本文關(guān)鍵詞：STAT3基因在乳腺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞中的表達(dá)及對(duì)紫杉醇化療耐藥的影響

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【摘要】：研究背景:乳腺癌是危害婦女健康的主要惡性腫瘤之一,在美國,乳腺癌是女性最常見的腫瘤且成為癌癥死亡的第二大原因。在國內(nèi),占城市女性惡性腫瘤發(fā)病率第二位即為乳腺癌,一些大城市中已經(jīng)上升為第一位[1]。乳腺癌的發(fā)生率和病死率近年來逐漸上升,在很大程度上影響著女性患者的生活質(zhì)量,重者影響生命安全。乳腺癌是一個(gè)多因素、多突變積累的過程,其發(fā)病病因尚未清楚。乳腺癌目前常見的治療方法包括外科手術(shù)、放射治療、化學(xué)治療。在肯定化療效果的同時(shí),我們不得不承認(rèn)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生對(duì)化療藥物的耐藥現(xiàn)象是乳腺癌治療失敗的重要原因。近年來對(duì)乳腺癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程中相關(guān)蛋白的過度表達(dá)或異常激活的研究一直是該領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。STAT3是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子家族STATs中較為關(guān)鍵的成員之一,其存在于胞漿且能在激活后進(jìn)入細(xì)胞核與DNA特異性結(jié)合,并介導(dǎo)多種生長因子和細(xì)胞因子向核內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。在正常的生理?xiàng)l件下,STAT3信號(hào)通路是受密切調(diào)節(jié)和控制的,但是研究發(fā)現(xiàn)多種人類腫瘤組織和細(xì)胞中存在STAT3的持續(xù)性激活。STAT3調(diào)控下游靶基因如Survivin、VEGF、Bcl-x L、Cycline D1、c-myc等的轉(zhuǎn)錄,并可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長增殖、血管生成、侵襲轉(zhuǎn)移和免疫逃逸等生理過程,因而其與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[2]。STAT3在腫瘤細(xì)胞的異常增殖和惡性轉(zhuǎn)化中起著關(guān)鍵作用[3],并間接誘導(dǎo)化療耐藥[4]。研究發(fā)現(xiàn),化療藥物通常對(duì)STAT3信號(hào)通路異常激活的腫瘤細(xì)胞治療效果較低,阻斷該通路可能改善甚至逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞化療耐藥[5]。有關(guān)STAT3高表達(dá)可以引起細(xì)胞耐藥,以及阻斷該信號(hào)通路可以逆轉(zhuǎn)耐藥的研究已在不同癌癥細(xì)胞株及組織樣本的體外實(shí)驗(yàn)中得到驗(yàn)證,但STAT3在乳腺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞中是否異常表達(dá)及其在乳腺癌細(xì)胞耐藥中的作用目前尚未見報(bào)道。本研究通過RNAi技術(shù)將STAT3-si RNA轉(zhuǎn)染乳腺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞MCF-7/TR,下調(diào)STAT3的表達(dá),觀察STAT3下調(diào)對(duì)乳腺癌細(xì)胞化療敏感性的影響。目的檢測(cè)STAT3在人乳腺癌耐藥細(xì)胞株MCF-7/TR及其敏感細(xì)胞株MCF-7中的表達(dá)差異,探討以STAT3基因?yàn)榘悬c(diǎn)的小分子干擾RNA是否能夠逆轉(zhuǎn)乳腺癌細(xì)胞對(duì)紫杉醇的化療耐藥。材料和方法1.采用熒光定量PCR和蛋白免疫印跡(Western blot)法檢測(cè)STAT3 m RNA和蛋白在乳腺癌耐藥和敏感細(xì)胞株中的表達(dá)差異。2.運(yùn)用特異性STAT3-si RNA轉(zhuǎn)染乳腺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞,RT-PCR和Western blot法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后乳腺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞中STAT3的表達(dá)情況。3.MTT法檢測(cè)STAT3-si RNA對(duì)乳腺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞生長的影響及其逆轉(zhuǎn)耐藥作用。4.采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)表示,兩組數(shù)據(jù)間使用成組t檢驗(yàn),兩組以上比較采用單因素方差分析。P0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1.STAT3 m RNA和蛋白在MCF-7/TR和MCF-7細(xì)胞中均存在高表達(dá)。STAT3 m RNA在MCF-7/TR細(xì)胞中的相對(duì)表達(dá)量明顯高于MCF-7細(xì)胞,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),STAT3蛋白在MCF-7/TR細(xì)胞中的表達(dá)量顯著高于MCF-7細(xì)胞。表明STAT3在乳腺癌細(xì)胞中被激活,同時(shí)在紫杉醇耐藥細(xì)胞株MCF-7/TR中的表達(dá)較敏感細(xì)胞株MCF-7明顯升高。2.STAT3-si RNA轉(zhuǎn)染組MCF-7/TR細(xì)胞較未轉(zhuǎn)染組MCF-7/TR細(xì)胞相比,STAT3 m RNA水平明顯下降,蛋白水平明顯下降,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。陰性對(duì)照組MCF-7/TR細(xì)胞較未轉(zhuǎn)染組MCF-7/TR細(xì)胞相比,STAT3m RNA水平變化不明顯,蛋白水平變化不明顯,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。表明si RNA能夠有效而特異性地沉默STAT3基因,抑制STAT3蛋白的表達(dá)。3.MTT結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組MCF-7/TR和非特異性si RNA轉(zhuǎn)染組MCF-7/TR-Sc-si RNA細(xì)胞相比,MCF-7/TR-STAT3-si RNA細(xì)胞的生長受到明顯抑制。MCF-7/TR-STAT3-si RNA細(xì)胞對(duì)紫杉醇的IC50為(0.023±0.004)μmol/L,與空白對(duì)照組MCF-7/TR(0.159±0.018)μmol/L、非特異性si RNA轉(zhuǎn)染組(0.146±0.010)μmol/L相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);非特異性si RNA轉(zhuǎn)染組與空白對(duì)照組相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)果表明STAT3-si RNA對(duì)乳腺癌細(xì)胞具有抑制作用,同時(shí)可增加化療藥物的抗腫瘤作用,并對(duì)紫杉醇耐藥乳腺癌細(xì)胞有逆轉(zhuǎn)耐藥作用。結(jié)論1.STAT3基因在乳腺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞中的表達(dá)明顯升高,STAT3基因表達(dá)與乳腺癌紫杉醇耐藥存在相關(guān)性。2.靶向STAT3基因的RNA干擾能夠增強(qiáng)腫瘤化療藥物的療效,有效逆轉(zhuǎn)乳腺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞對(duì)紫杉醇的耐藥性。3.STAT3基因具有作為乳腺癌基因治療靶點(diǎn)的潛在價(jià)值。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.9

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4 王s，

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