本文關(guān)鍵詞：Gli2基因沉默對(duì)人肝癌細(xì)胞系SMMC-7721侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響及相關(guān)機(jī)制

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【摘要】：目的：探討膠質(zhì)瘤相關(guān)癌基因同源蛋白2(Glioma-associated oncogenehomologue 2,Gli2)對(duì)人肝癌細(xì)胞系SMMC-7721侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響及相關(guān)機(jī)制。方法：設(shè)計(jì)3條靶向Gli2基因的shRNA,構(gòu)建慢病毒載體(pLKD.CMV.GFP.U6 shRNA-Gli2-1,2,3),轉(zhuǎn)染到人肝癌細(xì)胞系SMMC-7721。采用熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白的表達(dá),用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染率。利用qRT-PCR、Western blot法篩選出最佳沉默效率的shRNA慢病毒,并檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后Gli2 mRNA口蛋白表達(dá)的情況；實(shí)驗(yàn)設(shè)shRNA-Gli2組(轉(zhuǎn)染shRNA-Gli2的SMMC-7721細(xì)胞]、shRNA-NC組(轉(zhuǎn)染Negative control shRNA 的 SMMC-7721細(xì)胞)和對(duì)照組(未經(jīng)處理的SMMC-7721細(xì)胞)。采用細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞同種及異種黏附率；采用Transwell小室法檢測(cè)各組細(xì)胞遷移、侵襲能力；采用體外血管生成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞血管生成能力；利用qRT-PCR和Western blot法分析Gli2基因沉默對(duì)上皮標(biāo)志物E-cadherin和間質(zhì)標(biāo)志物N-cadherin、MMPs家族中MMP-2及血管生成關(guān)鍵調(diào)控因子VEGF-AmRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)的影響。結(jié)果：1.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,shRNA慢病毒轉(zhuǎn)染率為95%左右。2.篩選出沉默效果最佳的shRNA慢病毒shRNA-Gli2-1,shRNA-Gli2-1組中Gli2 mRNA的表達(dá)量為對(duì)照組的0.37±0.02倍,Gli2蛋白質(zhì)的表達(dá)量為對(duì)照組的0.43±0.05倍。后續(xù)實(shí)驗(yàn)均以shRNA-Gli2-1轉(zhuǎn)染SMMC-7721細(xì)胞,命名為shRNA-Gli2組。3.細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,shRNA-Gli2組與shRNA-NC組和對(duì)照組相比同種黏附率增加(13.71%±1.87 vs 6.35%±1.335.53%±2.01)p0.05),異種黏附率降低(20.57%±1.44 vs 35.64%±2.5833.34%±1.40)(p0.05)。4.細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,shRNA-Gli2組穿膜細(xì)胞數(shù)顯著少于shRNA-NC組和對(duì)照組(40.00±1.46 vs 162.33±12.81 176.67±7.02)p0.05)。5.細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,shRNA-Gli2組穿膜細(xì)胞數(shù)明顯少于shRNA-NC組和對(duì)照組(18.00±2.66 vs 100.33±3.06106.33±4.16)p0.05)。6.體外血管生成實(shí)驗(yàn)結(jié)果示,shRNA-Gli2組與shRNA-NC組和對(duì)照組相比血管生成能力明顯減弱(8.67±2.08 vs 27.33±2.5228.33±3.51)(p0.05)。7. qRT-PCR、Western blot法結(jié)果顯示,shRNA-Gli2組與shRNA-NC組和對(duì)照組相比E-cadherin表達(dá)顯著增高而N-cadherin、MMP-2、 VEGF-A表達(dá)明顯降低(p0.05)。結(jié)論：沉默Gli2的表達(dá)能夠抑制人肝癌細(xì)胞系SMMC-7721侵襲轉(zhuǎn)移能力,其機(jī)制可能與E-cadherin的表達(dá)上調(diào)和N-cadherin、MMP-2(?)VEGF-A的表達(dá)下調(diào)有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R735.7

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中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 ;高轉(zhuǎn)移人肝癌裸鼠模型和細(xì)胞系的建立、研究與應(yīng)用[J];中華醫(yī)學(xué)信息導(dǎo)報(bào);2003年03期

2 張弘,韓喜春,王悅書(shū),韓剛,姜偉棟;基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-3基因轉(zhuǎn)染抗人肝癌細(xì)胞系侵襲與轉(zhuǎn)移的研究[J];中華普通外科雜志;2004年06期

3 晏雪生;李瀚e，

本文編號(hào)：1221859