴;張建華;;等位基因特異性PCR方法檢測炭疽芽胞桿菌致死因子基因點(diǎn)突變的評價[J];中國媒介生物學(xué)及控制雜志;2007年05期

2 馬厚勛,牛永紅,李章勇,謝正祥;等位基因特異性引物PCR技術(shù)及其應(yīng)用研究[J];生物技術(shù);2005年01期

3 白春英;史鐵偉;瑞云;于曉明;張朝軍;仝麗娟;李秀君;高麗楓;周靜;;等位基因特異性PCR技術(shù)在5-脂氧合酶基因多態(tài)性檢測中的應(yīng)用[J];山東醫(yī)藥;2012年31期

4 聶燕釵;王斌;趙子琴;周懷谷;;等位基因特異性PCR技術(shù)及其法醫(yī)學(xué)應(yīng)用[J];法醫(yī)學(xué)雜志;2014年04期

5 周代鋒;張云霞;張勇;陳少華;李林江;習(xí)雋麗;王鎮(zhèn);;應(yīng)用等位基因特異性PCR檢測血管緊張素原基因突變[J];海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2010年10期

6 汪澤厚,朱錫華,曾毅,劉素英;人工合成HLA肽對淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響[J];免疫學(xué)雜志;1999年01期

7 高紅;張志波;王維林;張娟;呂良英;黃英;;雙向等位基因特異性PCR快速區(qū)分純合子和雜合子SNP分型的新方法[J];醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志;2008年06期

8 陳巧云;李皓;徐紅美;冷加燕;;CYP17基因多態(tài)性等位基因特異性PCR檢測方法的建立[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志;2011年04期

9 黃代新,楊慶恩,趙貴森;片段長度差異等位基因特異性PCR—一種改良的SNP分型新方法[J];法醫(yī)學(xué)雜志;2005年01期

10 趙貴森,黃代新,馮文芳,楊慶恩;消化后片段長度差異等位基因特異性PCR技術(shù)——印記SNP rs220028多態(tài)性和甲基化模式研究[J];中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志;2005年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 夏勇;周新;鄭芳;涂建成;劉芳;李霞;;等位基因特異性多重PCR技術(shù)對載脂蛋白E基因多態(tài)性檢測的方法學(xué)評價[A];湖北省暨武漢市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會第七屆第十四次學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2003年

2 金嘉琳;翁心華;胡忠義;陳澍;邵凌云;張文宏;;一種用于快速檢測結(jié)核分枝桿菌利福平耐藥株的等位基因特異性多重PCR方法(摘要)[A];中華醫(yī)學(xué)會結(jié)核病學(xué)分會2004年學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 馬厚勛;NOS SNP與EH、HPS譜的關(guān)系及其ASP-PCR檢測技術(shù)[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2005年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 董立麗;SNP對于轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合及基因表達(dá)的影響[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2015年

2 王文君;原發(fā)性肝癌組織中經(jīng)典HLAⅠ類等位基因特異性mRNA表達(dá)與肝癌細(xì)胞免疫逃逸相關(guān)性的研究[D];東南大學(xué);2015年

，

本文編號：1243138