本文關(guān)鍵詞：CIK細(xì)胞聯(lián)合粉防己堿對(duì)結(jié)腸癌SW620細(xì)胞株增殖抑制作用研究

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【摘要】：目的:臨床流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn),結(jié)腸癌(Colon cancer)已經(jīng)最常見的消化道惡性腫瘤之一,男性患病比女性略多。目前國(guó)內(nèi)外結(jié)腸癌治療指南是以手術(shù)、化療和放療等多種方法結(jié)合的綜合治療,國(guó)內(nèi)多數(shù)學(xué)者在此基礎(chǔ)上聯(lián)合細(xì)胞免疫治療和中草藥治療,取得了一定的臨床經(jīng)驗(yàn)和效果。結(jié)腸癌的發(fā)病與多種因素有關(guān),精細(xì)飲食和缺乏運(yùn)動(dòng)并精神壓力增高的生活方式以及人口老齡化,加速了我國(guó)結(jié)腸癌(colon cancer)的發(fā)病率和死亡率逐年上升趨勢(shì),但由于結(jié)腸癌起病隱匿,進(jìn)展緩慢,癥狀和良性疾病沒有特異性區(qū)別,早期難以確診,大多數(shù)患者確診時(shí)已屬中晚期。近幾十年來,生物培養(yǎng)技術(shù)不斷發(fā)展及相應(yīng)的生物制劑進(jìn)入臨床使用,細(xì)胞免疫療法已經(jīng)成為了繼手術(shù)治療、放射治療和化學(xué)治療后的第四種腫瘤治療手段,對(duì)于機(jī)體殘存的轉(zhuǎn)移腫瘤病灶的治療效果尤其顯著,是防治腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的有效手段。細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(cytokine-induced killer,CIK)是一種新型免疫活性細(xì)胞,具有體外增殖方便快速、非限制性抑制腫瘤活性高、無毒副作用、安全性高等優(yōu)點(diǎn)。CIK不僅能夠直接殺傷腫瘤細(xì)胞,還可以通過分泌炎性細(xì)胞因子間接抑制腫瘤細(xì)胞增殖,多種機(jī)制調(diào)節(jié)和增強(qiáng)機(jī)體免疫功能,是新一代抗腫瘤過繼細(xì)胞免疫治療的重要手段。粉防己堿(Tetrandrine,Tet)新的藥理作用不斷被發(fā)現(xiàn),既往研究已經(jīng)證明其對(duì)心血管和炎癥方面的藥理作用。隨著研究的深入,認(rèn)為粉防己堿可以抑制腫瘤細(xì)胞增殖,甚至可逆轉(zhuǎn)多藥耐藥,可作為新的抗腫瘤中藥應(yīng)用于臨床,在消化道腫瘤治療方面,尤其對(duì)結(jié)腸癌具有很好的抑制作用。為了闡明CIK細(xì)胞聯(lián)合粉防己堿對(duì)結(jié)腸癌SW620細(xì)胞株殺傷作用,本研究通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)獻(xiàn)血者外周血中CIK細(xì)胞增值變化;通過MTT法檢測(cè)CIK細(xì)胞單獨(dú)或者聯(lián)合不同濃度粉防已堿對(duì)結(jié)腸癌SW620細(xì)胞株的增殖抑制功能,為探尋臨床治療結(jié)腸癌的新思路、新方法提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:研究對(duì)象采集12名健康人外周靜脈血,分離出單個(gè)核細(xì)胞(Peripheril blood mononuclear cell,PBMC),使用密度梯度離心法提取外周血單個(gè)核細(xì)胞后進(jìn)行體外培養(yǎng)階段,分別加入相應(yīng)的細(xì)胞因子和單克隆抗體定向誘導(dǎo)和擴(kuò)增CIK細(xì)胞,經(jīng)流式細(xì)胞儀分析CIK細(xì)胞數(shù)量和表型變化,體外培養(yǎng)至第14天,在不同濃度的Tet液體里混合培養(yǎng)CIK細(xì)胞和SW620細(xì)胞,采用MTT法觀察單用Tet組,CIK細(xì)胞組和Tet聯(lián)合CIK細(xì)胞組對(duì)SW620細(xì)胞的增殖抑制效應(yīng),通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組對(duì)結(jié)腸癌SW620細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用。結(jié)果:在提取12名健康供血者外周血單個(gè)核細(xì)胞后,通過體外誘導(dǎo)分化和擴(kuò)增,細(xì)胞總數(shù)不斷增多,經(jīng)流式細(xì)胞儀分析,具有CIK細(xì)胞表型的細(xì)胞比例與培養(yǎng)時(shí)間成正相關(guān)。在體外CIK細(xì)胞對(duì)結(jié)腸癌SW620細(xì)胞有增殖抑制活性,且抑制活性隨細(xì)胞濃度提高而不斷增強(qiáng);流式結(jié)果顯示,CIK細(xì)胞中表達(dá)CD3+CD56+細(xì)胞出現(xiàn)大量增殖,由實(shí)驗(yàn)開始前的0.13%可以上升到第14天的27.8%(P0.05);MTT結(jié)果顯示,隨著效靶比的增加,CIK細(xì)胞的殺傷活性逐漸增強(qiáng),而CIK細(xì)胞在不同濃度梯度的Tet與SW620細(xì)胞共培養(yǎng)48h后,抑制活性隨濃度增長(zhǎng)而增強(qiáng)。而在CIK與Tet聯(lián)合作用下,對(duì)于SW620細(xì)胞的增殖抑制作用較單用時(shí)明顯增高(P0.05),其中以Tet30μmol/L聯(lián)合CIK效靶比40:1時(shí)功效最大(P0.05)。CIK細(xì)胞聯(lián)合Tet組對(duì)SW620細(xì)胞株的增殖抑制效應(yīng)和凋亡誘導(dǎo)活性較單用CIK細(xì)胞和單用Tet組有明顯提高(P0.05)。結(jié)論:CIK細(xì)胞對(duì)結(jié)腸癌SW620細(xì)胞有抑制增殖作用,粉防己堿對(duì)結(jié)腸癌SW620細(xì)胞增殖亦有抑制作用,粉防己堿能提高CIK細(xì)胞在體外抗結(jié)腸癌SW620細(xì)胞活性。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.35

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