EZH2和miR-127在中國尤文肉瘤患者中的表達(dá)特征及預(yù)后相關(guān)性分析
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更多相關(guān)文章: EZH2 miR-127-3p 尤文肉瘤 預(yù)后
【摘要】:[背景目的]尤文肉瘤(Ewing's sarcoma, EWS)是兒童和青少年第二大常見的原發(fā)性惡性骨腫瘤,平均發(fā)病年齡在15歲,是尤文肉瘤家族腫瘤(ESFT)的重要一員。EWS具有高轉(zhuǎn)移的特性,約25%的患者在診斷時已發(fā)生轉(zhuǎn)移。此外,EWS患者的預(yù)后很不樂觀,轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的EWS患者,5年無病生存率僅為10%-20%。因此,尋找新型的生物預(yù)后標(biāo)記物對EWS患者至關(guān)重要。EZH2(enhancer of zeste homolog2)是果蠅zeste基因增強子的人類同源基因,屬pcG (polycomb group)基因家族的重要成員之一,在癌癥的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要作用。EZH2基因通過特定的SET結(jié)構(gòu)域?qū)诵◇w組蛋白H3的27位賴氨酸(H3K27)進行甲基化修飾,然后觸發(fā)PRC1復(fù)合物成分在特定基因位點聚集從而導(dǎo)致下游靶基因沉默,包括抑癌基因的沉默等。近年來研究發(fā)現(xiàn),EZH2在前列腺癌、乳腺癌、膀朧癌、肝細(xì)胞癌、大腸癌、胃癌等多種惡性腫瘤中高表達(dá)。但是目前尚未有報道涉及EZH2在EWS患者組織中的表達(dá)及對預(yù)后的影響。微小RNA (microRNAs, miRNAs)是一類內(nèi)源性的單鏈非編碼小分子RNA,約有18-25個核苷酸分子。通過與多種靶基因3’-UTR區(qū)配對,調(diào)控下游靶基因的表達(dá),在惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要作用。miRNAs即可以作為癌基因促進惡性腫瘤的進展,也可以發(fā)揮抑癌基因抑制腫瘤的生長。本課題研究的目的是檢測micoRNAs在EWS中的差異性表達(dá),分析miR-127-3p 與 P53、Ki-67和EGFR腫瘤分子的相關(guān)性及病人各臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系,為EWS患者發(fā)現(xiàn)新的治療靶點和生物預(yù)后標(biāo)志物提供實驗依據(jù)。本論文主要從以下二部分進行研究:1、miRNAs在EWS組織中的差異性表達(dá)及miR-127-3p與P53、EGFR和Ki-67腫瘤分子的相關(guān)性分析及臨床意義探討2、EZH2在EWS組織中的表達(dá)特征及預(yù)后相關(guān)性分析。[研究方法]收集81例尤文肉瘤/原始神經(jīng)外胚層腫瘤(Ewing sarcoma/pr--imitive neuroectodermal tumor, EWS/PNET)和其他小圓細(xì)胞惡性腫瘤石蠟標(biāo)本并構(gòu)建組織芯片,使用熒光原位雜交(FISH)檢測尤文肉瘤斷裂位點1(EWSR1)基因易位;分別選擇3例生存時間不足一年和超過3年的石蠟標(biāo)本送公司做microRNAs芯片,尋找EWS組織中差異表達(dá)的microRNAs;應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測腫瘤組織標(biāo)本中EZH2,P53、Ki-67和EGFR的表達(dá),并分析miR-127-3p和EZH2與P53、Ki-67、EGFR的相關(guān)性,以及與EWS患者預(yù)后的關(guān)系,從而發(fā)現(xiàn)新型生物預(yù)后標(biāo)記物。EZH2和miR-127-3p對細(xì)胞功能的影響通過增殖、遷移、侵襲等試驗來檢測。[結(jié)果分析]1、microRNAs芯片結(jié)果顯示多個差異表達(dá)的microRNAs,根據(jù)P值和信號值的大小,選擇前五個microRNAs(hsa-miR-127-3p,hsa-miR-369-5p, hsa-miR-532-5p, hsa-miR-376c-3p, hsa-miR-497-5p)進行驗證,發(fā)現(xiàn)miR-127-3p的表達(dá)與EWS患者的預(yù)后關(guān)系最為密切,并具有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.002),且miR-123-3p的表達(dá)與生存時間相關(guān)(p=0.002)。Cox多因素分析顯示,miR-127-3p可以作為EWS患者預(yù)后的獨立危險因子(HR:0.328,HR:0.102-1.055,P=0.016)。在細(xì)胞水平上,miR-127-3p可以抑制EWS細(xì)胞的遷移和侵襲能力,提示miR-127-3p在EWS發(fā)生發(fā)展中起抑癌基因的作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)EZH2與miR-127-3p具有負(fù)相關(guān)關(guān)系。2、EZH2蛋白在EWS組織中的高表達(dá)與肺轉(zhuǎn)移(p=0.046)、生存時間(p=0.004)及Ki-67的表達(dá)密切相關(guān)(P=0.007)。K-M分析顯示,EZH2高表達(dá)與患者不良預(yù)后顯著相關(guān)(P=0.006);Cox多因素分析表明,EZH2是影響患者總體生存的獨立預(yù)后判定因子(HR=3.467,95%CI=1.138-10.563,P=0.029)。細(xì)胞水平上,我們發(fā)現(xiàn)EZH2干擾后明顯降低了EWS細(xì)胞的遷移、侵襲和增殖能力,提示EZH2在EWS發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮癌基因的作用。[實驗結(jié)論]EZH2和miR-127-3p可以作為判斷EWS預(yù)后的新型生物標(biāo)志物,并有可能成為EWS治療的分子靶點。同時,miR-127-3p可以抑制EWS的發(fā)生和發(fā)展過程,發(fā)現(xiàn)EZH2和miR-127-3p具有一定的負(fù)相關(guān)關(guān)系。
【學(xué)位授予單位】:山東大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類號】:R738
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,本文編號:1220506
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