癌基因RMP在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其對腫瘤生物學(xué)功能的影響
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更多相關(guān)文章: 非小細(xì)胞肺癌 高表達(dá) RMP 生物學(xué)功能 基因靶向治療
【摘要】:目的:通過測定RMP在人非小細(xì)胞肺癌組織和細(xì)胞系中的表達(dá)水平,來研究RMP與腫瘤病人臨床病理特征的聯(lián)系,同時探索其對NSCLC細(xì)胞生物學(xué)功能的影響,為NSCLC的基因靶向治療提供強有力的依據(jù)。方法:1.通過qRT-PCR檢測RMP在NSCLC細(xì)胞系和正常細(xì)胞系中的mRNA表達(dá)水平,同時用western blot檢測RMP相應(yīng)的蛋白表達(dá)水平。2.通過qRT-PCR檢測RMP在人非小細(xì)胞肺癌組織和相應(yīng)癌旁組織中的mRNA表達(dá)水平,同時用western blot檢測RMP相應(yīng)的蛋白表達(dá)水平。3.通過qRT-PCR檢測RMP在不同特征NSCLC組織樣本中的mRNA表達(dá)水平,分析其與腫瘤臨床病理特征的聯(lián)系,同時用表格統(tǒng)計病人的相關(guān)臨床信息。4.熒光顯微鏡檢測各組RMP質(zhì)粒在NSCLC細(xì)胞A549中的瞬時轉(zhuǎn)染情況,同時用qRT-PCR和western blot檢測轉(zhuǎn)染效率。5.通過CCK-8試驗檢測RMP對A549細(xì)胞增殖的影響。6.用不同濃度的吉非替尼處理轉(zhuǎn)染了各組不同RMP質(zhì)粒的A549細(xì)胞,通過CCK-8試驗、流式細(xì)胞術(shù)檢測RMP對A549細(xì)胞化療敏感性的影響。7.通過CCK-8試驗、流式細(xì)胞術(shù)檢測RMP對A549細(xì)胞放療敏感性的影響,同時用western blot檢測細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的蛋白表達(dá)水平。8.通過流式細(xì)胞術(shù)檢測RMP對于A549細(xì)胞周期的影響,同時用western blot檢測周期相關(guān)基因的蛋白表達(dá)水平。9.通過遷移和侵襲試驗檢測RMP對A549細(xì)胞遷移和侵襲能力的改變。10.通過裸鼠皮下移植瘤實驗觀察RMP對移植瘤生長情況的影響,同時用免疫組化檢測RMP、Bax、Bcl-2和capase-3的蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:1.qRT-PCR和western blot實驗結(jié)果顯示:無論是mRNA和蛋白表達(dá)水平,RMP在NSCLC細(xì)胞系中均呈相應(yīng)的高表達(dá)狀態(tài)。2.qRT-PCR和,western blot實驗結(jié)果表明:與癌旁組織相比,RMP在人非小細(xì)胞肺癌組織中的:mRNA和蛋白的表達(dá)水平均明顯提高。同時發(fā)現(xiàn)RMP的表達(dá)與腫瘤組織的淋巴結(jié)和T-stage狀態(tài)有關(guān),與病人的年齡、性別和腫瘤類型無關(guān)。3.熒光顯微鏡、qRT-PCR和western blot實驗表明:各組RMP質(zhì)粒在A549細(xì)胞中瞬時轉(zhuǎn)染順利,mRNA和蛋白表達(dá)水平呈相應(yīng)的提高。4.CCK-8試驗表明:RMP明顯促進(jìn)A549細(xì)胞的增殖。5.CCK-8試驗表明:在化療藥物劑量逐漸增加的作用下,RMP仍能夠減緩A549細(xì)胞的死亡;流式細(xì)胞術(shù)檢測表明:RMP能夠減少化療引起的細(xì)胞凋亡6.CCK-8試驗表明:在輻射劑量逐漸增加的作用下,RMP仍能夠減緩A549細(xì)胞的死亡;流式細(xì)胞術(shù)檢測表明:RMP能減少放療引起的細(xì)胞凋亡;western blot實驗檢測表明:在放療后,RMP能夠抑制A549細(xì)胞中凋亡相關(guān)基因蛋白的表達(dá),促進(jìn)抗凋亡相關(guān)基因蛋白的表達(dá)。7.流式細(xì)胞術(shù)檢測表明:RMP能夠減少由放療引起的A549細(xì)胞周期G2期的阻滯,同時western blot實驗表明:放療后,RMP能夠調(diào)節(jié)A549中細(xì)胞周期相關(guān)基因蛋白的表達(dá)。8.遷移和侵襲試驗表明:RMP能夠促進(jìn)A549細(xì)胞的遷移和侵襲能力。9.裸鼠皮下移植瘤實驗表明:RMP能夠促進(jìn)移植瘤的生長,同時免疫組化檢測表明:RMP能夠抑制凋亡相關(guān)基因蛋白的表達(dá),促進(jìn)抗凋亡相關(guān)基因蛋白的表達(dá),從而促進(jìn)腫瘤的生長。結(jié)論:1.RMP在人非小細(xì)胞肺癌中呈高表達(dá)的狀態(tài),結(jié)合臨床病人信息發(fā)現(xiàn)它的表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌病人的淋巴結(jié)和T-stage狀態(tài)有關(guān),說明RMP可能與NSCLC的生長和惡性程度有著密切的聯(lián)系,是潛在的一種NSCLC相關(guān)促癌基因。2.RMP的過表達(dá)能夠改變A549如細(xì)胞增殖、凋亡、周期、遷移和侵襲等各項生物學(xué)功能,促進(jìn)移植瘤的生長,進(jìn)一步表明RMP在NSCLC中扮演著癌基因的角色,為我們對肺癌的基因靶向治療又提供一個強有力的目標(biāo)。
【學(xué)位授予單位】:蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類號】:R734.2
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,本文編號:1199641
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