本文關(guān)鍵詞：PTEN協(xié)同NHERF-1抑制腫瘤微環(huán)境中M2型巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)化及機(jī)制

  更多相關(guān)文章： PTEN NHERF-1 表型轉(zhuǎn)化 CCL2 VEGF-A 微環(huán)境

【摘要】：目的：在小鼠乳腺癌細(xì)胞系(4T1)和小鼠巨噬細(xì)胞系(RAW264.7)模擬的腫瘤微環(huán)境中,探討PTEN對(duì)于巨噬細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的抑制作用及機(jī)制。方法：用小鼠乳腺癌細(xì)胞系4T1的培養(yǎng)上清和RAW264.7小鼠巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)模擬腫瘤微環(huán)境,馴化RAW264.7細(xì)胞向M2型轉(zhuǎn)化(TSN-exposed RAWs);采用RT-PCR和WB方法比較RAW264.7細(xì)胞在與4T1細(xì)胞上清共培養(yǎng)前后M1型和M2型(TSN-exposed RAWs)巨噬細(xì)胞中PTEN分子在mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平的變化；通過轉(zhuǎn)染PTEN shRNA質(zhì)粒到TSN-exposed RAWs細(xì)胞中,沉默目標(biāo)PTEN mRNA;采用Q-PCR及WB方法檢測(cè)TSN-exposed RAWs細(xì)胞沉默PTEN前后PTEN, NHERF-1, VEGF-A, HIF-1a分子的表達(dá)；通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)TSN-exposed RAWs細(xì)胞沉默PTEN前后,M2型所占的比例；應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法檢測(cè)TSN-exposed RAWs細(xì)胞沉默PTEN前后培養(yǎng)液上清中CCL2的含量；同時(shí)用ELISA、Q-PCR和WB檢測(cè)轉(zhuǎn)染pEGFP-PTEN質(zhì)粒后的TSN-exposed RAWs細(xì)胞中CCL2, PTEN, VEGF-A, HIF-1a和NHERF-1的表達(dá)；用transwell檢測(cè)TSN-exposed RAWs細(xì)胞轉(zhuǎn)染不同質(zhì)粒上調(diào)或者下調(diào)PTEN的表達(dá)對(duì)4T1小鼠乳腺癌細(xì)胞遷移的影響。結(jié)果：4T1上清馴化RAW264.7細(xì)胞,在完成馴化的TSN-exposed RAWs細(xì)胞中,PTEN的表達(dá)明顯下調(diào),并且我們還在人的乳腺癌和胃癌組織中的巨噬細(xì)胞中檢測(cè)PTEN的表達(dá),結(jié)果表明PTEN在M1和M2型巨噬細(xì)胞中均有表達(dá)。TSN-exposed RAWs細(xì)胞沉默PTEN后與M1型細(xì)胞相比,CCL2和VEGF-A的表達(dá)明顯上調(diào),NHERF-1的表達(dá)明顯下調(diào),通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)M2型細(xì)胞的比例明顯上升。用這種上清和4T1細(xì)胞共培養(yǎng),遷移的4T1細(xì)胞數(shù)目明顯增加。當(dāng)用pEGFP-PTEN質(zhì)粒轉(zhuǎn)染TSN-exposed RAWs或者用200ng/ml LPS口200U/mlIFN-y同時(shí)刺激細(xì)胞,都會(huì)導(dǎo)致CCL2和VEGF-A的表達(dá)下降,M1型巨噬細(xì)胞的數(shù)目明顯增多,4T1細(xì)胞遷移的數(shù)目明顯降低。結(jié)論：4T1上清與RAW264.7細(xì)胞模擬的腫瘤微環(huán)境中,NHERF-1將PTEN募集到細(xì)胞膜上,PTEN與NHERF-1發(fā)揮協(xié)同作用,降低CCL2和VEGF-A的表達(dá),從而抑制巨噬細(xì)胞由M1型向M2型轉(zhuǎn)化。
【學(xué)位授予單位】：南開大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R73-3

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