本文關(guān)鍵詞：MicroRNA-30a調(diào)控靶基因FAPα的表達(dá)及抑制胃癌增殖和轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制初探

  更多相關(guān)文章： 胃癌 microRNA-30a 成纖維活化蛋白α

【摘要】：背景癌癥是全球主要死亡原因之一,根據(jù)世界衛(wèi)生組織最新數(shù)據(jù)顯示,在2012年造成820萬(wàn)人死亡。因罹患胃癌造成的死亡人數(shù)排名位居第三,僅次于肺癌和肝癌。在男性最常見確診癌癥中胃癌位居第四,同時(shí)在女性最常見確診癌癥中胃癌位居第五[1]。根據(jù)世界衛(wèi)生組織-2014年癌癥國(guó)家概況顯示,在中國(guó),胃癌在男性和女性中的死亡率分別占總的腫瘤死亡率的15.5%和13.3%。并且,其發(fā)病率居于第三位[2]。根據(jù)病因?qū)W和流行病學(xué)研究表明人胃組織癌變過(guò)程主要涉及以下四個(gè)階段:慢性胃炎;萎縮;腸上皮化生;異型增生。其發(fā)生、發(fā)展與基因和環(huán)境因素的相互作用密切相關(guān)[3;4]。胃上皮細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化生成惡性腫瘤的過(guò)程。而此過(guò)程中所涉及的具體機(jī)制目前并不十分清楚。因此,針對(duì)胃癌致病機(jī)制的深入研究,有助于尋找穩(wěn)定可靠的生物標(biāo)志物以及治療靶點(diǎn),用于胃癌的早期檢測(cè)及治療以提高患者預(yù)后。。microRNA是一類長(zhǎng)度大約為22nt的內(nèi)源性非編碼RNA,通過(guò)與基因的3'UTR片段結(jié)合從而靶向調(diào)控基因的表達(dá),參與了細(xì)胞凋亡、增殖、代謝等多個(gè)生理過(guò)程。近年來(lái),microRNA作為腫瘤研究中的熱點(diǎn),一系列與胃癌發(fā)生和發(fā)展相關(guān)的 miRNAs,如 miR-25、 miR-141和 miR-22等相繼被報(bào)道[5-7]。本課題組在前期基因芯片結(jié)果中發(fā)現(xiàn)多個(gè)microRNA在胃癌組織中異常表達(dá),包括 miR-30a。 miR-30a屬于 miR-30家族,其他成員還包括 miR-30b、 miR-30c、 miR-30d、 miR-30e,目前 miR-30家族在結(jié)腸癌,肺癌,腎細(xì)胞癌等多種腫瘤中已有報(bào)道,但它們?cè)谀[瘤中發(fā)揮的作用不盡相同[8-10]。雖然多數(shù)腫瘤研究中 miR-30a表達(dá)下調(diào),但在其胃癌中的表達(dá)水平及作用機(jī)制還有待闡明。尤其是 miR-30a在調(diào)控胃癌發(fā)展過(guò)程中其關(guān)鍵靶基因的鑒定。因此,本研究針對(duì) miR-30a在胃癌中的作用及其機(jī)制進(jìn)行了初步的研究探討。目的明確 miR-30a在人胃癌組織以及癌旁正常胃粘膜組織中的表達(dá)情況,預(yù)測(cè)和鑒定 miR-30a新的靶基因,闡明 miR-30a在胃癌發(fā)展進(jìn)程中可能通過(guò)對(duì)靶基因的調(diào)控影響腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移,以及 miR-30a可能作為新的胃癌診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。方法1.分析 miR-30a在胃癌中的表達(dá)情況以及其表達(dá)水平與臨床特征相關(guān)性Trizol法提取病人胃癌組織及其癌旁組織樣本中的總RNA,實(shí)時(shí)熒光定量PCR(q RT-PCR)相對(duì)定量方法檢測(cè) miR-30a的表達(dá)水平。結(jié)合相應(yīng)臨床資料,分析 miR-30a表達(dá)水平的高低與胃癌患者的年齡、TNM分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有無(wú)相關(guān)性。統(tǒng)計(jì)分析TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中 miR-30a在胃癌組織及癌旁組織中的表達(dá)情況。2.檢測(cè) miR-30a對(duì)胃癌細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移能力的影響在SGC-7901和BGC-823兩株胃癌細(xì)胞株中轉(zhuǎn)染 miR-30amimic或 miR-30ainhibitor對(duì)其進(jìn)行過(guò)表達(dá)或抑制其表達(dá),檢測(cè)其對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移能力的影響。在SGC-7901細(xì)胞中轉(zhuǎn)染 miR-30aagomir,檢測(cè)其腫瘤細(xì)胞腹腔播散轉(zhuǎn)移的情況。3.鑒定 miR-30a在胃癌中新的靶基因及其功能利用Target Scan數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè) miR-30a的靶基因,結(jié)合文獻(xiàn)調(diào)研在組織樣本中對(duì)候選靶基因FAPα、PDGFRB和WISP1進(jìn)行初篩。構(gòu)建含有 miR-30a結(jié)合位點(diǎn)的FAPα3’UTR片段,連接熒光素酶報(bào)告載體,通過(guò)雙熒光素酶報(bào)告基因活性實(shí)驗(yàn)鑒定FAPα為 miR-30a的靶基因。統(tǒng)計(jì)分析TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中胃癌組織中FAPα的表達(dá)情況。在SGC-7901細(xì)胞中轉(zhuǎn)染 miR-30a mimic,通過(guò)q RT-PCR和Western blot對(duì)FAPα的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。在BGC-823和SGC-7901細(xì)胞中轉(zhuǎn)染含有FAPαCDS區(qū)域的質(zhì)粒,檢測(cè)其對(duì)胃癌細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移的影響。將過(guò)表達(dá)FAPα質(zhì)粒與 miR-30a mimic共轉(zhuǎn)染SGC-7901細(xì)胞,驗(yàn)證 miR-30a對(duì)FAPα的功能調(diào)節(jié)。結(jié)果1. miR-30a在29例人胃癌組織樣本中的表達(dá)水平顯著低于之配對(duì)的癌旁正常組織(P0.05)。 miR-30a表達(dá)水平的高低與胃癌患者的TNM分期有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),而與患者的年齡以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。對(duì)TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中胃癌組織樣本分析發(fā)現(xiàn), miR-30a胃癌組織樣本中的表達(dá)顯著低與癌旁正常胃黏膜組織(P0.05)。2.在SGC-7901和BGC-823過(guò)表達(dá) miR-30a后,SGC-7901和BGC-823細(xì)胞的增殖能力和轉(zhuǎn)移能力受到明顯抑制(P0.05)。而在抑制了 miR-30a的表達(dá)后,兩株細(xì)胞的增殖能力和轉(zhuǎn)移能力相對(duì)于NC組有了顯著增強(qiáng)(P0.05)。在腹腔播散實(shí)驗(yàn)中,過(guò)表達(dá) miR-30a明顯抑制了腫瘤細(xì)胞的播散轉(zhuǎn)移(P0.05)。3.Target Scan數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)FAPα、PDGFRB和WISP1為 miR-30a的靶基因,經(jīng)過(guò)對(duì)29例配對(duì)組織樣本進(jìn)行q RT-PCR驗(yàn)證分析,PDGFRB和WISP1的表達(dá)量在胃癌組織及其相應(yīng)的癌旁正常胃黏膜組織中無(wú)明顯差異,只有FAPα在胃癌組織樣本中表達(dá)水平顯著高于癌旁正常胃黏膜組織(P0.05)。通過(guò)雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)鑒定FAPα是 miR-30a的靶基因。在SGC-7901中過(guò)表達(dá)FAPα后,FAPα的m RNA表達(dá)水平和蛋白表達(dá)水平顯著降低(P0.05)。FAPα在TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中胃癌組織樣本中顯著高表達(dá)(P0.05)。過(guò)表達(dá)FAPα可顯著增強(qiáng)SGC-7901和BGC-823的增殖、轉(zhuǎn)移能力(P0.05)。在SGC-7901細(xì)胞中過(guò)表達(dá)FAPα和 miR-30a后,該組細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移能力較過(guò)表達(dá) miR-30a組顯著增強(qiáng)(P0.05)。結(jié)論1. miR-30a在胃癌中低表達(dá),其表達(dá)水平與患者TNM分期有關(guān),提示 miR-30a可能參與胃癌的發(fā)生及發(fā)展進(jìn)程。2. miR-30a具有抑制胃癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移、增殖的作用,提示 miR-30a可作為胃癌的治療靶點(diǎn)。3.FAPα為 miR-30a的靶基因,其具有促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移的作用,提示 miR-30a在胃癌中可通過(guò)對(duì)FAPα的調(diào)控抑制胃癌細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移。
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.2

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 Amanda Ferreira Vidal;Aline MP Cruz;Leandro Magalh?es;Adenilson L Pereira;Ana KM Anaissi;Nélisson CF Alves;Paulo JBS Albuquerque;Rommel MR Burbano;Samia Demachki;?ndrea Ribeiro-dos-Santos;;hsa-mi R-29c and hsa-miR-135b differential expression as potential biomarker of gastric carcinogenesis[J];World Journal of Gastroenterology;2016年06期

2 Wei-Dong Lu;Yun Zuo;Zhen Xu;Min Zhang;;MiR-19a promotes epithelial-mesenchymal transition through PI3K/AKT pathway in gastric cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2015年15期

3 Victor Pasechnikov;Sergej Chukov;Evgeny Fedorov;Ilze Kikuste;Marcis Leja;;Gastric cancer:Prevention,screening and early diagnosis[J];World Journal of Gastroenterology;2014年38期

，

本文編號(hào)：1192527