本文關(guān)鍵詞：miR-206通過抑制NK1R-FL表達(dá)促進(jìn)乳腺癌生長的機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： microRNA-206 神經(jīng)肌肽受體-1 乳腺癌 增殖 侵襲

【摘要】：研究背景和目的:乳腺癌是女性最常見的癌癥,是引起女性癌癥相關(guān)的發(fā)病率和死亡率的主要原因之一。神經(jīng)肽P物質(zhì)(Substance P,SP)是速激肽家族的重要成員,通過與其受體NK1R(Neurokinin-1 receptor,NK1R)結(jié)合在人類乳腺癌的發(fā)生和進(jìn)展中起著重要的作用。目前為止發(fā)現(xiàn)NK1R有兩種亞型:全長型受體(full-length NK1R)NK1R-FL和胞內(nèi)端缺少96個氨基酸殘基的截短型受體(truncated NK1R)NK1R-Tr。我們前期研究顯示乳腺癌細(xì)胞中NK1R-FL的表達(dá)與乳腺癌的進(jìn)展呈負(fù)相關(guān),并通過生物學(xué)信息學(xué)研究發(fā)現(xiàn)miR-206可以靶調(diào)控人NK1R-FL基因。MicroRNA(miRNA)可以通過與其靶基因mRNA 3’端非編碼區(qū)(3’Untranslated regions,3’-UTR)以堿基互補(bǔ)配對的方式結(jié)合,使靶基因mRNA降解或翻譯受到抑制,負(fù)向調(diào)控靶基因的表達(dá)。mi RNA在腫瘤中參與其發(fā)生、發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移等多個病理過程。本課題旨在研究乳腺癌中miR-206與NK1R-FL的表達(dá)水平之間的關(guān)系,進(jìn)一步,進(jìn)一步在細(xì)胞水平進(jìn)行驗(yàn)證,并探索miR-206/NK1R-FL信號通路對乳腺癌侵襲、轉(zhuǎn)移和增殖等生物學(xué)行為的影響。研究方法:1.組織水平:乳腺癌組織中mi R-206與NK1R-FL的表達(dá)分析。收集82對乳腺癌組織及其配對的癌旁組織,提取總RNA,用qRT-PCR檢測組織中NK1R-FL和miR-206表達(dá)水平;用免疫組織化學(xué)方法檢測總NK1R和NK1R-FL在乳腺癌組織及其配對的癌旁組織中的表達(dá)情況;用qRT-PCR檢測乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231、MCF-7、T47D、SK-BR-3和非腫瘤源性的乳腺上皮系HBL-100中NK1R-FL和mi R-206表達(dá)水平;通過Pearson’s相關(guān)分析檢驗(yàn)miR-206與NK1R-FL mRNA的表達(dá)水平相關(guān)性。2.靶點(diǎn)預(yù)測及相互調(diào)控的驗(yàn)證:NK1R-FL的3’-UTR是否存在miR-206的靶向結(jié)合位點(diǎn)及相互調(diào)控作用。通過TargetScan、PicTar、mi Rnada等生物信息學(xué)軟件初步預(yù)測了NK1R-FL的3’-UTR存在三個miR-206的靶向結(jié)合位點(diǎn)并通過熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證;然后在乳腺癌細(xì)胞系SK-BR-3和非腫瘤源性的乳腺上皮HBL-100中轉(zhuǎn)染miR-206 mimics,在乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231中轉(zhuǎn)染miR-206 inhibitors,westernblot及qrt-pcr檢測nk1r-fl的表達(dá)水平。3.sp-nk1r信號通路分析:驗(yàn)證mir-206通過靶調(diào)控nk1r-fl對乳腺癌細(xì)胞ca2+內(nèi)流及信號通路的改變。通過檢測胞內(nèi)ins(1,4,5)p3濃度的變化來探究mir-206在nk1r-fl依賴細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)的過程中的作用;通過觀察未轉(zhuǎn)染(nc)組和轉(zhuǎn)染了mir-206mimic組乳腺癌細(xì)胞p-erk1/2的改變來探究mir-206通過靶調(diào)控nk1r-fl對乳腺癌細(xì)胞erk1/2信號通路的作用。4.生物學(xué)行為影響研究:驗(yàn)證mir-206-nk1r-fl信號通路對乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。首先在乳腺癌細(xì)胞系sk-br-3中轉(zhuǎn)染mir-206mimics/negativecontrol,并通過cck8增殖實(shí)驗(yàn),transwell侵襲和轉(zhuǎn)移及克隆形成實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證mir-206對乳腺癌細(xì)胞增殖、侵襲及克隆形成能力的影響。在乳腺癌細(xì)胞系mda-mb-231中轉(zhuǎn)染mir-206inhibitor/inhibitorcontrol,并通過cck8增殖實(shí)驗(yàn),transwell侵襲和轉(zhuǎn)移及克隆形成實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證mir-206對乳腺癌細(xì)胞增殖、侵襲及克隆形成能力的影響。結(jié)果:1.乳腺癌組織mir-206與nk1r-fl的表達(dá)分析:與癌旁組織相比,乳腺癌組織中nk1r-fl蛋白水平較低,mir-206的表達(dá)水平較高,且均與乳腺癌的腫瘤分期分級及有無淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。與非腫瘤源性人乳腺上皮細(xì)胞系hbl-100相比,nk1r-fl在乳腺癌細(xì)胞系mda-mb-231、mcf-7、t47d、sk-br-3表達(dá)水平較低,mir-206的表達(dá)水平則相對較高。且在乳腺癌組織中,mir-206與nk1r-flmrna的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。2.靶點(diǎn)預(yù)測及相互調(diào)控的驗(yàn)證:通過生物信息軟件預(yù)測了在nk1r-fl的3’-utr區(qū)存在mir-206的3個靶向結(jié)合位點(diǎn),接著又通過細(xì)胞水平的熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證mir-206可直接與nk1r-fl的3’-utr區(qū)結(jié)合對其進(jìn)行轉(zhuǎn)錄調(diào)控;在乳腺癌細(xì)胞系sk-br-3和非腫瘤源性的乳腺上皮hbl-100中轉(zhuǎn)染mir-206mimics后nk1r-fl的mrna及蛋白水平均下降;在乳腺癌細(xì)胞系mda-mb-231中轉(zhuǎn)染了mir-206inhibitors后nk1r-fl的mrna及蛋白水平均升高。3.sp-nk1r信號通路分析:mir-206通過下調(diào)nk1r-fl的表達(dá)從而使胞內(nèi)ins(1,4,5)p3的水平降低,從而使ca2+內(nèi)流的時間延長;mir-206通過下調(diào)NK1R-FL的表達(dá)從而使胞內(nèi)ERK1/2的激活時間延長。4.生物學(xué)行為影響研究:mi R-206可直接與NK1R-FL的3’-UTR區(qū)結(jié)合,發(fā)揮其轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用,引起NK1R-FL表達(dá)水平下降,從而促進(jìn)腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移、克隆形成和增殖。結(jié)論:乳腺癌組織及乳腺癌細(xì)胞系中miR-206高表達(dá)、NK1R-FL低表達(dá),隨乳腺癌進(jìn)展兩者表達(dá)呈負(fù)相關(guān);miR-206通過靶抑制NK1R-FL表達(dá)作用下游信號通路從而促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移、克隆形成和增殖。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 黃嘯原;用“印度閱兵”形容乳腺癌合適嗎?[J];診斷病理學(xué)雜志;2001年02期

2 張嘉慶,王殊,喬新民;乳腺癌的現(xiàn)狀和遠(yuǎn)景[J];中華外科雜志;2002年03期

3 張維彬,汪波,石靈春;中醫(yī)藥在現(xiàn)代乳腺癌治療中的運(yùn)用[J];中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志;2002年01期

4 薛志勇;食物與乳腺癌[J];山東食品科技;2002年04期

5 王旬果,王建軍,鄭國華;乳腺癌相關(guān)標(biāo)志物的研究進(jìn)展[J];山東醫(yī)藥;2002年33期

6 陸尚聞;;男人也患乳腺癌[J];環(huán)境;2003年12期

7 ;新技術(shù)清晰拍攝早期乳腺癌細(xì)胞[J];上海生物醫(yī)學(xué)工程;2005年04期

8 田富國;郭向陽;張華一;;乳腺癌診治研究新進(jìn)展[J];腫瘤研究與臨床;2005年S1期

9 馬濤,谷俊朝;血管內(nèi)皮生長因子與乳腺癌的臨床研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(外科學(xué)分冊);2005年01期

10 郭慶良,谷俊朝;乳腺癌和瘦素相關(guān)性研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué).外科學(xué)分冊;2005年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 于永利;;抗乳腺癌免疫治療融合蛋白[A];中國免疫學(xué)會第四屆學(xué)術(shù)大會會議議程及論文摘要集[C];2002年

2 郭紅飛;;中醫(yī)治療乳腺癌的策略[A];江西省中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合腫瘤學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2012年

3 龐朋沙;伍會健;;乳腺癌治療靶標(biāo)的研究進(jìn)展[A];北方遺傳資源的保護(hù)與利用研討會論文匯編[C];2010年

4 陸勁松;邵志敏;吳炅;韓企夏;沈鎮(zhèn)宙;;新型維甲酸抑制乳腺癌細(xì)胞的生長及誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制研究[A];2000全國腫瘤學(xué)術(shù)大會論文集[C];2000年

5 劉愛國;胡冰;;乳腺癌臨床治療進(jìn)展[A];安徽省抗癌協(xié)會第四次代表大會暨乳腺癌、肺癌專業(yè)委員會成立會議、安徽省腫瘤防治進(jìn)展學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2001年

6 張嘉慶;王殊;喬新民;;乳腺癌的現(xiàn)狀和遠(yuǎn)景[A];第一屆全國中西醫(yī)結(jié)合乳腺疾病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2002年

7 劉清俊;;乳腺癌綜合治療的新進(jìn)展[A];山西省抗癌協(xié)會第六屆腫瘤學(xué)術(shù)交流會論文匯編[C];2003年

8 邵志敏;;21世紀(jì)乳腺癌治療的展望[A];第三屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會教育論文集[C];2004年

9 陳松旺;張明;;乳腺癌治療的回顧與展望[A];西部地區(qū)腫瘤學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

10 白霞;傅建新;丁凱陽;王兆鉞;阮長耿;;組織因子途徑抑制物-2在乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)研究[A];第10屆全國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會議論文摘要匯編[C];2005年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;血檢有望揭示乳腺癌治療效果[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2004年

2 記者 鄭曉春;乳腺癌細(xì)胞擴(kuò)散基因被找到[N];科技日報(bào);2007年

3 中國軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤中心主任 宋三泰;乳腺癌有了新療法[N];中國婦女報(bào);2002年

4 王艷紅;抑制ＤＮＡ修補(bǔ)可消滅乳腺癌細(xì)胞[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2005年

5 詹建;乳腺癌飲食 兩個時期不一樣[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2006年

6 辛君;乳腺癌擴(kuò)散基因“浮出水面”[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2009年

7 記者 毛黎;美發(fā)現(xiàn)有效抑制乳腺癌細(xì)胞生長的分子[N];科技日報(bào);2010年

8 記者 吳春燕　通訊員 王麗霞;乳腺癌治療將有新途徑[N];光明日報(bào);2011年

9 王樂　沈基飛;我科學(xué)家發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致乳腺癌耐藥的新標(biāo)志物[N];科技日報(bào);2011年

10 劉霞;一種天然分子能阻止乳腺癌惡化[N];科技日報(bào);2011年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 柴紅燕;疾病狀態(tài)下CYP4Z1和4A的生物學(xué)行為及其藥物干預(yù)研究[D];武漢大學(xué);2012年

2 李凱;ID(inhibitor of DNA binding)家族蛋白調(diào)控乳腺細(xì)胞的分化并影響乳腺癌的預(yù)后[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 江一舟;乳腺癌新輔助化療前后基因變異檢測及其功能論證[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 馬邵;酪氨酸去磷酸化增強(qiáng)表皮生長因子受體在乳腺癌治療中靶向性的研究[D];山東大學(xué);2015年

5 姚若斯;精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶PRMT7誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞發(fā)生表皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)換及轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制研究[D];東北師范大學(xué);2015年

6 侯培鋒;α-酮戊二酸二甲酯(DM-2KG)上調(diào)缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)誘發(fā)高致瘤性干細(xì)胞樣乳腺癌細(xì)胞機(jī)制研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2014年

7 李麗麗;分泌蛋白SHON調(diào)控乳腺癌細(xì)胞EMT的分子機(jī)制研究[D];東北師范大學(xué);2015年

8 陳麗艷;PI3K抑制劑聯(lián)合組蛋白去乙�；敢种苿⿲θ橄侔﹨f(xié)同殺傷作用的分子機(jī)制研究[D];延邊大學(xué);2015年

9 樸俊杰;乳腺癌差異基因篩選及PAIP1對其生物學(xué)行為的影響[D];延邊大學(xué);2015年

10 汪[?如;染色體6q25.1區(qū)域基因多態(tài)性與乳腺癌遺傳易感性的關(guān)聯(lián)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 杜文英;乳腺癌分子亞型的臨床與病理特點(diǎn)[D];鄭州大學(xué);2011年

2 賈曉菲;彩色多普勒超聲與乳腺癌病理及免疫組化指標(biāo)的相關(guān)性研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

3 靳文;乳腺癌全基因組DNA甲基化修飾的研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

4 吳坤琳;TLR4/MyD88信號通路對乳腺癌侵襲性影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

5 葛廣哲;樹，

本文編號：1219091