本文關(guān)鍵詞：p53在二甲雙胍誘導(dǎo)乳腺癌細胞凋亡和衰老中的作用

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【摘要】：目的:TP53(Tumor protein p53)作為抑癌基因在乳腺癌細胞中的突變是普遍存在的。而二甲雙胍的腫瘤抑制效應(yīng)在TP53突變的乳腺癌細胞株中的作用尚不明確。本實驗主要研究乳腺癌細胞株中p53狀態(tài)在二甲雙胍誘導(dǎo)的乳腺癌細胞生長抑制、衰老和凋亡中的調(diào)節(jié)作用。材料和方法:使用人乳腺癌細胞株MCF-7、MCF-7/Sip53和MDA-MB-231作為研究對象。這三種乳腺癌細胞株的p53狀態(tài)分別為:MCF-7,p53野生型;MCF-7/Sip53,p53敲除型;MDA-MB-231,p53突變型。本研究采用MTT法來檢測細胞生長、增殖能力及對藥物的敏感性。采用Western blot方法檢測經(jīng)過藥物處理后不同p53狀態(tài)的乳腺癌細胞蛋白水平的改變。使用β-半乳糖苷酶細胞染色試劑盒檢測藥物誘導(dǎo)不同p53狀態(tài)的乳腺癌細胞衰老的程度。使用細胞凋亡檢測ELISA試劑盒來檢測藥物誘導(dǎo)不同p53狀態(tài)的乳腺癌細胞凋亡的程度。采用RT-PCR方法來檢測不同p53狀態(tài)的乳腺癌細胞經(jīng)過藥物處理后m RNA表達水平的改變。結(jié)果:1.通過濃度梯度的二甲雙胍(0.1,0.3,1,3,10,20 m M)分別處理人乳腺癌p53野生型細胞MCF-7、p53敲除型細胞MCF-7/Sip53、p53突變型細胞MDA-MB-231 5天,這三種細胞對二甲雙胍敏感性從高到低依次為:p53野生型細胞MCF-7、p53敲除型細胞MCF-7/Sip53、p53突變型細胞MDA-MB-231。2.通過不同濃度的二甲雙胍(0,1,3,10 m M)分別處理MCF-7、MCF-7/Sip53 48小時,western blot結(jié)果顯示:MCF-7細胞中p53及其下游蛋白p21、bax蛋白水平呈劑量依賴性上調(diào)趨勢,而MCF-7/Sip53細胞中,p53及其下游蛋白水平未隨藥物處理而發(fā)生明顯變化。3.p53激活劑nutlin-3α能夠增強p53野生型乳腺癌細胞中二甲雙胍所誘導(dǎo)的乳腺癌細胞的生長抑制、衰老和凋亡作用,而在p53敲除型的乳腺癌細胞株中未見到該效應(yīng)。4.另一種p53激活劑CP/31398不僅能夠在一定程度上增強p53野生型乳腺癌細胞中二甲雙胍誘導(dǎo)的乳腺癌細胞的生長抑制、衰老和凋亡作用,還能夠增強p53突變型乳腺癌細胞中二甲雙胍誘導(dǎo)的乳腺癌細胞的生長抑制、衰老和凋亡作用。5.在p53突變型細胞MDA-MB-231中重表達野生型p53能夠恢復(fù)二甲雙胍對乳腺癌細胞的生長抑制作用。6.通過不同濃度的二甲雙胍處理MCF-7和MCF-7/Sip53 48小時,western blot結(jié)果顯示,磷酸化AMPK和磷酸化m TOR在p53野生型人乳腺癌細胞MCF-7中隨著二甲雙胍處理濃度升高表達增強,而在p53敲除型人乳腺癌細胞MCF-7/Sip53中,上述兩種蛋白表達水平未見有明顯變化。7.二甲雙胍類似物苯乙雙胍仍需通過野生型p53對乳腺癌細胞起到生長抑制、衰老和凋亡的作用。結(jié)論:二甲雙胍能夠誘導(dǎo)人乳腺癌細胞生長抑制、衰老和凋亡作用的必要條件是細胞中表達野生型p53。p53的激活劑nutlin-3α?和CP/31398可以協(xié)同二甲雙胍誘導(dǎo)乳腺癌細胞的生長抑制,衰老和凋亡。二甲雙胍和p53激活劑nutlin-3α或CP/31398的聯(lián)合應(yīng)用可能是對乳腺癌治療一種更好的干預(yù)措施。二甲雙胍通過調(diào)節(jié)AMPK和m TOR信號通路來調(diào)節(jié)人乳腺癌細胞中p53的水平。
【學(xué)位授予單位】：河南科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9

【共引文獻】

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本文編號：1241142