本文關鍵詞：乳腺癌中過表達BAG-1基因與ER表達相關性的研究

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【摘要】：目的:雌激素受體(estrogen receptor,ER)、孕激素受體(progesterone receptor,PR)和人類表皮生長因子受體-2(Human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)表達水平與內(nèi)分泌治療、靶向治療密切相關,是乳腺癌患者預后的重要指標。他莫昔芬作為內(nèi)分泌治療的代表藥物分別被廣泛用于ER和/或PR陽性的患者,然而內(nèi)分泌耐藥的出現(xiàn)給乳腺癌患者的治療增加了困難,且目前對與ER相關的基因知之甚少;BAG-1是一種可顯著促進Bcl-2抗凋亡作用的抗凋亡基因,由Takayama等在尋找Bcl-2蛋白和活化的糖皮質(zhì)激素受體的結合蛋白時發(fā)現(xiàn),有研究報道BAG-1可增強ER表達,并且BAG-1影響ER陽性乳腺癌患者的預后;我們前期的研究也發(fā)現(xiàn)在ER陽性乳腺癌患者中BAG-1高表達,且有統(tǒng)計學意義,現(xiàn)本研究通過過表達BAG-1(Bcl-2 associated athanogene-1)基因檢測ER表達變化以及人乳腺癌細胞系對內(nèi)分泌藥物的敏感性變化,期望發(fā)現(xiàn)與內(nèi)分泌治療相關的新靶點。方法:選取ER(+)的人乳腺癌細胞系T47D及ER(-)的人乳腺癌細胞系SK-BR-3,采用real-time PCR技術檢測BAG-1、ER在m RNA水平的表達,用Western blotting技術檢測其在蛋白水平表達;選用BAG-1上調(diào)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染T47D細胞,48h后用Western blotting及Real-time PCR技術檢測BAG-1表達變化;并用MTT分別檢測BAG-1表達上調(diào)組及空質(zhì)粒組乳腺癌細胞在不同他莫昔芬藥物濃度下的存活率,FACS檢測細胞轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒、上調(diào)質(zhì)粒后在他莫昔芬藥物作用下的凋亡率和細胞周期變化,Western blotting及Real-time PCR技術分別檢測ER在蛋白質(zhì)和m RNA水平的變化,Co-IP檢測BAG-1與ER之間關系。結果:1、Western blotting檢測SK-BR-3及T47D乳腺癌細胞中均有BAG-1表達,且T47D細胞系中表達高于SK-BR-3細胞系;Western blotting未檢測到SK-BR-3細胞系中ER表達,在T47D細胞系中檢測到ER表達。Real-time PCR實驗發(fā)現(xiàn)T47D細胞系中BAG-1及ER表達水平均高于SK-BR-3細胞系。為進一步研究BAG-1基因與ER的關系,我們選擇了BAG-1、ER均有表達的T47D細胞系繼續(xù)下一步試驗。2、Realtime-PCR證實轉(zhuǎn)染入BAG-1重組質(zhì)粒的T47D細胞BAG-1表達量較空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組升高(P0.05),Western blotting發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染入BAG-1質(zhì)粒組的T47D細胞BAG-1蛋白表達量較空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組顯著升高。3、Western blotting發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染入BAG-1重組質(zhì)粒組的T47D細胞ER蛋白表達量較空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組升高,Real-time PCR實驗發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)染入BAG-1重組質(zhì)粒的T47D細胞,ER在m RNA水平顯著升高。4、MTT結果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒和BAG-1重組質(zhì)粒后,ER(+)乳腺癌細胞均隨4-OH TAM藥物濃度增加細胞存活率降低,在相同藥物濃度作用下,轉(zhuǎn)染過表達質(zhì)粒的乳腺癌細胞較轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的乳腺癌細胞對4-OH TAM藥物敏感性增加,且在藥物濃度為14μmol/ml時,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05);用14μmol/ml濃度的藥物處理48小時后,流式細胞術檢測細胞凋亡發(fā)現(xiàn),BAG-1重組質(zhì)粒組的凋亡率較轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒對照組增多(7.700±1.69706%vs.5.55±0.77782%),經(jīng)統(tǒng)計學分析差異顯著(p0.01),流式細胞術檢測細胞周期發(fā)現(xiàn)BAG-1重組質(zhì)粒組細胞阻滯于G0/G1期較轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒對照組增多(69.1850±0.70004 vs.64.385±0.12021),經(jīng)統(tǒng)計學分析差異顯著(p0.01)。5、免疫共沉淀實驗未發(fā)現(xiàn)BAG-1蛋白與ER表達存在直接聯(lián)系。結論:我們的實驗發(fā)現(xiàn),人為的過表達BAG-1基因可以上調(diào)乳腺癌細胞系中ER的m RNA和蛋白表達水平,提示BAG-1的表達或與乳腺癌細胞ER的表達水平相關。且升高ER(+)乳腺癌細胞中BAG-1的表達水平能增強4-OH TAM對乳腺癌細胞生長抑制,增加其凋亡比率,并將細胞阻滯于G1期,提示BAG-1可能與乳腺癌細胞對內(nèi)分泌治療藥物TAM的敏感性相關。但我們的實驗并未觀察到BAG-1與ER有直接相互作用的證據(jù),提示我們BAG-1與ER之間的相互關系仍需進一步研究證實,或可為解釋BAG-1與乳腺癌細胞的4-OH TAM敏感性的相關性機制提供理論依據(jù)。
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9

【參考文獻】

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1 林娟;王躍珍;;乳腺癌內(nèi)分泌治療研究進展[J];腫瘤學雜志;2013年11期

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本文編號：1238487