發(fā)布時(shí)間：2017-11-30 07:14

  本文關(guān)鍵詞：乳腺癌中過(guò)表達(dá)BAG-1基因與ER表達(dá)相關(guān)性的研究

  更多相關(guān)文章： 乳腺癌 BAG-1 ER HER-2 內(nèi)分泌治療 靶向治療

【摘要】：目的:雌激素受體(estrogen receptor,ER)、孕激素受體(progesterone receptor,PR)和人類(lèi)表皮生長(zhǎng)因子受體-2(Human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)表達(dá)水平與內(nèi)分泌治療、靶向治療密切相關(guān),是乳腺癌患者預(yù)后的重要指標(biāo)。他莫昔芬作為內(nèi)分泌治療的代表藥物分別被廣泛用于ER和/或PR陽(yáng)性的患者,然而內(nèi)分泌耐藥的出現(xiàn)給乳腺癌患者的治療增加了困難,且目前對(duì)與ER相關(guān)的基因知之甚少;BAG-1是一種可顯著促進(jìn)Bcl-2抗凋亡作用的抗凋亡基因,由Takayama等在尋找Bcl-2蛋白和活化的糖皮質(zhì)激素受體的結(jié)合蛋白時(shí)發(fā)現(xiàn),有研究報(bào)道BAG-1可增強(qiáng)ER表達(dá),并且BAG-1影響ER陽(yáng)性乳腺癌患者的預(yù)后;我們前期的研究也發(fā)現(xiàn)在ER陽(yáng)性乳腺癌患者中BAG-1高表達(dá),且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,現(xiàn)本研究通過(guò)過(guò)表達(dá)BAG-1(Bcl-2 associated athanogene-1)基因檢測(cè)ER表達(dá)變化以及人乳腺癌細(xì)胞系對(duì)內(nèi)分泌藥物的敏感性變化,期望發(fā)現(xiàn)與內(nèi)分泌治療相關(guān)的新靶點(diǎn)。方法:選取ER(+)的人乳腺癌細(xì)胞系T47D及ER(-)的人乳腺癌細(xì)胞系SK-BR-3,采用real-time PCR技術(shù)檢測(cè)BAG-1、ER在m RNA水平的表達(dá),用Western blotting技術(shù)檢測(cè)其在蛋白水平表達(dá);選用BAG-1上調(diào)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染T47D細(xì)胞,48h后用Western blotting及Real-time PCR技術(shù)檢測(cè)BAG-1表達(dá)變化;并用MTT分別檢測(cè)BAG-1表達(dá)上調(diào)組及空質(zhì)粒組乳腺癌細(xì)胞在不同他莫昔芬藥物濃度下的存活率,FACS檢測(cè)細(xì)胞轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒、上調(diào)質(zhì)粒后在他莫昔芬藥物作用下的凋亡率和細(xì)胞周期變化,Western blotting及Real-time PCR技術(shù)分別檢測(cè)ER在蛋白質(zhì)和m RNA水平的變化,Co-IP檢測(cè)BAG-1與ER之間關(guān)系。結(jié)果:1、Western blotting檢測(cè)SK-BR-3及T47D乳腺癌細(xì)胞中均有BAG-1表達(dá),且T47D細(xì)胞系中表達(dá)高于SK-BR-3細(xì)胞系;Western blotting未檢測(cè)到SK-BR-3細(xì)胞系中ER表達(dá),在T47D細(xì)胞系中檢測(cè)到ER表達(dá)。Real-time PCR實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)T47D細(xì)胞系中BAG-1及ER表達(dá)水平均高于SK-BR-3細(xì)胞系。為進(jìn)一步研究BAG-1基因與ER的關(guān)系,我們選擇了BAG-1、ER均有表達(dá)的T47D細(xì)胞系繼續(xù)下一步試驗(yàn)。2、Realtime-PCR證實(shí)轉(zhuǎn)染入BAG-1重組質(zhì)粒的T47D細(xì)胞BAG-1表達(dá)量較空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組升高(P0.05),Western blotting發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染入BAG-1質(zhì)粒組的T47D細(xì)胞BAG-1蛋白表達(dá)量較空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組顯著升高。3、Western blotting發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染入BAG-1重組質(zhì)粒組的T47D細(xì)胞ER蛋白表達(dá)量較空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組升高,Real-time PCR實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)染入BAG-1重組質(zhì)粒的T47D細(xì)胞,ER在m RNA水平顯著升高。4、MTT結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒和BAG-1重組質(zhì)粒后,ER(+)乳腺癌細(xì)胞均隨4-OH TAM藥物濃度增加細(xì)胞存活率降低,在相同藥物濃度作用下,轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)質(zhì)粒的乳腺癌細(xì)胞較轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的乳腺癌細(xì)胞對(duì)4-OH TAM藥物敏感性增加,且在藥物濃度為14μmol/ml時(shí),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);用14μmol/ml濃度的藥物處理48小時(shí)后,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡發(fā)現(xiàn),BAG-1重組質(zhì)粒組的凋亡率較轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒對(duì)照組增多(7.700±1.69706%vs.5.55±0.77782%),經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異顯著(p0.01),流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期發(fā)現(xiàn)BAG-1重組質(zhì)粒組細(xì)胞阻滯于G0/G1期較轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒對(duì)照組增多(69.1850±0.70004 vs.64.385±0.12021),經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異顯著(p0.01)。5、免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)BAG-1蛋白與ER表達(dá)存在直接聯(lián)系。結(jié)論:我們的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),人為的過(guò)表達(dá)BAG-1基因可以上調(diào)乳腺癌細(xì)胞系中ER的m RNA和蛋白表達(dá)水平,提示BAG-1的表達(dá)或與乳腺癌細(xì)胞ER的表達(dá)水平相關(guān)。且升高ER(+)乳腺癌細(xì)胞中BAG-1的表達(dá)水平能增強(qiáng)4-OH TAM對(duì)乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制,增加其凋亡比率,并將細(xì)胞阻滯于G1期,提示BAG-1可能與乳腺癌細(xì)胞對(duì)內(nèi)分泌治療藥物TAM的敏感性相關(guān)。但我們的實(shí)驗(yàn)并未觀察到BAG-1與ER有直接相互作用的證據(jù),提示我們BAG-1與ER之間的相互關(guān)系仍需進(jìn)一步研究證實(shí),或可為解釋BAG-1與乳腺癌細(xì)胞的4-OH TAM敏感性的相關(guān)性機(jī)制提供理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 林娟;王躍珍;;乳腺癌內(nèi)分泌治療研究進(jìn)展[J];腫瘤學(xué)雜志;2013年11期

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本文編號(hào)：1238487