本文關(guān)鍵詞：負載TLP的HAp顆粒對增強DC誘導(dǎo)的同源淋巴細胞體外抑癌效果的研究

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【摘要】：樹突狀細胞(Dendritic Cell,DC)是目前已知的人體內(nèi)最強大的抗原呈遞細胞,除此之外,它還具有諸多重要的生物學(xué)、免疫學(xué)功能,如參與啟動初始免疫反應(yīng)、參與T細胞亞群的分化、參與誘導(dǎo)中樞和外周免疫耐受、參與調(diào)解B細胞功能、參與固有免疫應(yīng)答等,在整個免疫系統(tǒng)與免疫發(fā)生中占據(jù)著十分重要的位置,所以在針對腫瘤的癌癥免疫治療方面,DC也起到了重要作用。目前針對腫瘤免疫治療所采用的DC疫苗策略首先是將病人體內(nèi)的DC進行體外擴增培養(yǎng),然后在體外用腫瘤抗原(凋亡腫瘤細胞或腫瘤細胞裂解物;特異性腫瘤相關(guān)抗原;編碼腫瘤相關(guān)抗原的基因等)刺激DC,最后將DC回輸?shù)交颊唧w內(nèi)誘導(dǎo)特異性抗腫瘤免疫反應(yīng)。DC疫苗在臨床上已經(jīng)取得了一定的療效,但仍有許多困難需要研究克服,其難點主要在于:DC的獲得、DC的抗原負載方式(抗原種類與刺激方式)、DC的活化程度等,其中最關(guān)鍵的是對抗原負載的方式,如何找到有效的抗原負載方式以增強DC誘導(dǎo)的抗腫瘤免疫反應(yīng),還是一個存在于DC疫苗研究過程中的重大難點。所以本課題嘗試利用羥基磷灰石顆粒負載腫瘤細胞裂解抗原,觀察其是否可以促進DC對抗原的吞噬,并評估了其對DC誘導(dǎo)的同源淋巴細胞體外抑癌的效果。具體研究內(nèi)容、結(jié)果如下:1)以傳統(tǒng)的水熱合成法制備了細棒狀的羥基磷灰石顆粒,所制得的顆粒長徑為200-400 nm,短徑為30-50 nm,形狀均一,分散性良好,經(jīng)XRD、FTIR、TG分析表征后可知所制得顆粒的成分確實為羥基磷灰石且純度較高。2)本實驗將羥基磷灰石用作生物載體負載MCF-7腫瘤細胞裂解蛋白,所以進一步對制得的羥基磷灰石顆粒的體外降解性能及其生物相容性作了評估,結(jié)果顯示,制得的羥基磷灰石顆粒在模擬正常體液環(huán)境(p H=7.4)和溶酶體內(nèi)環(huán)境(p H=5.6)下90天的降解率分別為31.8%與49.6%,說明制備的羥基磷灰石顆粒用作生物載體有較好的可降解性,既不會因為降解過快導(dǎo)致細胞內(nèi)環(huán)境突變應(yīng)激,也避免了長時間滯留體內(nèi)所帶來的潛在毒副作用;對Hs578Bst、MCF-7、A549、Huh-7四種細胞3天內(nèi)的生物細胞相容性實驗中,在HAp終濃度為0.1-500μg/m L的范圍中,四種細胞的生存率普遍在95%以上,說明制備的羥基磷灰石顆粒有著較好的細胞相容性。3)本實驗利用人外周血單個核細胞來源的單核細胞成功誘導(dǎo)培養(yǎng)出DC,并記錄了誘導(dǎo)培養(yǎng)過程中細胞形態(tài)的變化;利用擬合Langmuir曲線的方法測定了HAp顆粒對TLP的最大負載量,20μg、40μg HAp可分別負載5.8μg、14.0μg TLP;利用細胞熒光染色技術(shù)觀察DC細胞對負載了TLP的HAp顆粒的吞噬情況,結(jié)果顯示DC對HAp-TLP的吞噬量明顯大于對游離TLP的吞噬。4)利用負載了MCF-7細胞TLP的HAp顆粒分別進行了DC誘導(dǎo)的同源淋巴細胞體外殺傷效果檢測、體外殺傷特異性檢測以及淋巴細胞的直接體外殺傷效果檢測,結(jié)果說明淋巴細胞對異源性細胞具有一定殺傷作用(20%-30%),并且DC在經(jīng)過HAp-TLP刺激后誘導(dǎo)出的淋巴細胞會產(chǎn)生針對TLP來源細胞MCF-7的顯著特異性殺傷效果(50%-60%)。
【學(xué)位授予單位】：浙江理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R730.51

【參考文獻】

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1 Xiao-Yu Zhang;Wei-Yue Lu;;Recent advances in lymphatic targeted drug delivery system for tumor metastasis[J];Cancer Biology & Medicine;2014年04期

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本文編號：1227687