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水通道蛋白9表達(dá)水平對(duì)三氧化二砷抗肝癌效果的影響

發(fā)布時(shí)間:2017-11-24 00:14

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【摘要】:目的:通過(guò)將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepG2肝癌細(xì)胞,改變水甘油通道蛋白9 (aquaglyceroporin 9,AQP9)在細(xì)胞中的表達(dá),研究其表達(dá)水平的改變對(duì)三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞HepG2凋亡及其生物學(xué)行為的影響。方法: (1)采用四甲基偶氮唑鹽法(methylthiazolyl tetrazolium,MTT)篩選As203對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2增殖抑制作用的IC50值;(2)將重組質(zhì)粒pEGFP-N1-AQP9和pshRNA-AQP9a轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞,通過(guò)熒光顯微鏡,RT-PCR和Western blot法檢測(cè)其表達(dá):(3)將As203加入轉(zhuǎn)染后及未處理的HepG2細(xì)胞,MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率;流式細(xì)胞儀分析周期和凋亡情況;Franswell實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證遷移侵襲能力的改變;酶標(biāo)儀檢測(cè)Caspase-3活性。結(jié)果:(1)在熒光顯微鏡下可觀察到綠色熒光的表達(dá),重組質(zhì)粒對(duì)AQP9有明顯的過(guò)表達(dá)及抑制表達(dá)作用; (2)轉(zhuǎn)染pEGFP-N1-AQP9組肝癌細(xì)胞的增殖抑制作用明顯大于單純As203處理組,侵襲及遷移能力顯著減弱,細(xì)胞周期停滯在Go/G1期,凋亡明顯多于單純As203處理組,Caspase-3活性最高。(3)轉(zhuǎn)染pshRNA-AQP9a組細(xì)胞的增殖抑制作用及Caspase-3活性小于單純As203處理組,侵襲遷移能力強(qiáng)于單純As203處理組,細(xì)胞周期停滯在Go/G1期的數(shù)量及凋亡率較少。結(jié)論:重組質(zhì)粒pEGFP-N1-AQP9轉(zhuǎn)染HepG2肝癌細(xì)胞后,比單純使用As203抗肝癌抑制細(xì)胞增殖能力強(qiáng),凋亡率增高,使肝癌細(xì)胞HepG2對(duì)As203化療的敏感性增強(qiáng),從而影響As203對(duì)肝癌的治療效果。
【學(xué)位授予單位】:重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類(lèi)號(hào)】:R735.7

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本文編號(hào):1220341

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