本文關(guān)鍵詞：miR-125b靶向SEMA4C調(diào)控乳腺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞EMT研究

  更多相關(guān)文章： miRNA-125b SEMA4C 乳腺癌 紫杉醇 EMT

【摘要】：背景:乳腺癌是引起女性死亡的主要原因之一。紫杉醇(Paclitaxel)是臨床轉(zhuǎn)移性和侵襲性乳腺癌一線化療藥物,但其耐受性限制其臨床應(yīng)用。研究發(fā)現(xiàn),化療耐藥性的產(chǎn)生與細(xì)胞EMT(epithelial-mesenchymal transition,上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)變)過程具有一定的相關(guān)性,針對(duì)EMT誘導(dǎo)機(jī)制的研究利于乳腺癌臨床輔助化療方案的制定。micro RNAs(mi RNA)是乳腺的發(fā)育和乳腺癌發(fā)生發(fā)展等生理病理過程中控制基因表達(dá)的主要調(diào)控因子,越來越多的證據(jù)顯示在乳腺癌化療介導(dǎo)的EMT過程中扮演著重要角色,可通過抑制EMT誘導(dǎo)物控制細(xì)胞的可塑性,或通過抑制介導(dǎo)細(xì)胞上皮以及間質(zhì)形態(tài)的靶基因來影響細(xì)胞的形態(tài)。目的:研究mi R-125b對(duì)人乳腺癌MCF-7、SKBR-3紫杉醇耐藥細(xì)胞株(下面簡(jiǎn)稱“MCF-7/PR”和“SKBR3/PR”)EMT過程的調(diào)控作用及機(jī)制。方法:⑴qRT-PCR檢測(cè)mi R-125b在24對(duì)乳腺癌標(biāo)本及其對(duì)應(yīng)的癌旁標(biāo)本的表達(dá)以及在乳腺癌親本細(xì)胞株MCF-7,SKBR-3和對(duì)應(yīng)的人乳腺癌MCF-7、SKBR3紫杉醇耐藥細(xì)胞株MCF-7/PR”和“SKBR-3/PR的表達(dá)情況;⑵利用化學(xué)合成的mi R-125b類似物轉(zhuǎn)染MCF-7/PR、SKBR-3/PR細(xì)胞,通過傷口愈合實(shí)驗(yàn)(Wound-healing assay)、細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)(Transwell assay)、細(xì)胞黏附與分離實(shí)驗(yàn)(Attachment and detachment assay)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的生物學(xué)活性的改變,倒置顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染后MCF-7/PR、SKBR-3/PR細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變;⑶利用q RT-PCR和Western blotting技術(shù)檢測(cè)mi R-125b類似物轉(zhuǎn)染MCF-7/PR、SKBR-3/PR細(xì)胞后EMT相關(guān)指標(biāo)E-cadherin、Snail、Slug、Vimentin在分子水平和蛋白水平上的改變;⑷利用生物信息學(xué)技術(shù)預(yù)測(cè)mi R-125b的靶基因,并通過熒光素酶實(shí)驗(yàn)、q RT-PCR和Western blotting技術(shù)驗(yàn)證;⑸免疫組化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SEMAC在乳腺癌組織中的表達(dá)情況;⑹采用Fisher確切概率法分析乳腺癌中mi R-125b及其靶基因SEMA4C的表達(dá)與患者病理特征間的相關(guān)性;⑺利用RNA干擾技術(shù)下調(diào)SEMA4C的表達(dá),通過劃痕實(shí)驗(yàn)、趨化實(shí)驗(yàn)、粘附分離實(shí)驗(yàn),分析SEMA4C對(duì)MCF-7/PR、SKBR-3/PR細(xì)胞生物學(xué)活性影響;⑻利用q RT-PCR和Western blotting技術(shù)檢測(cè)SEMA4C干擾后EMT相關(guān)標(biāo)志物的表達(dá)改變;⑼SRB實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染mi R-125b類似物和SEMA4C干擾后MCF-7/PR、SKBR-3/PR細(xì)胞對(duì)紫杉醇的藥物敏感性變化。結(jié)果:⑴mi R-125b在乳腺癌組織中的表達(dá)明顯低于對(duì)應(yīng)的癌旁組織,相應(yīng)的在人乳腺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞株的表達(dá)低于其對(duì)應(yīng)的親本細(xì)胞株;⑵轉(zhuǎn)染mi R-125b類似物后耐藥細(xì)胞株的黏附分離能力、遷移能力和趨化能力明顯低于對(duì)照組(P0.05),鏡下觀察發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染后的耐藥細(xì)胞由瘦長(zhǎng)的成纖維樣細(xì)胞形態(tài)逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)闇唸A的上皮樣細(xì)胞形態(tài);⑶轉(zhuǎn)染mi R-125b類似物后耐藥細(xì)胞株上皮細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志E-cadherin明顯升高(P0.05);間質(zhì)細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志如Slug、Snail、Vimentin(P0.05)明顯下降;⑷生物信息學(xué)分析表明SEMA4C是mi R-125b的潛在靶基因之一,熒光素酶實(shí)驗(yàn)、q RT-PCR和Western blotting技術(shù)進(jìn)一步證實(shí);⑸免疫組化實(shí)驗(yàn)證實(shí)SEMA4C在乳腺癌組織中高表達(dá),mi R-125b的表達(dá)與SEMA4C負(fù)相關(guān),臨床病理資料分析發(fā)現(xiàn)兩者與cerb B-2表達(dá)及乳腺癌淋巴轉(zhuǎn)移成負(fù)相關(guān);⑹SEMA4C si RNA能夠有效地下調(diào)耐藥細(xì)胞株中SEMA4C的表達(dá),并抑制耐藥細(xì)胞的遷移侵襲和黏附分離能力(P0.05);⑺SEMA4C干擾后E-cadherin的表達(dá)上調(diào)(P0.05),Slug、Snail和Vimentin的表達(dá)下調(diào)(P0.05),(P0.01);⑻轉(zhuǎn)染mi R-125b類似物或干擾SEMA4C表達(dá)提高M(jìn)CF-7/PR和SKBR3/PR細(xì)胞對(duì)紫杉醇的敏感性。結(jié)論:mi R-125b在紫杉醇誘導(dǎo)的乳腺癌耐藥細(xì)胞株EMT改變中下調(diào),可能通過其靶基因之一SEMA4C在EMT形成中發(fā)揮關(guān)鍵的角色;上調(diào)mi R-125b或下調(diào)SEMA4C的表達(dá)可逆轉(zhuǎn)EMT,利于臨床乳腺癌輔助化療方案的制定。
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.9

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 黃嘯原;用“印度閱兵”形容乳腺癌合適嗎?[J];診斷病理學(xué)雜志;2001年02期

2 張嘉慶,王殊,喬新民;乳腺癌的現(xiàn)狀和遠(yuǎn)景[J];中華外科雜志;2002年03期

3 張維彬,汪波,石靈春;中醫(yī)藥在現(xiàn)代乳腺癌治療中的運(yùn)用[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合急救雜志;2002年01期

4 薛志勇;食物與乳腺癌[J];山東食品科技;2002年04期

5 王旬果,王建軍,鄭國(guó)華;乳腺癌相關(guān)標(biāo)志物的研究進(jìn)展[J];山東醫(yī)藥;2002年33期

6 陸尚聞;;男人也患乳腺癌[J];環(huán)境;2003年12期

7 ;新技術(shù)清晰拍攝早期乳腺癌細(xì)胞[J];上海生物醫(yī)學(xué)工程;2005年04期

8 田富國(guó);郭向陽(yáng);張華一;;乳腺癌診治研究新進(jìn)展[J];腫瘤研究與臨床;2005年S1期

9 馬濤,谷俊朝;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與乳腺癌的臨床研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(外科學(xué)分冊(cè));2005年01期

10 郭慶良,谷俊朝;乳腺癌和瘦素相關(guān)性研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).外科學(xué)分冊(cè);2005年03期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 于永利;;抗乳腺癌免疫治療融合蛋白[A];中國(guó)免疫學(xué)會(huì)第四屆學(xué)術(shù)大會(huì)會(huì)議議程及論文摘要集[C];2002年

2 郭紅飛;;中醫(yī)治療乳腺癌的策略[A];江西省中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合腫瘤學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2012年

3 龐朋沙;伍會(huì)健;;乳腺癌治療靶標(biāo)的研究進(jìn)展[A];北方遺傳資源的保護(hù)與利用研討會(huì)論文匯編[C];2010年

4 陸勁松;邵志敏;吳炅;韓企夏;沈鎮(zhèn)宙;;新型維甲酸抑制乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)及誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制研究[A];2000全國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2000年

5 劉愛國(guó);胡冰;;乳腺癌臨床治療進(jìn)展[A];安徽省抗癌協(xié)會(huì)第四次代表大會(huì)暨乳腺癌、肺癌專業(yè)委員會(huì)成立會(huì)議、安徽省腫瘤防治進(jìn)展學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2001年

6 張嘉慶;王殊;喬新民;;乳腺癌的現(xiàn)狀和遠(yuǎn)景[A];第一屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合乳腺疾病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2002年

7 劉清俊;;乳腺癌綜合治療的新進(jìn)展[A];山西省抗癌協(xié)會(huì)第六屆腫瘤學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2003年

8 邵志敏;;21世紀(jì)乳腺癌治療的展望[A];第三屆中國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)教育論文集[C];2004年

9 陳松旺;張明;;乳腺癌治療的回顧與展望[A];西部地區(qū)腫瘤學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

10 白霞;傅建新;丁凱陽(yáng);王兆鉞;阮長(zhǎng)耿;;組織因子途徑抑制物-2在乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)研究[A];第10屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要匯編[C];2005年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 ;血檢有望揭示乳腺癌治療效果[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2004年

2 記者 鄭曉春;乳腺癌細(xì)胞擴(kuò)散基因被找到[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

3 中國(guó)軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤中心主任 宋三泰;乳腺癌有了新療法[N];中國(guó)婦女報(bào);2002年

4 王艷紅;抑制ＤＮＡ修補(bǔ)可消滅乳腺癌細(xì)胞[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2005年

5 詹建;乳腺癌飲食 兩個(gè)時(shí)期不一樣[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2006年

6 辛君;乳腺癌擴(kuò)散基因“浮出水面”[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2009年

7 記者 毛黎;美發(fā)現(xiàn)有效抑制乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的分子[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

8 記者 吳春燕　通訊員 王麗霞;乳腺癌治療將有新途徑[N];光明日?qǐng)?bào);2011年

9 王樂　沈基飛;我科學(xué)家發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致乳腺癌耐藥的新標(biāo)志物[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

10 劉霞;一種天然分子能阻止乳腺癌惡化[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 柴紅燕;疾病狀態(tài)下CYP4Z1和4A的生物學(xué)行為及其藥物干預(yù)研究[D];武漢大學(xué);2012年

2 李凱;ID(inhibitor of DNA binding)家族蛋白調(diào)控乳腺細(xì)胞的分化并影響乳腺癌的預(yù)后[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 江一舟;乳腺癌新輔助化療前后基因變異檢測(cè)及其功能論證[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 馬邵;酪氨酸去磷酸化增強(qiáng)表皮生長(zhǎng)因子受體在乳腺癌治療中靶向性的研究[D];山東大學(xué);2015年

5 姚若斯;精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶PRMT7誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞發(fā)生表皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)換及轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制研究[D];東北師范大學(xué);2015年

6 侯培鋒;α-酮戊二酸二甲酯(DM-2KG)上調(diào)缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)誘發(fā)高致瘤性干細(xì)胞樣乳腺癌細(xì)胞機(jī)制研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2014年

7 李麗麗;分泌蛋白SHON調(diào)控乳腺癌細(xì)胞EMT的分子機(jī)制研究[D];東北師范大學(xué);2015年

8 陳麗艷;PI3K抑制劑聯(lián)合組蛋白去乙�；敢种苿⿲�(duì)乳腺癌協(xié)同殺傷作用的分子機(jī)制研究[D];延邊大學(xué);2015年

9 樸俊杰;乳腺癌差異基因篩選及PAIP1對(duì)其生物學(xué)行為的影響[D];延邊大學(xué);2015年

10 汪[?如;染色體6q25.1區(qū)域基因多態(tài)性與乳腺癌遺傳易感性的關(guān)聯(lián)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 杜文英;乳腺癌分子亞型的臨床與病理特點(diǎn)[D];鄭州大學(xué);2011年

2 賈曉菲;彩色多普勒超聲與乳腺癌病理及免疫組化指標(biāo)的相關(guān)性研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

3 靳文;乳腺癌全基因組DNA甲基化修飾的研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

4 吳坤琳;TLR4/MyD88信號(hào)通路對(duì)乳腺癌侵襲性影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

5 葛廣哲;樹，

本文編號(hào)：1219204