發(fā)布時間：2017-11-28 11:09

  本文關鍵詞：LFA-1的缺失對腫瘤肺轉移的作用研究

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【摘要】：腫瘤的侵襲和轉移的過程一直困擾著科學家們,腫瘤通過血道進入肺部,形成肺部的腫瘤轉移過程,一直是研究的熱點。LFA-1是表達在白細胞上的整合素家族的一員,它對于白細胞粘附血管內皮和抗原遞呈細胞起著關鍵性的作用。研究發(fā)現(xiàn)白細胞上的LFA-1和腫瘤靶細胞的ICAM-1的結合,細胞毒淋巴細胞將可以粘附在腫瘤靶細胞上進行殺傷,監(jiān)視腫瘤的發(fā)生發(fā)展。但是未有報道,腫瘤細胞在轉移至肺部的過程中LFA-1的缺失了會造成怎樣的結果。為了研究LFA-1基因的缺失會怎樣影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展,利用敲除LFA-1基因小鼠作為實驗組,用C57背景鼠作為對照組。探究在生理條件下實驗組和對照組小鼠的血常規(guī),其中實驗組的淋巴細胞的數(shù)目上調了3倍,中性粒細胞有上調的趨勢。鏡下探究它們肺部組織結構,實驗組的肺間隔減小且CD45RO蛋白標記的白細胞表達顯著性的上調。提示我們,白細胞數(shù)目的改變和肺部組織結構的改變可能夠影響腫瘤的生長和轉移。為此,采用B16F10小鼠黑色素瘤細胞系,構建經典的小鼠尾靜脈注射腫瘤細胞,20天后得到腫瘤在肺部轉移的荷瘤疾病模型。結果顯示,實驗組小鼠的肺部腫瘤結節(jié)數(shù)目增多,同時其生存率也顯著性下降。觀察荷瘤后腫瘤轉移的病理進程,第5和第10天的兩組小鼠的肺部腫瘤的數(shù)目和大小,在大體觀察和鏡下觀察的結果都沒有出現(xiàn)顯著性的差異;第15天時,實驗組小鼠的肺部在大體下觀察肺部腫瘤結節(jié)數(shù)目顯著性的增多,且腫瘤體積增大;鏡下觀察,腫瘤細胞惡性程度高,出現(xiàn)了侵襲的現(xiàn)象。檢測肺部組織的免疫組化Ki67增殖蛋白的結果,實驗組的腫瘤細胞在每個進程點上增殖比率都顯著性的上調。在荷瘤進程的第15天時,實驗組腫瘤中CD31血管標記物和CD68巨噬細胞標記蛋白都顯著性的高表達;同時觀察腫瘤中侵潤相關的MMP2蛋白和MMP9蛋白的免疫組化染色都顯著性的上調。結合實驗結果和LFA-1在白細胞上的表達提示我們,可能實驗組小鼠是改變了腫瘤免疫應答和肺部組織的腫瘤微環(huán)境造成的腫瘤轉移的進程加快。因此,探究在荷瘤的第15天時小鼠的血液、脾臟和肺部腫瘤中免疫細胞的結果:實驗組小鼠的脾臟中F4/80+的細胞比率顯著性的上調;腫瘤組織中CD8+T細胞的比率有顯著性的下降趨勢;同時腫瘤部位里分泌蛋白IL-17A和IFN-γ的表達有顯著性的上調;提示實驗組小鼠的免疫的監(jiān)視和殺傷的下降使得腫瘤進程在實驗組中加快。研究肺部腫瘤微環(huán)境時,IL-2、IL-10、IL-12、IL-1β和TGF-β等炎癥因子m RNA的表達都顯著性的上調;其中,IL-1β上調30多倍最為顯著,提示我們可能是主要影響因子。檢測得到實驗組的血清中IL-1β顯著性的上調了2倍;能夠促進腫瘤克隆形成和貼壁能力的增強。檢測得到IL-1β蛋白能促進小鼠黑色素瘤細胞的侵襲和遷移,加入了anti-IL-1β蛋白后,逆轉了這一結果。依據文獻,IL-1β通過上調了腫瘤細胞的p-p38和p-cjun的上調也得到了證實。本文以研究缺失LFA-1基因小鼠和腫瘤細胞尾靜脈注射肺部轉移模型為研究體系。闡明了生理條件下,缺失LFA-1基因后的小鼠會造成肺部白細胞的數(shù)目增多;荷瘤小鼠的脾臟的IL-17A同INF-γ的上調;腫瘤部位的CD8+T細胞下調;缺失LFA-1基因會造成小鼠肺部微環(huán)境中IL-1β的高表達,且上調腫瘤細胞的p-p38和p-cjun的表達,促進了腫瘤的增殖、侵襲和轉移。
【學位授予單位】：廣東藥學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R73-37

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本文編號：1233746