本文關(guān)鍵詞：樹(shù)突狀細(xì)胞生長(zhǎng)激素受體的檢測(cè)

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【摘要】：研究背景惡性腫瘤是威脅全球人類健康的頭號(hào)殺手,傳統(tǒng)治療手段如手術(shù)、放療、化療雖有進(jìn)展,但癌癥患者的預(yù)后仍不能令人滿意,發(fā)展新的治療方式及策略迫在眉睫。過(guò)繼性免疫治療采集外周血、臍血或骨髓中的單個(gè)核細(xì)胞,對(duì)其進(jìn)行培養(yǎng)、擴(kuò)增及誘導(dǎo),回輸或轉(zhuǎn)輸回患者,起到有效抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用,達(dá)到預(yù)防、控制腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的目的。近年來(lái),對(duì)于腫瘤組織中樹(shù)突狀細(xì)胞的浸潤(rùn)程度與腫瘤轉(zhuǎn)移及臨床預(yù)后關(guān)系的報(bào)道日益增多。目前樹(shù)突狀細(xì)胞(dendritic cells,DCs)被認(rèn)為是專職抗原提呈細(xì)胞(antigen presenting cell,APC)中功能最強(qiáng)的,能夠高效的激活初始型T細(xì)胞,引起免疫耐受和免疫激活,在機(jī)體免疫系統(tǒng)中不可或缺。但是機(jī)體內(nèi)DC細(xì)胞群的存在很少,對(duì)于臨床治療與科研的需求不能達(dá)到滿意。伴隨著DC基礎(chǔ)性研究的深入進(jìn)展,對(duì)DC的體外誘導(dǎo)培養(yǎng)技術(shù)也獲得了很大的進(jìn)步。對(duì)單核細(xì)胞應(yīng)用白細(xì)胞介素-4(interleukin-4,IL-4)和粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)共同刺激獲取細(xì)胞群組,這一時(shí)期的DC處于未成熟狀態(tài),而再加入CD40L、炎癥因子、IL-1等刺激信號(hào)后,就能誘導(dǎo)DC分化成熟,并且具有不同的功能表型。生長(zhǎng)激素(growth hormone,GH)是一種大分子蛋白質(zhì),能促進(jìn)機(jī)體的生長(zhǎng)發(fā)育、新陳代謝等過(guò)程。由于細(xì)胞膜的濾過(guò)作用,GH往往不能直接穿透作用于細(xì)胞。細(xì)胞膜表面存在有生長(zhǎng)激素受體(growth hormone receptor,GHR),GH要發(fā)揮生物活性就要與其結(jié)合,形成小分子聚合物透過(guò)細(xì)胞膜,通過(guò)其他信號(hào)分子的刺激表達(dá)GH的生物活性,并極高效的形成酶聯(lián)催化效應(yīng)。目的體外應(yīng)用IL-4及GM-CSF聯(lián)合誘導(dǎo)培養(yǎng)人臍血來(lái)源樹(shù)突狀細(xì)胞,并應(yīng)用熒光定量PCR、western-blot、免疫熒光及免疫組化檢測(cè)生長(zhǎng)激素受體的表達(dá),并探討其臨床意義。方法嚴(yán)格遵循無(wú)菌操作,將10組人臍帶血采用淋巴細(xì)胞分離液離心,獲得臍血單核細(xì)胞,應(yīng)用白細(xì)胞介素-4(IL-4)和粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(Granulocyte macrophage colony stimulating factor GM-CSF)誘導(dǎo)刺激單核細(xì)胞,獲得樹(shù)突狀細(xì)胞。設(shè)計(jì)將提取淋巴細(xì)胞后,誘導(dǎo)表達(dá)前淋巴細(xì)胞為對(duì)照組,誘導(dǎo)表達(dá)后為樹(shù)突狀細(xì)胞組,進(jìn)行免疫熒光,免疫組化,熒光定量PCR及蛋白質(zhì)印記法檢測(cè)生長(zhǎng)激素受體表達(dá)量,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果臍血單核細(xì)胞在終濃度為5ng/ml的IL-4及10ng/ml的GM-CSF誘導(dǎo)下分化為成熟DCs。鏡下觀察熒光免疫及免疫組化染色的DC,其細(xì)胞核染色加深,陽(yáng)性率高;DCGHR基因和內(nèi)參基因的q RT-PCR中m RNA的相對(duì)表達(dá)量分別為75.3和24.7(P0.05);Western結(jié)果示:與誘導(dǎo)前相比,誘導(dǎo)后的GHR蛋白表達(dá)相對(duì)灰度值增高,分別為0.2047±0.0231、0.5823±0.0493(P0.05)。結(jié)論臍血單個(gè)核細(xì)胞可在體外經(jīng)細(xì)胞因子組合誘導(dǎo)成為DC。DC細(xì)胞生長(zhǎng)激素受體呈陽(yáng)性高表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R730.51

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 ;Effect of a cancer vaccine prepared by fusions of hepatocarcinoma cells with dendritic cells[J];World Journal of Gastroenterology;2001年05期

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本文編號(hào)：1228831