本文關鍵詞：CDK抑制劑SNS-032對急性髓系白血病的殺傷作用及機制研究

  更多相關文章： CDK抑制劑 SNS-032 白血病 凋亡 IL-6 JAK/STAT3

【摘要】：研究背景 急性髓細胞白血病(AML)是造血細胞惡性克隆性病變,其特點是白血病細胞在骨髓顯著增生,抑制正常造血。成人AML的發(fā)生率明顯高于急性淋巴細胞白血病,是最常見的急性白血��；并隨年齡的增長而增加。目前采用聯(lián)合化療、造血干細胞移植等手段延長患者生存期,但仍有很大一部分患者無法耐受大劑量化療副作用,或使用常規(guī)藥物無效,最終復發(fā)。惡性腫瘤靶向藥物研究是白血病治療研究領域的熱點,目前已有多種小分子抑制劑治療AML進入臨床研究。細胞周期蛋白依賴性激酶(CDK)在調控細胞周期和基因轉錄中起重要作用,AML常有CDK活性異常增高,因此CDK抑制劑可能在治療AML中發(fā)揮重要作用。 目的 1、研究CDK抑制劑SNS-032在體外對AML細胞株的生長抑制作用； 2、研究小分子抑制劑SNS-032對AML細胞的誘導凋亡作用； 3、研究白細胞介素6能否逆轉SNS-032對AML的殺傷作用,從而克服耐藥； 4、通過基因芯片和蛋白印跡實驗研究SNS-032對白血病細胞殺傷的分子機制。 方法 1、臺盼藍染色法檢測細胞活性。收集藥物處理后的細胞,臺盼藍染色后,通過顯微鏡下直接計數,就可以對細胞存活率進行比較精確的定量。 2、應用MTT法,檢測SNS-032對白血病細胞株生長抑制作用。 3、應用流式細胞儀,檢測SNS-032作用后白血病細胞的凋亡情況。 4、基因芯片分析miRNA,檢測SNS-032作用前后microRNA (miRNA)表達水平。 5、應用Western blot,檢測SNS-032作用后JAK2/STAT3蛋白和CDK下游抗凋亡蛋白Mcl-1和c-myc表達情況以及IL-6對試驗組JAK2/STST3蛋白表達的影響。 6、統(tǒng)計分析,應用Prime4軟件統(tǒng)計,比較采用Dunnett-t法。 實驗結果 1、 SNS-032對人AML不同細胞株的生長抑制作用：我們采用臺盼藍染色,通過人AML細胞株用藥前及不同濃度下用藥24h、48h后的拒染率分析,闡述不同人AML細胞株對SNS-032作用的反應。SNS-032濃度分別為25nmol/L、50nmol/L、100nmol/L,結果顯示,SNS-032對各細胞株均有生長抑制作用,且呈濃度依賴性；其中MV4-11、U937細胞株生長抑制尤為明顯,MV4-11細胞株24小時100nmol/L藥物作用后平均拒染率為67.3%,48小時拒染率為53%,U937細胞株24小時100nmol/L藥物作用后平均拒染率為71.7%,48小時拒染率為53.4%。 2、 SNS-032對人AML細胞株的誘導凋亡作用：采用流式細胞儀檢測不同濃度SNS-032(100nmol/L、200nmol/L)作用于人AML細胞株24h,細胞的數量百分比變化,結果顯示,SNS-032為100nmmol/L時,細胞凋亡率達12.1%,當SNS-032為200nmmol/L時凋亡率達59.4%,提示凋亡細胞呈濃度依賴性。 3、 SNS-032對人AML細胞株miRNA的影響：應用microRNA(miR)芯片分析SNS-032作用前后miR的差異表達,結果發(fā)現(xiàn),SNS-032顯著下調miR-30a、miR-183、miR-20b、miR-20a、miR-589、miR-107、miR-181a、 miR-106a、miR-17、miR-378c的表達水平,顯著上調has-miR-320a。 4、 SNS-032對JAK/STST3途徑相關蛋白的抑制作用：應用Western-blot技術檢測SNS-032對JAK/STAT3蛋白表達的作用,結果顯示SNS-032顯著抑制JAK蛋白表達,抑制STAT3的磷酸化水平。此外,SNS-032對CDK下游抗凋亡蛋白Mcl-1和c-myc也有顯著的抑制作用。 5、(5)IL-6對SNS-032對白血病細胞作用的影響：應用Western-blot技術,對試驗組聯(lián)合IL-6進行分析,發(fā)現(xiàn)IL-6在HL-60細胞組可輕度上調JAK2和磷酸化STAT3,但不能逆轉SNS-032對其的抑制作用,但在KG-1細胞株實驗中IL-6輕度上調JAK2,明顯激活STAT3,聯(lián)合用藥后能部分逆轉對STAT3的激活作用。 結論 1、 SNS-032對多種人AML細胞株有生長抑制作用,呈時間-劑量依賴性。 2、 IL-6不能逆轉SNS-032對AML細胞株HL-60的生長抑制作用,提示其可以克服耐藥。 3、新型CDK抑制劑SNS-032能誘導AML細胞凋亡,濃度為200nM是能顯著誘導HL-60細胞凋亡。 4、 SNS-032顯著下調HL-60細胞miR-30a、miR-183、miR-20b、miR-26b、 miR-20a、miR-589、miR-107、miR-181a、miR-106a、miR-17和miR-378c的表達水平,顯著上調hsa-miR-320a和miR-H7* 5、 SNS-032能顯著抑制JAK/STAT3途徑相關蛋白和CDK下游抗凋亡蛋白Mcl-1和c-myc的表達。 6、HL-60細胞株中SNS-032對JAK/STAT3的抑制作用不被IL-6逆轉。
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R733.71

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前1條

1 ;Synthesis and antitumor activity of 7-azaindirubin[J];Chinese Chemical Letters;2009年05期

，

本文編號：1238687