發(fā)布時間：2017-12-01 17:24

  本文關(guān)鍵詞：黃芪甲苷對胃癌細胞的作用效果及相關(guān)機制的研究

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【摘要】：目的:胃癌是我國常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一,其死亡居惡性腫瘤前列。導(dǎo)致胃癌患者死亡的原因主要包括兩方面:腫瘤轉(zhuǎn)移性及其產(chǎn)生的化療耐藥性(MDR),也是目前治療的難點。目前研究發(fā)現(xiàn)多種中藥中具有抑制腫瘤侵襲及逆轉(zhuǎn)腫瘤MDR的活性成分。黃芪甲苷(AstragalosideⅣ)是黃芪藥理活性的主要有效物質(zhì),具有治療心腦血管疾病,抗衰老作用、抗炎作用、抗高糖作用等方面的藥理作用。目前研究表明,黃芪甲苷具有抗腫瘤作用,能夠抑制胃癌、肝癌、前列腺癌等腫瘤細胞的增殖,促進其凋亡。本研究觀察了黃芪甲苷體外對胃癌細胞株BGC823的作用,檢測了黃芪甲苷對BGC823細胞侵襲遷移相關(guān)基因MMP-2、MMP-7、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2、nm23基因及蛋白表達和耐藥相關(guān)基因MDR1/P-gp、MRP-1、GST-π、LRP、TS、Bcl-2、Bax基因及蛋白表達的影響,探討黃芪甲苷抑制胃癌侵襲轉(zhuǎn)移、逆轉(zhuǎn)多藥耐藥意義。方法:應(yīng)用細胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)胃癌細胞株BGC823,應(yīng)用MTT法測定不同濃度(0.625、1.25、2.5、5.0、10.0mg/m L)黃芪甲苷對BGC823細胞增殖的影響;劃痕實驗和Transwell侵襲小室實驗檢測黃芪甲苷對BGC823細胞侵襲遷移能力的影響;應(yīng)用熒光定量RT-PCR和Western blot檢測干預(yù)前后侵襲遷移相關(guān)基因MMP-2、MMP-7、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2、nm23 m RNA及蛋白的表達變化;根據(jù)以上結(jié)果,利用MTT法測定10μg/ml 5-FU、10μg/ml 5-FU+5.0mg/m L黃芪甲苷對BGC823細胞的活性影響;取對數(shù)生長期的胃癌細胞株BGC823分二組:對照組(培養(yǎng)液)和黃芪甲苷組(5μg/ml黃芪甲苷)干預(yù)48 h后細胞,應(yīng)用熒光定量PCR和Western blot檢測兩組中耐藥相關(guān)基因MDR1/P-gp、MRP-1、GST-π、TS、Bcl-2、Bax m RNA及蛋白的表達變化。結(jié)果:1黃芪甲苷對胃癌細胞侵襲遷移能力的影響及機制1.1黃芪甲苷抑制胃癌細胞株BGC823增殖MTT實驗結(jié)果顯示0.625、1.25、2.5、5.0、10.0μg/ml黃芪甲苷分別孵育24、48、72 h時對BGC823細胞增殖有抑制作用,隨著作用時間的延長和劑量的增大抑制作用明顯增強。根據(jù)以上結(jié)果發(fā)現(xiàn),黃芪甲苷濃度5μg/ml作用48 h更接近IC50,因此選黃芪甲苷濃度5μg/ml作用48 h進行以下的實驗。1.2黃芪甲苷對胃癌細胞BGC823遷移及侵襲的影響劃痕實驗觀察5μg/ml黃芪甲苷干預(yù)BGC823細胞后細胞遷移能力變化,結(jié)果顯示,5μg/ml黃芪甲苷干預(yù)的BGC823細胞遷移抑制率較與對照組相比明顯降低(P0.05)。Transwell小室侵襲實驗檢測結(jié)果顯示,5μg/ml黃芪甲苷作用BGC823細胞后穿透Matrigel膠的細胞數(shù)與對照組相比明顯減少(P0.05)。1.3黃芪甲苷對胃癌細胞BGC823侵襲相關(guān)基因表達的影響黃芪甲苷(5μg/ml)作用BGC823細胞48 h后,BGC823中MMP-2、MMP-7、MMP-9m RNA及蛋白表達較對照組降低(均P0.05),TIMP-1、nm23 m RNA及蛋白表達較對照組增高(均P0.05),TIMP-2變化不明顯(P0.05)。2黃芪甲苷對胃癌細胞耐藥性的影響及機制2.1 MTT測定黃芪甲苷影響人胃癌細胞BGC823對5-FU的抵抗作用MTT結(jié)果顯示5-FU組、5-FU+黃芪甲苷組細胞活性低于對照組,并且5-FU+黃芪甲苷組細胞活性低于5-FU組(P0.05)。2.2黃芪甲苷對胃癌細胞株BGC823耐藥基因表達的影響黃芪甲苷(5μg/mL)作用BGC823細胞48 h后檢測耐藥相關(guān)基因,黃芪甲苷作用后BGC823中MDR1/P-gp、MRP-1、Bcl-2 m RNA及蛋白表達較對照組降低(均P0.05),Bax m RNA及蛋白表達較對照組增高(P0.05),GST-π、TS變化不明顯(P0.05)。結(jié)論:1黃芪甲苷具有抑制胃癌細胞BGC823增殖,并抑制其遷移、侵襲的作用,其機制可能與下調(diào)MMP-2、MMP-7、MMP-9表達及上調(diào)TIMP-1、nm23表達有關(guān)。2黃芪甲苷可能通過下調(diào)MDR1/P-gp、MRP-1、Bcl-2表達,上調(diào)Bax表達增加胃癌細胞對化療藥物的敏感性,逆轉(zhuǎn)其耐藥。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.2

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號：1241885