本文關(guān)鍵詞：靶向肝癌細(xì)胞和肝癌干細(xì)胞的共載鹽霉素鈉和阿霉素納米脂質(zhì)體的體內(nèi)外研究

  更多相關(guān)文章： 鹽霉素鈉 阿霉素 肝癌細(xì)胞 肝癌干細(xì)胞 納米脂質(zhì)體 藥物聯(lián)用 協(xié)同作用

【摘要】：從全球范圍來(lái)看,中國(guó)是世界上肝癌發(fā)病率最高的國(guó)家。目前肝癌的治療手段主要有手術(shù)治療、放射治療和化學(xué)藥物治療等,就目前肝癌的治療情況而言,化學(xué)藥物治療肝癌是肝癌治療的重要手段之一。目前肝癌難以治愈的原因之一為肝癌細(xì)胞對(duì)抗肝癌藥物的耐藥性,使得肝癌細(xì)胞不能被全部消滅,而導(dǎo)致肝癌的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移；另一原因?yàn)樾陆岢龅摹澳[瘤干細(xì)胞學(xué)說(shuō)”,普通的抗肝癌藥物只能有效殺傷肝癌細(xì)胞,而對(duì)肝癌干細(xì)胞具有耐藥性,導(dǎo)致肝癌干細(xì)胞比例在肝癌組織中的比例上升,極易誘發(fā)肝癌的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移。針對(duì)上述問(wèn)題,我們提出兩種方案：1、利用抗腫瘤藥物的聯(lián)用治療肝癌,增大抗腫瘤范圍,增強(qiáng)肝癌的治愈效果；2、利用抗肝癌干細(xì)胞藥物殺傷肝癌干細(xì)胞,有效防止肝癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。結(jié)合兩種方案,本課題選擇傳統(tǒng)的抗肝癌藥物與抗肝癌干細(xì)胞藥物聯(lián)用治療肝癌,能夠分別選擇性作用于肝癌細(xì)胞和肝癌干細(xì)胞,實(shí)現(xiàn)同時(shí)殺傷,以期達(dá)到肝癌根治的效果。鹽霉素(SAL)是一種環(huán)醚類的離子載體抗生素,可以選擇性作用于多種腫瘤干細(xì)胞,包括肝癌干細(xì)胞,據(jù)報(bào)道鹽霉素鈉(SAL-Na)也具有相似效果。阿霉素(DOX)是治療肝癌的一種常用化療藥物。本課題將利用納米脂質(zhì)體作為藥物載體包載抗肝癌干細(xì)胞藥物SAL-Na和抗肝癌藥物DOX,靶向遞送至肝腫瘤部位,以達(dá)到肝癌的有效治療的同時(shí)降低藥物對(duì)機(jī)體正常組織的毒副作用。成功建立SAL-Na和DOX的HPLC體外含量測(cè)定方法學(xué)。SAL-Na的線性方程為：A=419.4C-226.7(r2=0.9994),線性范圍為：7.8～1000 μg/mL。DOX的線性方程為：A=13814C+192.8(r2=0.9997),線性范圍為：0.19～50 μg/mL。經(jīng)考察,SAL-Na與DOX方法學(xué)中藥物的線性相關(guān)性、特異性、日內(nèi)精密度、日間精密度、回收率、穩(wěn)定性等方法學(xué)參數(shù)均符合藥物的含量測(cè)定要求。為下一步載藥納米脂質(zhì)體的包封率、載藥量測(cè)定及體外釋放度的考察奠定了方法學(xué)基礎(chǔ)。選擇四株肝癌細(xì)胞系為模型細(xì)胞,熟練掌握細(xì)胞的培養(yǎng)、傳代、凍存和復(fù)蘇等基本細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的操作,利用無(wú)血清懸浮培養(yǎng)技術(shù),從中篩選出HepG2微球體(HepG2-TS)作為肝癌干細(xì)胞。通過(guò)不同代HepG2-TS的成球率、致瘤能力(腫瘤干細(xì)胞鑒定的金標(biāo)準(zhǔn))、肝癌干細(xì)胞表型標(biāo)記抗體-CD133的表達(dá)情況對(duì)HepG2-TS作為肝癌干細(xì)胞進(jìn)行了鑒定,結(jié)果顯示,第3代HepG2-TS的成球率約為肝癌HepG2細(xì)胞成球率的2倍,HepG2-TS細(xì)胞在裸鼠身上的致瘤能力較肝癌HepG2細(xì)胞約強(qiáng)近100倍,HepG2-TS細(xì)胞中CD133+的表達(dá)率較肝癌HepG2細(xì)胞約高5倍。綜合上述結(jié)果,HepG2-TS可作為肝癌干細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。通過(guò)體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn),在肝癌細(xì)胞系中,SAL-Na對(duì)DOX具有增敏作用；SAL-Na與DOX同時(shí)作用于肝癌細(xì)胞的殺傷效果高于順序作用的殺傷效果；SAL-Na對(duì)HepG2-TS具有選擇特異性,而DOX對(duì)HepG2-TS具有耐藥性,選擇性作用于肝癌HepG2細(xì)胞；最后,在肝癌HepG2細(xì)胞和HepG2-TS細(xì)胞中篩選出DOX與SAL-Na協(xié)同比例為摩爾比1：1,1：5。采用薄膜分散法,成功制備空白納米脂質(zhì)體、載鹽霉素鈉納米脂質(zhì)體(SLN)、載阿霉素納米脂質(zhì)體(DLN)及按協(xié)同比例共載鹽霉素鈉與阿霉素的納米脂質(zhì)體(SDLN),并優(yōu)化納米脂質(zhì)體的處方,選擇HSPC:CHOL:DSPE-PEG-2k=85:10:5(摩爾比)作為納米脂質(zhì)體的優(yōu)選處方。通過(guò)動(dòng)態(tài)光粒徑儀、透射電子顯微鏡(TEM)對(duì)納米脂質(zhì)體的表觀結(jié)構(gòu)、粒徑、Zeta電位進(jìn)行了表征,結(jié)果顯示,我們成功制備了分布均勻、粒徑在100 nm附近、Zeta電位在-35 mV附近、具有明顯脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)的納米脂質(zhì)體。依據(jù)SAL-Na與DOX在釋放介質(zhì)中的穩(wěn)定性,分別對(duì)載藥脂質(zhì)體的體外釋放情況進(jìn)行了考察,結(jié)果顯示SDLN、DLN、SLN在72h內(nèi)均具有一定程度的緩釋效果。以DOX作為熒光探針,比較了肝癌HepG2細(xì)胞和HepG2-TS細(xì)胞對(duì)載藥納米脂質(zhì)體與游離藥物的攝取情況。結(jié)果顯示,肝癌HepG2細(xì)胞和HepG2-TS對(duì)載藥納米脂質(zhì)體的攝取能力均高于對(duì)游離藥物的攝取能力,說(shuō)明納米脂質(zhì)體對(duì)肝癌細(xì)胞和肝癌干細(xì)胞具有靶向性。通過(guò)細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn),考察、比較了空白納米脂質(zhì)體載體、載藥納米脂質(zhì)體與游離藥物單用及聯(lián)用對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞和HepG2-TS細(xì)胞的細(xì)胞毒性。結(jié)果顯示,空白納米脂質(zhì)體對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞和HepG2-TS細(xì)胞均無(wú)明顯細(xì)胞毒性；載藥納米脂質(zhì)體可保持游離藥物對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞和HepG2-TS細(xì)胞的細(xì)胞毒性；SLN-DLN、SDLN可保持F-SAL-Na-DOX對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞和HepG2-TS細(xì)胞的細(xì)胞毒性,說(shuō)明SDLN-DLN、SDLN可同時(shí)作用于肝癌細(xì)胞和肝癌干細(xì)胞且具有較強(qiáng)的殺傷作用。分別采用HPLC-MS與HPLC分析了SDLN、SLN-DLN及F-SAL-Na-DOX三組處方在SD大鼠體內(nèi)SAL-Na, DOX的藥代動(dòng)力學(xué)特征。結(jié)果顯示,SAL-Na與DOX緩釋效果最優(yōu)的均為SLN-DLN組,而SDLN組更好的保持了DOX與SAL-Na的包載比例。成功建立HepG2肝癌裸鼠模型,考察了PBS組、Blank liposomes組、F-SAL-Na組、SLN組、F-DOX組、DLN組、F-SAL-Na-DOX組、SLN-DLN組以及SDLN組的體內(nèi)抗腫瘤活性與系統(tǒng)毒性。結(jié)果顯示,空白納米脂質(zhì)對(duì)裸鼠沒(méi)有明顯毒性；其中抗腫瘤活性最佳的為SLN-DLN組與SDLN組且沒(méi)有明顯的系統(tǒng)毒性,抑瘤率分別為76.46+5.49、71.55+5.26%。最后,通過(guò)對(duì)離體腫瘤進(jìn)行無(wú)血清懸浮培養(yǎng)HepG2-TS,考察了各處方的體內(nèi)抗肝癌干細(xì)胞活性。結(jié)果顯示,SLN-DLN組與SDLN組均可顯著的抑制HepG2-TS的數(shù)量及體積,說(shuō)明SLN-DLN組與SDLN組對(duì)肝癌干細(xì)胞具有很強(qiáng)的抑制作用。綜上所述,SLN-DLN聯(lián)用與SDLN可以同時(shí)作用于肝癌細(xì)胞和肝癌干細(xì)胞,其抗肝癌活性最優(yōu),以協(xié)同比例共載兩種藥物的SDLN可以作為肝癌治療的有效手段為臨床治療提供新的選擇。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.7

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 宋凱;楊碩菲;吳俊華;江春平;;肝癌干細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];世界華人消化雜志;2009年36期

2 嚴(yán)威;吳國(guó)洋;;肝癌干細(xì)胞分離鑒定研究進(jìn)展[J];肝膽外科雜志;2010年03期

3 李廣權(quán);陳偉強(qiáng);;肝癌干細(xì)胞的研究現(xiàn)狀[J];醫(yī)學(xué)綜述;2013年03期

4 張朵;朱海英;馬鳳云;胡以平;;肝癌干細(xì)胞的研究現(xiàn)狀[J];生命的化學(xué);2006年01期

5 陳麗;戴廣海;;肝癌干細(xì)胞研究現(xiàn)狀[J];臨床腫瘤學(xué)雜志;2008年12期

6 唐飛;呂洪敏;向慧玲;;肝癌干細(xì)胞的研究現(xiàn)狀[J];實(shí)用肝臟病雜志;2008年02期

7 張偉;陳孝平;;肝癌干細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];臨床外科雜志;2008年09期

8 張華;高志紅;許田英;朱建鳳;文家斌;張陽(yáng);;常規(guī)化療對(duì)肝癌干細(xì)胞的作用[J];胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志;2009年06期

9 徐文;曹璐;殷正豐;;肝癌干細(xì)胞研究進(jìn)展與方向[J];癌癥;2009年09期

10 孫力超;趙璇;遇瓏;韓璐璐;劉彤;胡海;孫立新;楊治華;冉宇靚;;抗肝癌干細(xì)胞功能性單克隆抗體的研制[J];中國(guó)腫瘤生物治療雜志;2010年02期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 單娟娟;錢程;;懸浮條件培養(yǎng)法富集肝癌干細(xì)胞[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)日程及論文匯編[C];2010年

2 尹川;謝渭芬;;肝癌干細(xì)胞及其分化治療[A];第九次全國(guó)消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)會(huì)議專題報(bào)告論文集[C];2009年

3 殷勝勇;陳新華;胡晨;;CD133陽(yáng)性肝癌干細(xì)胞在肝癌肝移植術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)中的作用及納秒脈沖進(jìn)行干預(yù)的初步實(shí)驗(yàn)研究[A];2013中國(guó)器官移植大會(huì)論文匯編[C];2013年

4 杜智;宋文芹;張世光;高英堂;朱爭(zhēng)艷;王毅軍;只丹琮;;人原發(fā)性肝癌細(xì)胞建系及其生物學(xué)特性的初步鑒定[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)2007年學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2007年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 本報(bào)記者 王雪敏;肝癌干細(xì)胞及其分化治療[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2010年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 雷增杰;組蛋白去甲基化酶LSD1促進(jìn)腫瘤細(xì)胞“干性”和侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

2 張克志;三氧化二砷抑制GLI1表達(dá)誘導(dǎo)肝癌干細(xì)胞分化延長(zhǎng)術(shù)后生存期的實(shí)驗(yàn)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 劉輝琦;肝癌干細(xì)胞相關(guān)功能性基因的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

4 張華;肝癌干細(xì)胞的鑒定及化療對(duì)肝癌干細(xì)胞作用的研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2009年

5 黎江;肝癌干細(xì)胞新型培養(yǎng)體系的建立以及治療靶點(diǎn)篩選[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2012年

6 郭哲;環(huán)氧化酶-2對(duì)肝癌干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及機(jī)制研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2015年

7 劉衛(wèi)輝;大鼠肝干細(xì)胞和肝癌干細(xì)胞間生物學(xué)特性差異分析及相關(guān)分子調(diào)控機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2012年

8 朱政;肝癌干細(xì)胞表面標(biāo)志物的鑒定與特性研究[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

9 孫嵐;ACNP-MET納米藥物遞送系統(tǒng)及其對(duì)肝癌干細(xì)胞靶向性研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2013年

10 劉麗梅;去乙酰化酶SIRT1在肝癌干細(xì)胞自我更新中的作用及其機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 馬俊明;人肝癌組織中肝癌干細(xì)胞的分離培養(yǎng)與鑒定[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2015年

2 鞏志榮;靶向肝癌細(xì)胞和肝癌干細(xì)胞的共載鹽霉素鈉和阿霉素納米脂質(zhì)體的體內(nèi)外研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 曹璐;球培養(yǎng)法富集肝癌干細(xì)胞樣亞群及其特征鑒定[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

4 楊軍;肝癌干細(xì)胞特異性標(biāo)志物的實(shí)驗(yàn)研究及其臨床病理聯(lián)系[D];中南大學(xué);2009年

5 常文娟;低劑量順鉑富集肝癌干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2011年

6 容雁;抗人肝癌干細(xì)胞功能性單抗的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2012年

7 陶璐;基于腫瘤耐藥特性構(gòu)建肝癌干細(xì)胞富集模式的實(shí)驗(yàn)研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2012年

8 王云霞;人肝癌干細(xì)胞單抗抑制肝癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

9 曲平波;靶向肝癌干細(xì)胞的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

10 閆偉偉;肝癌干細(xì)胞表面標(biāo)志物的初步篩查及其臨床應(yīng)用研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2010年

，

本文編號(hào)：1217943