本文關(guān)鍵詞：醛縮酶B在索拉非尼治療肝癌的耐藥作用研究

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【摘要】：研究目的原發(fā)性肝細(xì)胞癌(以下簡(jiǎn)稱,肝癌)是世界上最為常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率及死亡率極高。肝癌病人門靜脈癌栓((Portal vein tumour thrombus,以下簡(jiǎn)稱PVTT)發(fā)生率很高,50%-60%的肝癌病人首診時(shí)通過(guò)影像學(xué)檢查就會(huì)發(fā)現(xiàn)有門靜脈癌栓。PVTT可以導(dǎo)致肝癌病人門靜脈壓力升高、肝功能惡化、肝癌細(xì)胞肝內(nèi)轉(zhuǎn)移擴(kuò)散等。因此研究肝癌伴門靜脈癌栓發(fā)生的防治策略及早期診斷是臨床提高肝癌病人整體療效的當(dāng)務(wù)之急。肝癌的治療中索拉菲尼是當(dāng)今世界公認(rèn)的最為有效的藥物,巴塞羅那分期中明確指出中晚期(BCLC:C)患者推薦使用索拉菲尼。但隨著索拉菲尼的臨床應(yīng)用卻發(fā)現(xiàn)臨床耐的現(xiàn)象,既往以腫瘤干細(xì)胞、微環(huán)境等角度解釋其耐藥機(jī)制,但仍有很多局限。任何基因或狀態(tài)的改變最終都會(huì)反映在代謝產(chǎn)物上。因而代謝組學(xué)是繼蛋白組學(xué)與轉(zhuǎn)錄組學(xué)之后一門新興學(xué)科,是組學(xué)的最終方向。也逐漸成為了腫瘤研究的熱點(diǎn)。因此,本課題從肝癌門靜脈癌栓患者(BCLC:C)使用索拉菲尼后收益效果更明顯這一臨床現(xiàn)象出發(fā),通過(guò)代謝組學(xué)揭示其代謝重構(gòu)規(guī)律,尋找引起代謝重構(gòu)的關(guān)鍵基因,進(jìn)而解釋這一臨床現(xiàn)象,為臨床用藥提供指導(dǎo)。研究方法1、通過(guò)對(duì)臨床配對(duì)肝癌(非癌-原位癌-癌栓)組織原代培養(yǎng),并利用13C穩(wěn)定同位素示蹤實(shí)驗(yàn)技術(shù)觀察配對(duì)組織中代謝流量變化,揭示肝癌PVTT的發(fā)生發(fā)展中代謝重構(gòu)特點(diǎn)。2、對(duì)比臨床配對(duì)肝癌(非癌-原位癌-癌栓)組織的基因芯片篩選代謝相關(guān)基因,并通過(guò)Western blot蛋白免疫印跡和免疫組化實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。確定目的基因?yàn)锳LDOB。3、構(gòu)建p GFP-ALDOB嘌呤霉素抗性質(zhì)粒通過(guò)慢病毒包裝轉(zhuǎn)染Huh-7、MHCC-LM3及CSQT-2肝癌細(xì)胞,并通過(guò)抗性篩選得到穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。4、以過(guò)表達(dá)ALDOB的肝癌細(xì)胞系為基礎(chǔ),通過(guò)13C穩(wěn)定同位素示蹤實(shí)驗(yàn)技術(shù)觀察ALDOB及Sorafenib對(duì)代謝重構(gòu)的影響。5、以過(guò)表達(dá)ALDOB的肝癌細(xì)胞系為基礎(chǔ),利用CCK8實(shí)驗(yàn)研究ALDOB及Sorafenib對(duì)增殖能力;應(yīng)用Transwell遷移、Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)研究ALDOB及Sorafenib對(duì)細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力等生物學(xué)功能的影響。6、購(gòu)買部分免疫缺陷裸鼠,構(gòu)建裸鼠皮下荷瘤模型觀察ALDOB及Sorafenib對(duì)體內(nèi)荷瘤能力;構(gòu)建裸鼠尾靜脈肺轉(zhuǎn)移模型觀察ALDOB及Sorafenib對(duì)體內(nèi)轉(zhuǎn)移能力。7、生物信息預(yù)測(cè)能與ALDOB相結(jié)合的靶蛋白。8、組織芯片免疫組化后分析ALDOB與G6PD在肝癌患者群體中的表達(dá)比例并利用卡方檢驗(yàn)及Student`s Test檢驗(yàn)分析ALDOB和G6PD的表達(dá)水平與臨床病理特征相關(guān)指標(biāo)關(guān)系。9、通過(guò)Kaplan-Meier和Log-rank分析ALDOB和G6PD的表達(dá)水平與臨床預(yù)后的關(guān)系,包括:總體生存時(shí)間(Overall survival,OS)和無(wú)瘤生存時(shí)間(Disease free survival,DFS)。10、通過(guò)Log-rank單因素分析與預(yù)后相關(guān)的臨床病理特征指標(biāo),并通過(guò)COX風(fēng)險(xiǎn)比例回歸模型分析ALDOB與G6PD是否為肝癌患者預(yù)后的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素。結(jié)果1、臨床配對(duì)肝癌(非癌-原位癌-癌栓)組織的代謝重構(gòu)特點(diǎn),結(jié)合臨床配對(duì)肝癌(非癌-原位癌-癌栓)組織的基因芯片篩選及臨床配對(duì)肝癌組織樣本驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)在肝癌的發(fā)生發(fā)展(非癌-原位癌-癌栓)過(guò)程中ALDOB逐漸下降2、ALDOB過(guò)表達(dá)及應(yīng)用Sorafenib對(duì)肝癌細(xì)胞的代謝水平發(fā)生了明顯的變化,提示:ALDOB是肝癌發(fā)生發(fā)展中調(diào)節(jié)糖代謝重構(gòu)的關(guān)鍵基因。ALDOB對(duì)Sorafenib用藥前后代謝改變趨勢(shì)相反。3、ALDOB過(guò)表達(dá)可抑制肝癌細(xì)胞的增殖。再次基礎(chǔ)上應(yīng)用Sorafenib,下降了藥物對(duì)腫瘤的抑制效果。提示;ALDOB是肝癌發(fā)生發(fā)展中的關(guān)鍵基因。ALDOB下降了Sorafenib對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用。4、ALDOB抑制了Sorafenib對(duì)腫瘤細(xì)胞線粒體膜電位的下調(diào)。5、ALDOB減少了Sorafenib對(duì)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生ROS的抑制作用。6、ALDOB的表達(dá)水平與腫瘤大小、腫瘤包膜、癌巢內(nèi)癌栓和細(xì)胞病理分級(jí)等臨床病理特征相關(guān);G6PD的表達(dá)水平與細(xì)胞病理分級(jí)和復(fù)發(fā)等臨床病理特征相關(guān),提示:ALDOB與G6PD在肝癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起到重要作用。7、ALDOB與G6PD的表達(dá)水平與肝癌患者的預(yù)后密切相關(guān),ALDOB低表達(dá)組患者總體生存時(shí)間(OS)、無(wú)瘤生存期(DFS)明顯低于ALDOB高表達(dá)組;G6PD高表達(dá)組患者總體生存時(shí)間(OS)、無(wú)瘤生存期(DFS)明顯低于G6PD低表達(dá)組。進(jìn)一步因素分析,ALDOB為肝癌患者預(yù)后的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素。結(jié)論ALDOB參與肝癌發(fā)生發(fā)展中的糖代謝網(wǎng)絡(luò)重構(gòu);同時(shí)參與調(diào)控肝癌細(xì)胞的增殖;ALDOB可降低Sorafenib對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用;ALDOB抑制了Sorafenib對(duì)腫瘤細(xì)胞線粒體膜電位的下調(diào)。ALDOB減少了Sorafenib對(duì)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生ROS的抑制作用。在臨床組織中ALDOB低表達(dá);G6PD高表達(dá);ALDOB與G6PD的表達(dá)水平與肝癌患者的臨床病理特征密切相關(guān);ALDOB與G6PD的表達(dá)水平與肝癌患者的預(yù)后密切相關(guān),ALDOB是肝癌患者預(yù)后的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素。ALDOB高表達(dá)的肝癌患者不適宜使用Sorafenib。ALDOB與G6PD的表達(dá)水平相結(jié)合可更好的預(yù)測(cè)肝癌患者預(yù)后。研究結(jié)果提示:ALDOB與G6PD可作為肝癌的預(yù)后指標(biāo)及干預(yù)靶點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.7

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 秦利燕;王濱;倪振洪;連繼勤;宋方洲;袁成福;劉革力;;索拉非尼誘導(dǎo)肝癌HepG2細(xì)胞自噬的機(jī)制及意義[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2013年22期

2 劉群;翟笑楓;郎慶波;喬翠霞;陸檢英;馬昌平;陳紅云;;華蟾素肝動(dòng)脈栓塞治療對(duì)中晚期原發(fā)性肝癌患者生存質(zhì)量的影響[J];安徽中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2014年02期

3 Liem Minh Phan;Sai-Ching Jim Yeung;Mong-Hong Lee;;Cancer metabolic reprogramming: importance, main features, and potentials for precise targeted anti-cancer therapies[J];Cancer Biology & Medicine;2014年01期

4 倫俊杰;孫建業(yè);殷好治;胡效坤;;~(125)I粒子植入及動(dòng)脈灌注吉西他濱+奧沙利鉑治療肝癌TACE術(shù)后殘存病灶的臨床研究[J];當(dāng)代醫(yī)學(xué);2014年24期

5 張琴;黃濤;卓強(qiáng);鄭人源;;肝纖維化中MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路對(duì)肝星狀細(xì)胞活性的影響[J];成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2014年04期

6 王冰;于明;武岳;李川;姚天明;;JNK蛋白在白藜蘆醇抗心肌缺血再灌注損傷中作用[J];創(chuàng)傷與急危重病醫(yī)學(xué);2014年04期

7 董云;林海;;巴塞羅那臨床肝癌分期對(duì)肝癌經(jīng)肝動(dòng)脈化療栓塞護(hù)理的指導(dǎo)價(jià)值[J];當(dāng)代護(hù)士(下旬刊);2014年12期

8 姚雪松;閆東;曾輝英;劉德忠;李槐;;肝細(xì)胞癌TACE治療中C臂CT掃描X線輻射劑量與時(shí)間效率的評(píng)估[J];肝癌電子雜志;2014年02期

9 唐錦華;吳江;連繼勤;;ROS介導(dǎo)的JNK信號(hào)通路及其對(duì)細(xì)胞自噬的調(diào)節(jié)[J];重慶醫(yī)學(xué);2015年06期

10 Si-Han Wu;Jun-Feng Bi;Timothy Cloughesy;Webster K.Cavenee;Paul S.Mischel;;Emerging function of mTORC2 as a core regulator in glioblastoma: metabolic reprogramming and drug resistance[J];Cancer Biology & Medicine;2014年04期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 馬瑞花;逆轉(zhuǎn)糖酵解—基于糖代謝的肝癌治療新策略研究[D];華中科技大學(xué);2013年

2 周鵬;microRNA-301a靶向調(diào)節(jié)GAX的表達(dá)促進(jìn)肝細(xì)胞癌生長(zhǎng)及侵襲轉(zhuǎn)移的研究[D];中南大學(xué);2013年

3 楊浩;miR-140-5p通過(guò)靶向調(diào)節(jié)TGFBR1和FGF9抑制肝細(xì)胞癌增殖和侵襲轉(zhuǎn)移[D];中南大學(xué);2013年

4 李文娟;NOR1是調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞自噬/凋亡分子開(kāi)關(guān)的氧化應(yīng)激反應(yīng)性蛋白[D];中南大學(xué);2013年

5 楊建棟;NDRG2在肝損傷修復(fù)過(guò)程中的表達(dá)和功能研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

6 李華濤;谷氨酰胺抗鯉魚紅細(xì)胞凋亡作用及作用機(jī)制研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

7 張振偉;胞質(zhì)非特異性肌肽酶（CNDP2）、胞外基質(zhì)蛋白多糖（Versican）在胃癌中的作用及機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

8 張博;天冬酰胺合成酶在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)與預(yù)后分析及功能研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

9 翟小明;草氨酸鈉抑制乳酸脫氫酶對(duì)鼻咽癌生長(zhǎng)及放射敏感性的影響[D];蘇州大學(xué);2014年

10 高晟;MiR-93通過(guò)EphA4介導(dǎo)上皮間變調(diào)控肝移植術(shù)后肝癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2014年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李剛;肝尾狀葉腫瘤的手術(shù)治療并20例臨床分析[D];山東大學(xué);2013年

2 張曉雪;IEX-1的UVB誘導(dǎo)性及與其它因子在卵巢癌組織中表達(dá)的相關(guān)性[D];鄭州大學(xué);2013年

3 蔡慧蕓;JNK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在去甲斑蝥素誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡中的作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

4 謝道林;超聲造影引導(dǎo)下經(jīng)皮微波消融肝癌的近期臨床療效研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2013年

5 陳士光;�；撬峒岸蜇惿程箤�(duì)鏈脲佐菌素致胰島β細(xì)胞損傷的保護(hù)作用[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年

6 包雯;長(zhǎng)鏈非編碼RNA-HOTAIRM1、TP53TG1在人神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的表達(dá)分析以及與糖代謝關(guān)系的初探[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

7 李振東;艱難梭菌毒素B誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生的ROS與細(xì)胞凋亡的相關(guān)性研究[D];華南理工大學(xué);2013年

8 楊嬋麗;縮氨基硫脲類螯合劑抑制胞內(nèi)超氧化物歧化酶1活性的研究[D];華中師范大學(xué);2013年

9 金白潔;苦參素聯(lián)合全反式維甲酸干預(yù)大鼠肝癌變進(jìn)程中Cyclin D1和PTEN表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化[D];河南師范大學(xué);2013年

10 李醫(yī)華;延邊州2005-2008年住院患者惡性腫瘤譜分析[D];延邊大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：1227803