本文關鍵詞：核心蛋白聚糖在微環(huán)境中對結腸癌細胞EMT轉化作用機制研究

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【摘要】：結腸癌是世界第三大常見癌癥,在臨床上有著較高的轉移率和復發(fā)率。目前,對于腫瘤的發(fā)病原因和治療方法的研究,逐漸從腫瘤細胞本身向腫瘤微環(huán)境聚集,新的研究熱點逐漸傾向于以腫瘤微環(huán)境為作用靶點,抑制腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉移。核心蛋白聚糖(Decorin, DCN)是細胞外基質的主要成分,有研究報道指出通過對正常、癌變惡化前、惡性癌變的結腸組織進行DCN的免疫組化和原位雜交實驗,發(fā)現惡性結腸腫瘤缺少DCN的mRNA以及其喪失其免疫反應活性,并且DCN在腫瘤周圍的表達分布會影響著腫瘤生成和血管增生腫瘤微環(huán)境是指腫瘤在其發(fā)生過程中所處的內環(huán)境,由間質細胞和細胞外基質成分組成。腫瘤的形成主要依賴于癌細胞與基質細胞相互間的誘導和交流,目前腫瘤基質已經成為癌癥治療的熱門靶點。EMT是眾多上皮性腫瘤細胞獲得惡性表型的一個重要機制。在微環(huán)境中,腫瘤細胞通過與基質細胞問活躍的相互作用,發(fā)生EMT從而促進惡性腫瘤發(fā)生侵入性轉移。已有研究發(fā)現,EMT發(fā)生期間,細胞間的粘附能力下降,細胞失去其上皮性狀,獲得間質性狀,致使其遷移能力和侵襲能力顯著增加。本課題主要對DCN在微環(huán)境中影響結腸癌細胞LOVO發(fā)生EMT的作用機制展開研究。結果如下：(1)構建DCN原核表達系統(tǒng),制備純化出大量DCN重組蛋白成功構建DCN重組質粒pFLAG-ATS-DCN,并在大腸桿菌系統(tǒng)中表達,分離純化DCN,并鑒定其生物學活性。表明人源DCN能夠從原核表達系統(tǒng)中大量制備,并且具有抑制結腸癌細胞增殖和遷移的生物學活性。(2)DCN在微環(huán)境中抑制結腸癌細胞EMT過程的形態(tài)學變化成功構建結腸癌細胞LOVO和結腸成纖維細胞CCD-18CO的間接共培養(yǎng)模型,結果顯示EMT過程中LOVO細胞分別在外源性和內源性DCN過表達的腫瘤微環(huán)境中入侵運動能力各自降低了36.7%、49.4%,并且劃痕遷移能力也各自降低了45.8%、20%。表明在腫瘤微環(huán)境中,DCN的過表達抑制結腸癌細胞的侵襲和轉移,從形態(tài)學方面顯示出EMT過程受到阻礙。(3)DCN在微環(huán)境中抑制結腸癌細胞EMT過程的作用機制成功構建結腸癌細胞LOVO與成纖維細胞CCD-18CO的3D共培養(yǎng)模型,并且分別從添加外源性DCN重組蛋白和在內源性轉染DCN質粒兩方面來實現DCN的過表達。結果顯示基質金屬蛋白酶MMP2、MMP9的表達量下降,上皮標志物E-cadherin的表達量增加,同時間質標志物(Vimentin、α-SMA)、EMT蛋白標志物(Snail、Slug)、細胞周期蛋白(CDK4)、細胞炎性因子(p-catenin)的表達量均下降。說明DCN在微環(huán)境中通過抑制結腸癌細胞的增殖侵襲和轉移,來抑制其上皮間質轉化的EMT過程。綜上所述,本項課題研究揭示了DCN在微環(huán)境中發(fā)揮著抑制結腸癌細胞EMT的發(fā)展的作用,通過降低基質金屬蛋白酶的表達、上調上皮性狀標志物蛋白E-cadherin的表達、下調間質性狀標志物蛋白Vimentin、α-SMA,同時在形態(tài)學方面表現出抑制結腸癌細胞發(fā)生EMT過程中的侵襲和轉移。此外,通過降低EMT過程中的標志物蛋白Snail、Slug的表達,抑制結腸癌細胞的上皮性向間質性的轉化。
【學位授予單位】：遼寧大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.35

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前3條

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本文編號：1217402