本文關(guān)鍵詞：染色體6q22.2區(qū)域基因多態(tài)性與肺癌易感性的關(guān)聯(lián)研究

  更多相關(guān)文章： 肺腫瘤 GWAS 后GWAS SNP 轉(zhuǎn)錄因子

【摘要】：目的在我國(guó),肺癌是常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率和死亡率均居首位。肺癌的發(fā)生是一個(gè)復(fù)雜的過程,受到環(huán)境因素和遺傳因素的影響。全基因組關(guān)聯(lián)研究(GWAS)對(duì)整個(gè)基因組的變異進(jìn)行分析,被認(rèn)為是研究復(fù)雜疾病的一種有效方法。近年來GWAS研究已經(jīng)確定了多個(gè)與肺癌易感性有關(guān)的多態(tài)位點(diǎn),但是這些位點(diǎn)的生物學(xué)功能仍然未知,后GWAS的功能SNP的研究至關(guān)重要,為肺癌的分子機(jī)制研究提供依據(jù)。本研究對(duì)前期GWAS發(fā)現(xiàn)的肺癌易感性位點(diǎn)rs9387478進(jìn)行連鎖不平衡分析,通過病例對(duì)照關(guān)聯(lián)研究和功能研究揭示其分子機(jī)制。方法本研究對(duì)前期GWAS發(fā)現(xiàn)的肺癌易感性位點(diǎn)rs9387478進(jìn)行連鎖不平衡分析,篩選出4個(gè)具有潛在功能的SNP位點(diǎn)(rs17079281、rs6911915、rs9320604、rs4946259)進(jìn)行進(jìn)一步病例對(duì)照研究和功能探索。從天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院組織庫選取經(jīng)病理組織學(xué)確診的766例病例;773例對(duì)照來自同期健康體檢人群,與病例組按性別和年齡進(jìn)行頻數(shù)匹配。通過查閱患者病歷獲得臨床病理資料,電話或查閱門診記錄方法獲得隨訪信息,對(duì)照組的一般情況通過現(xiàn)場(chǎng)問卷調(diào)查獲得。收集病例組和對(duì)照組的血標(biāo)本提取基因組DNA,利用Taqman探針基因分型技術(shù)檢測(cè)SNP位點(diǎn)的基因型。結(jié)合臨床資料,采用多因素非條件logistic回歸和COX回歸分析在共顯性模型、顯性模型、隱形模型中基因多態(tài)性與肺癌發(fā)病和預(yù)后的關(guān)系。利用生物學(xué)信息預(yù)測(cè)與肺癌易感性有關(guān)SNP的潛在功能。熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測(cè)基因多態(tài)性對(duì)靶基因轉(zhuǎn)錄活性的影響。收集253例肺癌組織標(biāo)本,用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)肺癌組織中DCBLD1、YY1 m RNA的表達(dá)并分析其與基因多態(tài)性及患者臨床病理學(xué)特征的關(guān)系。在肺癌細(xì)胞A549和H1299中,用RNAi MAX轉(zhuǎn)染DCBLD1 si RNA下調(diào)DCBLD1的表達(dá),用Lipofectamine 3000轉(zhuǎn)染YY1過表達(dá)質(zhì)粒上調(diào)YY1的表達(dá)。MTT、細(xì)胞劃痕和Transwell遷移及侵襲實(shí)驗(yàn)分析DCBLD1和YY1對(duì)肺癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的影響。結(jié)果本研究選取4個(gè)與SNP rs9387478高度連鎖不平衡(D’0.8)的多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行基因型檢測(cè)和統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果顯示除了rs9320604、rs4946259外,rs17079281、rs6911915均符合HWE平衡(P0.05)。病例對(duì)照研究分析發(fā)現(xiàn)在共顯性模型中rs17079281、rs6911915與肺癌的發(fā)病危險(xiǎn)有關(guān);與攜帶rs17079281CC基因型相比,CT基因型的攜帶者有較低的發(fā)病危險(xiǎn)(OR=0.74;95%CI:0.58-0.94);rs6911915 CT基因型與TT基因型相比,肺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)較低(OR=0.77;95%CI:0.59-0.99);rs9320604、rs4946259與肺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無關(guān)。在顯性模型中分析發(fā)現(xiàn)與rs17079281 CC基因型相比,T基因型攜帶者有較低的肺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(OR=0.78;95%CI:0.63-0.98);其他多態(tài)性位點(diǎn)與肺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無關(guān)�；蚺c環(huán)境的交互作用分析發(fā)現(xiàn)4個(gè)基因多態(tài)性位點(diǎn)與吸煙的相乘交互作用沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。本研究未發(fā)現(xiàn)與肺癌預(yù)后有統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)的多態(tài)性位點(diǎn)。生物學(xué)信息預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)多態(tài)性位點(diǎn)rs17079281影響轉(zhuǎn)錄因子YY1與DCBLD1啟動(dòng)子區(qū)的結(jié)合;熒光素酶luciferase報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果顯示轉(zhuǎn)錄因子YY1與rs17079281 T等位基因結(jié)合,抑制轉(zhuǎn)錄活性。攜帶T等位基因與CC基因型相比,肺癌組織中DCBLD1m RNA表達(dá)量有下調(diào)的趨勢(shì),但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。DCBLD1m RNA表達(dá)量在不同性別、吸煙狀態(tài)、病理學(xué)類型間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);YY1m RNA表達(dá)量在不同性別、吸煙狀態(tài)、病理學(xué)類型、臨床分期中存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。體外功能實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示下調(diào)DCBLD1的表達(dá)A549和H1299的遷移和侵襲能力;上調(diào)YY1的表達(dá)抑制肺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力。結(jié)論DCBLD1啟動(dòng)子區(qū)SNP rs17079281與肺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān),影響轉(zhuǎn)錄因子YY1與啟動(dòng)子區(qū)的結(jié)合,調(diào)控DCBLD1基因的表達(dá)。DCBLD1和YY1的異常表達(dá)影響肺癌細(xì)胞A549和H1299細(xì)胞的腫瘤生物學(xué)行為。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R734.2
，

本文編號(hào)：1236491