本文關(guān)鍵詞：負(fù)載TLP的HAp顆粒對(duì)增強(qiáng)DC誘導(dǎo)的同源淋巴細(xì)胞體外抑癌效果的研究

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【摘要】：樹突狀細(xì)胞(Dendritic Cell,DC)是目前已知的人體內(nèi)最強(qiáng)大的抗原呈遞細(xì)胞,除此之外,它還具有諸多重要的生物學(xué)、免疫學(xué)功能,如參與啟動(dòng)初始免疫反應(yīng)、參與T細(xì)胞亞群的分化、參與誘導(dǎo)中樞和外周免疫耐受、參與調(diào)解B細(xì)胞功能、參與固有免疫應(yīng)答等,在整個(gè)免疫系統(tǒng)與免疫發(fā)生中占據(jù)著十分重要的位置,所以在針對(duì)腫瘤的癌癥免疫治療方面,DC也起到了重要作用。目前針對(duì)腫瘤免疫治療所采用的DC疫苗策略首先是將病人體內(nèi)的DC進(jìn)行體外擴(kuò)增培養(yǎng),然后在體外用腫瘤抗原(凋亡腫瘤細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞裂解物;特異性腫瘤相關(guān)抗原;編碼腫瘤相關(guān)抗原的基因等)刺激DC,最后將DC回輸?shù)交颊唧w內(nèi)誘導(dǎo)特異性抗腫瘤免疫反應(yīng)。DC疫苗在臨床上已經(jīng)取得了一定的療效,但仍有許多困難需要研究克服,其難點(diǎn)主要在于:DC的獲得、DC的抗原負(fù)載方式(抗原種類與刺激方式)、DC的活化程度等,其中最關(guān)鍵的是對(duì)抗原負(fù)載的方式,如何找到有效的抗原負(fù)載方式以增強(qiáng)DC誘導(dǎo)的抗腫瘤免疫反應(yīng),還是一個(gè)存在于DC疫苗研究過程中的重大難點(diǎn)。所以本課題嘗試?yán)昧u基磷灰石顆粒負(fù)載腫瘤細(xì)胞裂解抗原,觀察其是否可以促進(jìn)DC對(duì)抗原的吞噬,并評(píng)估了其對(duì)DC誘導(dǎo)的同源淋巴細(xì)胞體外抑癌的效果。具體研究內(nèi)容、結(jié)果如下:1)以傳統(tǒng)的水熱合成法制備了細(xì)棒狀的羥基磷灰石顆粒,所制得的顆粒長徑為200-400 nm,短徑為30-50 nm,形狀均一,分散性良好,經(jīng)XRD、FTIR、TG分析表征后可知所制得顆粒的成分確實(shí)為羥基磷灰石且純度較高。2)本實(shí)驗(yàn)將羥基磷灰石用作生物載體負(fù)載MCF-7腫瘤細(xì)胞裂解蛋白,所以進(jìn)一步對(duì)制得的羥基磷灰石顆粒的體外降解性能及其生物相容性作了評(píng)估,結(jié)果顯示,制得的羥基磷灰石顆粒在模擬正常體液環(huán)境(p H=7.4)和溶酶體內(nèi)環(huán)境(p H=5.6)下90天的降解率分別為31.8%與49.6%,說明制備的羥基磷灰石顆粒用作生物載體有較好的可降解性,既不會(huì)因?yàn)榻到膺^快導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)環(huán)境突變應(yīng)激,也避免了長時(shí)間滯留體內(nèi)所帶來的潛在毒副作用;對(duì)Hs578Bst、MCF-7、A549、Huh-7四種細(xì)胞3天內(nèi)的生物細(xì)胞相容性實(shí)驗(yàn)中,在HAp終濃度為0.1-500μg/m L的范圍中,四種細(xì)胞的生存率普遍在95%以上,說明制備的羥基磷灰石顆粒有著較好的細(xì)胞相容性。3)本實(shí)驗(yàn)利用人外周血單個(gè)核細(xì)胞來源的單核細(xì)胞成功誘導(dǎo)培養(yǎng)出DC,并記錄了誘導(dǎo)培養(yǎng)過程中細(xì)胞形態(tài)的變化;利用擬合Langmuir曲線的方法測(cè)定了HAp顆粒對(duì)TLP的最大負(fù)載量,20μg、40μg HAp可分別負(fù)載5.8μg、14.0μg TLP;利用細(xì)胞熒光染色技術(shù)觀察DC細(xì)胞對(duì)負(fù)載了TLP的HAp顆粒的吞噬情況,結(jié)果顯示DC對(duì)HAp-TLP的吞噬量明顯大于對(duì)游離TLP的吞噬。4)利用負(fù)載了MCF-7細(xì)胞TLP的HAp顆粒分別進(jìn)行了DC誘導(dǎo)的同源淋巴細(xì)胞體外殺傷效果檢測(cè)、體外殺傷特異性檢測(cè)以及淋巴細(xì)胞的直接體外殺傷效果檢測(cè),結(jié)果說明淋巴細(xì)胞對(duì)異源性細(xì)胞具有一定殺傷作用(20%-30%),并且DC在經(jīng)過HAp-TLP刺激后誘導(dǎo)出的淋巴細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生針對(duì)TLP來源細(xì)胞MCF-7的顯著特異性殺傷效果(50%-60%)。
【學(xué)位授予單位】：浙江理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R730.51

【參考文獻(xiàn)】

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1 Xiao-Yu Zhang;Wei-Yue Lu;;Recent advances in lymphatic targeted drug delivery system for tumor metastasis[J];Cancer Biology & Medicine;2014年04期

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本文編號(hào)：1227687