本文關(guān)鍵詞：CPS1與CPS1-IT1在肝內(nèi)膽管癌中的表達(dá)及對(duì)患者預(yù)后影響的研究

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【摘要】：研究目的:肝內(nèi)膽管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC),又被稱(chēng)為膽管細(xì)胞型肝癌。目前,其轉(zhuǎn)移率及術(shù)后復(fù)發(fā)率均較高,故而在臨床工作中,ICC被視為一種高度惡性腫瘤。通常,醫(yī)學(xué)工作者多認(rèn)為ICC來(lái)源于肝內(nèi)膽管被覆上皮。然而,其發(fā)病機(jī)制目前仍存有較多爭(zhēng)議;目前,針對(duì)ICC的腫瘤標(biāo)記物多缺乏特異性及靈敏度,故而在診斷及評(píng)估患者預(yù)后方面也較困難。近年來(lái),針對(duì)ICC發(fā)病機(jī)制及預(yù)后方面的研究正成為世界范圍內(nèi)肝臟腫瘤研究的焦點(diǎn)。另一方面,長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)在表觀遺傳學(xué)修飾、轉(zhuǎn)錄和翻譯調(diào)控、細(xì)胞周期調(diào)控以及分化與凋亡調(diào)控等諸多方面的重要作用在近期研究中得以證實(shí)。值得注意的是,lnc RNA在腫瘤發(fā)生中也起到了極為重要的作用。然而,lnc RNA在ICC中表達(dá)及具體作用機(jī)制方面目前仍缺乏相關(guān)研究。本研究目的在于:首先通過(guò)生物信息學(xué)分析,篩選出一系列在ICC中顯著高表達(dá)的基因或lnc RNA。其次,挑選其中可能有研究意義的因子,之后驗(yàn)證其在ICC組織及細(xì)胞系中的表達(dá),最終探索其對(duì)ICC生物學(xué)行為及臨床病理學(xué)特點(diǎn)的重要影響。研究方法:本研究中,首先利用生物信息學(xué)的方法分析了ICC組織芯片中19850個(gè)基因及5635種lnc RNA的表達(dá)情況。通過(guò)此分析發(fā)現(xiàn):氨甲酰磷酸合成酶1(carbamoyl-phosphate synthase 1,CPS1)的基因與其轉(zhuǎn)錄的lnc RNA——氨甲酰磷酸合成酶1-內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄本1(carbamoyl-phosphate synthase 1 intronic transcript 1,CPS1-IT1)在ICC內(nèi)共同高表達(dá),且表達(dá)量存在顯著相關(guān)性。其次,通過(guò)反轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)、Western-blot、免疫組化、RNA干擾、免疫熒光以及流式細(xì)胞術(shù)等相關(guān)實(shí)驗(yàn),檢測(cè)了31例ICC患者樣本組織和不同肝臟細(xì)胞系中CPS1基因及CPS1-IT1的表達(dá)情況,并測(cè)定了兩者對(duì)ICC細(xì)胞系(ICC-9810)增殖與凋亡的影響。最后,結(jié)合ICC患者臨床數(shù)據(jù),分析了CPS1基因及CPS1-IT1與ICC患者臨床病理學(xué)特征及術(shù)后無(wú)瘤生存率、總生存率的相關(guān)性。結(jié)果:CPS1 m RNA在癌組織中的表達(dá)量與癌旁肝組織相比有升高趨勢(shì)(P=0.09),CPS1-IT1在癌組織中的表達(dá)量與癌旁肝組織相比顯著升高(P=0.001)。CPS1 m RNA及CPS1-IT1的相對(duì)表達(dá)量與癌旁肝組織相比均顯著升高(P值均小于0.001),且兩者的相對(duì)表達(dá)量存在顯著相關(guān)性(P0.001)。免疫組化及Western-blot測(cè)定CPS1蛋白在ICC癌組織中同樣高表達(dá)。通過(guò)RNA干擾降低CPS1和(或)CPS1-IT1表達(dá)水平可以促進(jìn)ICC-9810細(xì)胞系的增殖并降低其凋亡(P0.001)。在臨床數(shù)據(jù)分析方面,結(jié)果提示:當(dāng)CPS1或CPS1-IT1在ICC癌組織中的表達(dá)超過(guò)癌旁肝組織4倍-5倍時(shí),對(duì)ICC患者術(shù)后生存率可有顯著影響。當(dāng)以“4倍”為界限劃分CPS1或CPS1-IT1高表達(dá)組與低表達(dá)組時(shí),CPS1可以顯著影響ICC患者的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化比率(P=0.048)、血清總蛋白水平(P=0.049)、血清間接膽紅素水平(P=0.025)以及術(shù)后無(wú)瘤生存率(P=0.034),在血清總膽紅素水平(P=0.066)以及糖類(lèi)抗原19-9(carbohydrate antigen19-9,CA19-9)陽(yáng)性率(P=0.068)方面有一定的影響趨勢(shì);CPS1-IT1可顯著影響淋巴結(jié)侵犯陽(yáng)性率(P=0.045)、CA19-9陽(yáng)性率(P=0.044)以及術(shù)后無(wú)瘤生存率(P=0.026),并對(duì)術(shù)后總生存率有一定的影響趨勢(shì)(P=0.064)。結(jié)論:CPS1與CPS1-IT1在ICC癌組織內(nèi)共同高表達(dá),且可促進(jìn)ICC細(xì)胞系的增殖并降低其凋亡,由此可知CPS1與CPS1-IT1可能通過(guò)影響ICC細(xì)胞的增殖與凋亡而在ICC的發(fā)生發(fā)展中起重要作用,并可能成為ICC臨床診斷相對(duì)特異的腫瘤標(biāo)記物,為其治療提供新的有效靶點(diǎn)。另外,CPS1與CPS1-IT1的表達(dá)量與ICC患者的肝功能及術(shù)后無(wú)瘤生存率、總生存率相關(guān),故兩者可能成為有效評(píng)估ICC患者預(yù)后的重要指標(biāo)。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R735.8

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1 馬森林;CPS1與CPS1-IT1在肝內(nèi)膽管癌中的表達(dá)及對(duì)患者預(yù)后影響的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2016年

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本文編號(hào)：1242455