發(fā)布時間：2017-11-25 09:00

  本文關(guān)鍵詞：反向PCR精確定位人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞CD133基因啟動子區(qū)脫氧核糖核酸酶Ⅰ高敏感位點

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【摘要】：目的:利用反向PCR(inverse-PCR)方法精確定位人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞CD133基因啟動子區(qū)對脫氧核糖核酸酶I(DNase I)酶切敏感位點,探討此方法在研究腫瘤細(xì)胞基因調(diào)控方面應(yīng)用的可行性。方法:以人結(jié)腸癌細(xì)胞系SW480為研究模型,細(xì)胞培養(yǎng)數(shù)量達(dá)到107時提取細(xì)胞核,10U/ml DNase I切割SW480細(xì)胞核中的染色質(zhì)后,按照苯酚/氯仿/異戊醇(10:10:1)方法提取基因組,用限制性內(nèi)切酶Eco RI和Xmal I片段化基因組,通過末端補平、T4連接酶連接成環(huán)等過程,利用反向PCR擴增產(chǎn)物,并將PCR產(chǎn)物經(jīng)純化后連入p MD-18 T載體,轉(zhuǎn)入到大腸桿菌TOP10株中進(jìn)行表達(dá),篩選陽性克隆進(jìn)行基因測序。結(jié)果:通過測序,人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞CD133基因轉(zhuǎn)錄起始點上游9個DNase I高敏感位點被鑒別出來,它們位于第一個外顯子-700~-300bp堿基區(qū)域內(nèi)。結(jié)論:應(yīng)用反向PCR的技術(shù)可以精確測定DNase I對人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞CD133基因啟動子區(qū)的剪切位點,而且這些位點聚集在一個特定的區(qū)域。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.35

【參考文獻(xiàn)】

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1 馮銀;袁金玲;伍勇;漆涌;陳體;;反向PCR擴增Ⅰ類整合酶基因側(cè)翼序列[J];國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志;2013年08期

2 杜志杰;董金W，

本文編號：1225440