本文關(guān)鍵詞：二萜類(lèi)化合物聯(lián)合COX-2抑制劑體外對(duì)人骨肉瘤MG-63細(xì)胞的影響

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【摘要】：骨肉瘤是最常見(jiàn)的原發(fā)性惡性腫瘤多見(jiàn)于兒童和青少年,取決于受影響的元素主要有三種類(lèi)型,成骨細(xì)胞,軟骨細(xì)胞和成纖維細(xì)胞。目前治療骨肉瘤主要方法是手術(shù)和輔助化療,盡管隨著輔助療法的進(jìn)步,患者的生存率大幅提高,然而出現(xiàn)更多轉(zhuǎn)移、化療藥物的耐藥性及副作用導(dǎo)致患者的預(yù)后較差,因而迫切需要開(kāi)發(fā)一個(gè)新的替代方案是十分必要的。本研究先用貝殼杉烷二萜類(lèi)化合物冬凌草甲素聯(lián)合COX-2抑制劑塞來(lái)昔布干預(yù)骨肉瘤細(xì)胞MG-63觀察生長(zhǎng)的影響,并以毛萼乙素和嗎伐考昔為例進(jìn)一步了解此兩類(lèi)化合物對(duì)骨肉瘤的作用機(jī)制。第一章：冬凌草甲素聯(lián)合塞來(lái)昔布對(duì)人骨肉瘤MG-63細(xì)胞增殖及凋亡的影響目的：檢測(cè)二萜類(lèi)化合物冬凌草甲素聯(lián)合COX-2抑制劑塞來(lái)昔布對(duì)人骨肉瘤MG-63細(xì)胞增殖及凋亡的影響,并探討可能的作用機(jī)制。方法：MTT法檢測(cè)不同濃度的冬凌草甲素和塞來(lái)昔布在各時(shí)間點(diǎn)單藥和聯(lián)合干預(yù)MG-63后細(xì)胞的增殖抑制率,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)冬凌草甲素和塞來(lái)昔布單藥和聯(lián)合干預(yù)MG-63后細(xì)胞的凋亡率,實(shí)時(shí)熒光定量PCR法和蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)COX-2和凋亡調(diào)節(jié)因子(Bc1-2、survivin和Bax) mRNA及蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果：冬凌草甲素、塞來(lái)昔布單藥和聯(lián)合干預(yù)后,骨肉瘤MG-63細(xì)胞的增殖明顯受抑制,呈劑量依賴(lài)性,且兩藥有協(xié)同作用。冬凌草甲素、塞來(lái)昔布聯(lián)合干預(yù)組較空白組和各單藥組細(xì)胞的凋亡率增加。聯(lián)合干預(yù)組較空白組和各單藥組COX-2、Bcl-2和Survivin mRNA及蛋白的表達(dá)量明顯下調(diào),而B(niǎo)ax mRNA及蛋白表達(dá)量明顯上調(diào)。結(jié)論：冬凌草甲素聯(lián)合塞來(lái)昔布可協(xié)同抑制MG-63細(xì)胞,這一過(guò)程可能與COX-2的表達(dá)受到抑制和凋亡調(diào)節(jié)因子(Bcl-2、Survivin 和 Bax)表達(dá)有關(guān)。第二章：ERK1/2信號(hào)通路介入毛萼乙素誘導(dǎo)人骨肉瘤MG-63細(xì)胞凋亡及自噬目的：探討二萜類(lèi)化合物毛萼乙素(EriB)對(duì)人骨肉瘤MG-63細(xì)胞增殖、凋亡及自噬的影響,并探討可能的作用機(jī)制。方法：MTT法檢測(cè)不同濃度的EriB在各時(shí)間點(diǎn)干預(yù)MG-63后細(xì)胞的增殖抑制率,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)EriB(1.5 μmol/L)干預(yù)MG-63后細(xì)胞的凋亡率。實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)EriB(1.5 μmol/L)單獨(dú)干預(yù)和先用ERK1/2抑制劑U0126(50μmol/L)阻斷30min后再用EriB(1.5μmol/L)干預(yù)MG-63后凋亡因子(Bcl-2和Bax)和自噬因子Beclin-1mRNA的表達(dá)水平。蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)EriB(1.5μ mol/L)在多個(gè)時(shí)間點(diǎn)干預(yù)MG-63后ERK1/2的磷酸化水平及EriB(1.5μmol/L)單獨(dú)干預(yù)和先用U0126阻斷30min后再用EriB(1.5μmol/L)干預(yù)MG-63后凋亡因子survivin和自噬因子LC3中LC3-Ⅱ蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果：EriB干預(yù)后,骨肉瘤MG-63細(xì)胞的增殖明顯受抑制,呈時(shí)間劑量依賴(lài)性。EriB干預(yù)后,MG-63細(xì)胞凋亡率增加。EriB單獨(dú)干預(yù)組較空白組Bcl-2 mRNA和Survivin蛋白的表達(dá)量明顯下調(diào),而B(niǎo)ax和Beclin-1 mRNA及LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)量明顯上調(diào)；EriB干預(yù)后p-ERK1/2與ERK1/2的比值在6h達(dá)到峰值；U0126阻斷后再用EriB干預(yù)組較EriB單獨(dú)干預(yù)組Bcl-2 mRNA和Survivin蛋白的表達(dá)量明顯上調(diào),而B(niǎo)ax和Beclin-1 mRNA及LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)量明顯下調(diào)；U0126阻斷后再用EriB干預(yù)組較U0126單獨(dú)阻斷組相關(guān)mRNA和蛋白的變化不明顯。結(jié)論：毛萼乙素可抑制人骨肉瘤MG-63細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)其凋亡和自噬,這可能與MAPK/ERK1/2信號(hào)通路的介入有關(guān)。第三章：P38信號(hào)通路介入嗎伐考昔誘導(dǎo)的人骨肉瘤細(xì)胞MG-63凋亡目的：探討一種長(zhǎng)效環(huán)氧合酶-2(COX-2)抑制劑嗎伐考昔,對(duì)體外培養(yǎng)的人骨肉瘤細(xì)胞MG-63生長(zhǎng)的影響及可能的機(jī)制。方法：用MTT法檢測(cè)不同濃度嗎伐考昔在各時(shí)間點(diǎn)對(duì)MG-63細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率,并觀察其有效的作用濃度；蛋白質(zhì)印跡法和實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)嗎伐考昔單獨(dú)干預(yù)M G-63細(xì)胞后凋亡調(diào)節(jié)因子Bcl-2、Bax和Survivin蛋白及mRNA的表達(dá)；蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)嗎伐考昔干預(yù)MG-63細(xì)胞后P38蛋白的表達(dá)。結(jié)果：?jiǎn)岱タ嘉艨梢种芃G-63細(xì)胞的增值。嗎伐考昔干預(yù)MG-63細(xì)胞可引起凋亡調(diào)節(jié)因子Bc1-2、Survivin蛋白及mRNA的下調(diào),Bax蛋白及mRNA的上調(diào)。嗎伐考昔干預(yù)MG-63細(xì)胞可促使P38信號(hào)通路蛋白的活化。結(jié)論：?jiǎn)岱タ嘉艨赏ㄟ^(guò)誘導(dǎo)MAPK通路P38活化而影響人骨肉瘤細(xì)胞MG-63凋亡。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R738.1

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 戴體俊;合并用藥的定量分析[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);1998年05期

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本文編號(hào)：1235393