本文關(guān)鍵詞：染色體6q22.2區(qū)域基因多態(tài)性與肺癌易感性的關(guān)聯(lián)研究

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【摘要】：目的在我國,肺癌是常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率和死亡率均居首位。肺癌的發(fā)生是一個復(fù)雜的過程,受到環(huán)境因素和遺傳因素的影響。全基因組關(guān)聯(lián)研究(GWAS)對整個基因組的變異進行分析,被認為是研究復(fù)雜疾病的一種有效方法。近年來GWAS研究已經(jīng)確定了多個與肺癌易感性有關(guān)的多態(tài)位點,但是這些位點的生物學(xué)功能仍然未知,后GWAS的功能SNP的研究至關(guān)重要,為肺癌的分子機制研究提供依據(jù)。本研究對前期GWAS發(fā)現(xiàn)的肺癌易感性位點rs9387478進行連鎖不平衡分析,通過病例對照關(guān)聯(lián)研究和功能研究揭示其分子機制。方法本研究對前期GWAS發(fā)現(xiàn)的肺癌易感性位點rs9387478進行連鎖不平衡分析,篩選出4個具有潛在功能的SNP位點(rs17079281、rs6911915、rs9320604、rs4946259)進行進一步病例對照研究和功能探索。從天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院組織庫選取經(jīng)病理組織學(xué)確診的766例病例;773例對照來自同期健康體檢人群,與病例組按性別和年齡進行頻數(shù)匹配。通過查閱患者病歷獲得臨床病理資料,電話或查閱門診記錄方法獲得隨訪信息,對照組的一般情況通過現(xiàn)場問卷調(diào)查獲得。收集病例組和對照組的血標本提取基因組DNA,利用Taqman探針基因分型技術(shù)檢測SNP位點的基因型。結(jié)合臨床資料,采用多因素非條件logistic回歸和COX回歸分析在共顯性模型、顯性模型、隱形模型中基因多態(tài)性與肺癌發(fā)病和預(yù)后的關(guān)系。利用生物學(xué)信息預(yù)測與肺癌易感性有關(guān)SNP的潛在功能。熒光素酶報告基因?qū)嶒灆z測基因多態(tài)性對靶基因轉(zhuǎn)錄活性的影響。收集253例肺癌組織標本,用實時熒光定量PCR方法檢測肺癌組織中DCBLD1、YY1 m RNA的表達并分析其與基因多態(tài)性及患者臨床病理學(xué)特征的關(guān)系。在肺癌細胞A549和H1299中,用RNAi MAX轉(zhuǎn)染DCBLD1 si RNA下調(diào)DCBLD1的表達,用Lipofectamine 3000轉(zhuǎn)染YY1過表達質(zhì)粒上調(diào)YY1的表達。MTT、細胞劃痕和Transwell遷移及侵襲實驗分析DCBLD1和YY1對肺癌細胞增殖、遷移和侵襲能力的影響。結(jié)果本研究選取4個與SNP rs9387478高度連鎖不平衡(D’0.8)的多態(tài)性位點進行基因型檢測和統(tǒng)計分析。結(jié)果顯示除了rs9320604、rs4946259外,rs17079281、rs6911915均符合HWE平衡(P0.05)。病例對照研究分析發(fā)現(xiàn)在共顯性模型中rs17079281、rs6911915與肺癌的發(fā)病危險有關(guān);與攜帶rs17079281CC基因型相比,CT基因型的攜帶者有較低的發(fā)病危險(OR=0.74;95%CI:0.58-0.94);rs6911915 CT基因型與TT基因型相比,肺癌發(fā)病風(fēng)險較低(OR=0.77;95%CI:0.59-0.99);rs9320604、rs4946259與肺癌發(fā)病風(fēng)險無關(guān)。在顯性模型中分析發(fā)現(xiàn)與rs17079281 CC基因型相比,T基因型攜帶者有較低的肺癌發(fā)病風(fēng)險(OR=0.78;95%CI:0.63-0.98);其他多態(tài)性位點與肺癌發(fā)病風(fēng)險無關(guān)�；蚺c環(huán)境的交互作用分析發(fā)現(xiàn)4個基因多態(tài)性位點與吸煙的相乘交互作用沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。本研究未發(fā)現(xiàn)與肺癌預(yù)后有統(tǒng)計學(xué)關(guān)聯(lián)的多態(tài)性位點。生物學(xué)信息預(yù)測發(fā)現(xiàn)多態(tài)性位點rs17079281影響轉(zhuǎn)錄因子YY1與DCBLD1啟動子區(qū)的結(jié)合;熒光素酶luciferase報告基因?qū)嶒灲Y(jié)果顯示轉(zhuǎn)錄因子YY1與rs17079281 T等位基因結(jié)合,抑制轉(zhuǎn)錄活性。攜帶T等位基因與CC基因型相比,肺癌組織中DCBLD1m RNA表達量有下調(diào)的趨勢,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。DCBLD1m RNA表達量在不同性別、吸煙狀態(tài)、病理學(xué)類型間存在統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);YY1m RNA表達量在不同性別、吸煙狀態(tài)、病理學(xué)類型、臨床分期中存在統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。體外功能實驗結(jié)果顯示下調(diào)DCBLD1的表達A549和H1299的遷移和侵襲能力;上調(diào)YY1的表達抑制肺癌細胞的增殖、遷移和侵襲能力。結(jié)論DCBLD1啟動子區(qū)SNP rs17079281與肺癌發(fā)病風(fēng)險相關(guān),影響轉(zhuǎn)錄因子YY1與啟動子區(qū)的結(jié)合,調(diào)控DCBLD1基因的表達。DCBLD1和YY1的異常表達影響肺癌細胞A549和H1299細胞的腫瘤生物學(xué)行為。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2
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本文編號：1236491