本文關鍵詞：EZH2和miR-127在中國尤文肉瘤患者中的表達特征及預后相關性分析

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【摘要】：[背景目的]尤文肉瘤(Ewing's sarcoma, EWS)是兒童和青少年第二大常見的原發(fā)性惡性骨腫瘤,平均發(fā)病年齡在15歲,是尤文肉瘤家族腫瘤(ESFT)的重要一員。EWS具有高轉移的特性,約25%的患者在診斷時已發(fā)生轉移。此外,EWS患者的預后很不樂觀,轉移或復發(fā)的EWS患者,5年無病生存率僅為10%-20%。因此,尋找新型的生物預后標記物對EWS患者至關重要。EZH2(enhancer of zeste homolog2)是果蠅zeste基因增強子的人類同源基因,屬pcG (polycomb group)基因家族的重要成員之一,在癌癥的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要作用。EZH2基因通過特定的SET結構域對核小體組蛋白H3的27位賴氨酸(H3K27)進行甲基化修飾,然后觸發(fā)PRC1復合物成分在特定基因位點聚集從而導致下游靶基因沉默,包括抑癌基因的沉默等。近年來研究發(fā)現(xiàn),EZH2在前列腺癌、乳腺癌、膀朧癌、肝細胞癌、大腸癌、胃癌等多種惡性腫瘤中高表達。但是目前尚未有報道涉及EZH2在EWS患者組織中的表達及對預后的影響。微小RNA (microRNAs, miRNAs)是一類內源性的單鏈非編碼小分子RNA,約有18-25個核苷酸分子。通過與多種靶基因3’-UTR區(qū)配對,調控下游靶基因的表達,在惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要作用。miRNAs即可以作為癌基因促進惡性腫瘤的進展,也可以發(fā)揮抑癌基因抑制腫瘤的生長。本課題研究的目的是檢測micoRNAs在EWS中的差異性表達,分析miR-127-3p 與 P53、Ki-67和EGFR腫瘤分子的相關性及病人各臨床病理參數(shù)之間的關系,為EWS患者發(fā)現(xiàn)新的治療靶點和生物預后標志物提供實驗依據(jù)。本論文主要從以下二部分進行研究：1、miRNAs在EWS組織中的差異性表達及miR-127-3p與P53、EGFR和Ki-67腫瘤分子的相關性分析及臨床意義探討2、EZH2在EWS組織中的表達特征及預后相關性分析。[研究方法]收集81例尤文肉瘤／原始神經(jīng)外胚層腫瘤(Ewing sarcoma/pr--imitive neuroectodermal tumor, EWS/PNET)和其他小圓細胞惡性腫瘤石蠟標本并構建組織芯片,使用熒光原位雜交(FISH)檢測尤文肉瘤斷裂位點1(EWSR1)基因易位；分別選擇3例生存時間不足一年和超過3年的石蠟標本送公司做microRNAs芯片,尋找EWS組織中差異表達的microRNAs;應用免疫組織化學法檢測腫瘤組織標本中EZH2,P53、Ki-67和EGFR的表達,并分析miR-127-3p和EZH2與P53、Ki-67、EGFR的相關性,以及與EWS患者預后的關系,從而發(fā)現(xiàn)新型生物預后標記物。EZH2和miR-127-3p對細胞功能的影響通過增殖、遷移、侵襲等試驗來檢測。[結果分析]1、microRNAs芯片結果顯示多個差異表達的microRNAs,根據(jù)P值和信號值的大小,選擇前五個microRNAs(hsa-miR-127-3p,hsa-miR-369-5p, hsa-miR-532-5p, hsa-miR-376c-3p, hsa-miR-497-5p)進行驗證,發(fā)現(xiàn)miR-127-3p的表達與EWS患者的預后關系最為密切,并具有統(tǒng)計學意義(p=0.002),且miR-123-3p的表達與生存時間相關(p=0.002)。Cox多因素分析顯示,miR-127-3p可以作為EWS患者預后的獨立危險因子(HR:0.328,HR：0.102-1.055,P=0.016)。在細胞水平上,miR-127-3p可以抑制EWS細胞的遷移和侵襲能力,提示miR-127-3p在EWS發(fā)生發(fā)展中起抑癌基因的作用。結果發(fā)現(xiàn)EZH2與miR-127-3p具有負相關關系。2、EZH2蛋白在EWS組織中的高表達與肺轉移(p=0.046)、生存時間(p=0.004)及Ki-67的表達密切相關(P=0.007)。K-M分析顯示,EZH2高表達與患者不良預后顯著相關(P=0.006)；Cox多因素分析表明,EZH2是影響患者總體生存的獨立預后判定因子(HR=3.467,95%CI=1.138-10.563,P=0.029)。細胞水平上,我們發(fā)現(xiàn)EZH2干擾后明顯降低了EWS細胞的遷移、侵襲和增殖能力,提示EZH2在EWS發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮癌基因的作用。[實驗結論]EZH2和miR-127-3p可以作為判斷EWS預后的新型生物標志物,并有可能成為EWS治療的分子靶點。同時,miR-127-3p可以抑制EWS的發(fā)生和發(fā)展過程,發(fā)現(xiàn)EZH2和miR-127-3p具有一定的負相關關系。
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R738

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本文編號：1220506