本文關(guān)鍵詞：肝癌潛在標(biāo)志物循環(huán)microRNAs定量檢測技術(shù)的研究

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【摘要】：microRNAs (miRNAs)是一類長度約為22個堿基的保守性非編碼小分子RNA,通過與目標(biāo)信使RNAs (message RNAs, mRNAs)的3’非翻譯區(qū)(3'-untranslated region,3'-UTR)結(jié)合進行轉(zhuǎn)錄后調(diào)控,影響細(xì)胞生理活動。研究表明,多種肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展過程均伴隨有miRNAs的異常表達(dá),使得miRNAs作為肝病潛在標(biāo)志物成為研究熱點。最近,miRNAs的高度穩(wěn)定性引起了人們的廣泛關(guān)注,它們存在于所有體液環(huán)境中,或被脂質(zhì)囊泡包裹,或與蛋白質(zhì)結(jié)合,免于RNase的降解。循環(huán)miRNAs與肝臟的病理狀態(tài)同樣具有緊密的聯(lián)系,這使得循環(huán)miRNAs可能為無創(chuàng)肝病診斷提供有效的解決方案。準(zhǔn)確測定miRNAs在特定細(xì)胞、組織、體液中的表達(dá)量是將miRNAs作為標(biāo)志物應(yīng)用于疾病診斷與預(yù)后監(jiān)測的關(guān)鍵性步驟。本論文建立的miRNAs檢測技術(shù),具有特異性好、靈敏度高、線性范圍廣等特點,并能夠用于臨床血清樣本miRNAs定量檢測,在疾病早期診斷與預(yù)后評估中有潛在應(yīng)用前景。主要內(nèi)容如下：1.基于磁性納米顆粒和化學(xué)發(fā)光技術(shù)的miRNAs檢測方法的建立與應(yīng)用建立了一種基于磁性納米顆粒和化學(xué)發(fā)光技術(shù)的miRNAs檢測方法。目標(biāo)miRNAs與固定在Fe3O4@SiO2磁性納米顆粒上的捕獲探針和標(biāo)記有生物素的信號探針雜交,通過生物素-鏈霉親和素作用進行堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)標(biāo)記,ALP與其化學(xué)發(fā)光底物3-(2'-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4-(3”-磷酰氧基)苯-1,2-二氧雜環(huán)丁烷(AMPPD)作用產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光信號,從而進行檢測。研究結(jié)果表明,該方法特異性較好,能夠靈敏地區(qū)分完全配對(陽性組)和完全錯配(陰性組)目標(biāo)序列,檢測限達(dá)60 fM,線性范圍(10-2-104 pM)覆蓋6個數(shù)量級,能夠用于臨床血清樣本中miRNAs檢測,具有潛在應(yīng)用價值。2.基于實時熒光定量PCR技術(shù)的miRNAs檢測方法的應(yīng)用應(yīng)用poly(A)聚合酶加尾定量PCR對血清樣本中miR-21進行定量檢測。定量結(jié)果與采用第2章方法的定量結(jié)果比較,發(fā)現(xiàn)兩種方法對血清樣本miR-21的定量結(jié)果基本一致,表明第2章建立的基于磁性納米顆粒和化學(xué)發(fā)光技術(shù)的miRNAs檢測法能夠用于1niRNAs定量,定量結(jié)果準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好。3.肝癌相關(guān)miRNAs相對表達(dá)水平的化學(xué)發(fā)光檢測應(yīng)用建立的基于磁性納米顆粒和化學(xué)發(fā)光技術(shù)的niRNAs檢測方法對臨床血清樣本進行miR-21、miR-122和miR-221相對表達(dá)水平檢測(miR-16作為內(nèi)參進行校正),并比較評價了三種miRNAs對肝癌的診斷效果。三種miRNAs均具有較好的區(qū)分肝癌樣本和正常對照的能力,能夠作為肝癌疾病的潛在標(biāo)志物應(yīng)用于臨床診斷。
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7;R730.43

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本文編號：1211533