發(fā)布時間：2017-11-23 05:28

  本文關(guān)鍵詞：核心蛋白聚糖在微環(huán)境中對結(jié)腸癌細(xì)胞EMT轉(zhuǎn)化作用機制研究

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【摘要】：結(jié)腸癌是世界第三大常見癌癥,在臨床上有著較高的轉(zhuǎn)移率和復(fù)發(fā)率。目前,對于腫瘤的發(fā)病原因和治療方法的研究,逐漸從腫瘤細(xì)胞本身向腫瘤微環(huán)境聚集,新的研究熱點逐漸傾向于以腫瘤微環(huán)境為作用靶點,抑制腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移。核心蛋白聚糖(Decorin, DCN)是細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分,有研究報道指出通過對正常、癌變惡化前、惡性癌變的結(jié)腸組織進行DCN的免疫組化和原位雜交實驗,發(fā)現(xiàn)惡性結(jié)腸腫瘤缺少DCN的mRNA以及其喪失其免疫反應(yīng)活性,并且DCN在腫瘤周圍的表達(dá)分布會影響著腫瘤生成和血管增生腫瘤微環(huán)境是指腫瘤在其發(fā)生過程中所處的內(nèi)環(huán)境,由間質(zhì)細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)成分組成。腫瘤的形成主要依賴于癌細(xì)胞與基質(zhì)細(xì)胞相互間的誘導(dǎo)和交流,目前腫瘤基質(zhì)已經(jīng)成為癌癥治療的熱門靶點。EMT是眾多上皮性腫瘤細(xì)胞獲得惡性表型的一個重要機制。在微環(huán)境中,腫瘤細(xì)胞通過與基質(zhì)細(xì)胞問活躍的相互作用,發(fā)生EMT從而促進惡性腫瘤發(fā)生侵入性轉(zhuǎn)移。已有研究發(fā)現(xiàn),EMT發(fā)生期間,細(xì)胞間的粘附能力下降,細(xì)胞失去其上皮性狀,獲得間質(zhì)性狀,致使其遷移能力和侵襲能力顯著增加。本課題主要對DCN在微環(huán)境中影響結(jié)腸癌細(xì)胞LOVO發(fā)生EMT的作用機制展開研究。結(jié)果如下：(1)構(gòu)建DCN原核表達(dá)系統(tǒng),制備純化出大量DCN重組蛋白成功構(gòu)建DCN重組質(zhì)粒pFLAG-ATS-DCN,并在大腸桿菌系統(tǒng)中表達(dá),分離純化DCN,并鑒定其生物學(xué)活性。表明人源DCN能夠從原核表達(dá)系統(tǒng)中大量制備,并且具有抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖和遷移的生物學(xué)活性。(2)DCN在微環(huán)境中抑制結(jié)腸癌細(xì)胞EMT過程的形態(tài)學(xué)變化成功構(gòu)建結(jié)腸癌細(xì)胞LOVO和結(jié)腸成纖維細(xì)胞CCD-18CO的間接共培養(yǎng)模型,結(jié)果顯示EMT過程中LOVO細(xì)胞分別在外源性和內(nèi)源性DCN過表達(dá)的腫瘤微環(huán)境中入侵運動能力各自降低了36.7%、49.4%,并且劃痕遷移能力也各自降低了45.8%、20%。表明在腫瘤微環(huán)境中,DCN的過表達(dá)抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移,從形態(tài)學(xué)方面顯示出EMT過程受到阻礙。(3)DCN在微環(huán)境中抑制結(jié)腸癌細(xì)胞EMT過程的作用機制成功構(gòu)建結(jié)腸癌細(xì)胞LOVO與成纖維細(xì)胞CCD-18CO的3D共培養(yǎng)模型,并且分別從添加外源性DCN重組蛋白和在內(nèi)源性轉(zhuǎn)染DCN質(zhì)粒兩方面來實現(xiàn)DCN的過表達(dá)。結(jié)果顯示基質(zhì)金屬蛋白酶MMP2、MMP9的表達(dá)量下降,上皮標(biāo)志物E-cadherin的表達(dá)量增加,同時間質(zhì)標(biāo)志物(Vimentin、α-SMA)、EMT蛋白標(biāo)志物(Snail、Slug)、細(xì)胞周期蛋白(CDK4)、細(xì)胞炎性因子(p-catenin)的表達(dá)量均下降。說明DCN在微環(huán)境中通過抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖侵襲和轉(zhuǎn)移,來抑制其上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的EMT過程。綜上所述,本項課題研究揭示了DCN在微環(huán)境中發(fā)揮著抑制結(jié)腸癌細(xì)胞EMT的發(fā)展的作用,通過降低基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)、上調(diào)上皮性狀標(biāo)志物蛋白E-cadherin的表達(dá)、下調(diào)間質(zhì)性狀標(biāo)志物蛋白Vimentin、α-SMA,同時在形態(tài)學(xué)方面表現(xiàn)出抑制結(jié)腸癌細(xì)胞發(fā)生EMT過程中的侵襲和轉(zhuǎn)移。此外,通過降低EMT過程中的標(biāo)志物蛋白Snail、Slug的表達(dá),抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的上皮性向間質(zhì)性的轉(zhuǎn)化。
【學(xué)位授予單位】：遼寧大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.35

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

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本文編號：1217402