本文關(guān)鍵詞：RN181通過p38-MAPK對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2凋亡及自噬的影響

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【摘要】：目的:探討過表達(dá)RN181對(duì)肝癌細(xì)胞Hep G2凋亡及自噬的影響。方法:通過瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,過表達(dá)RN181于肝癌細(xì)胞Hep G2,常規(guī)培養(yǎng),轉(zhuǎn)染24 h和48 h后,熒光顯微鏡下拍照,Western blot驗(yàn)證RN181過表達(dá)水平。過表達(dá)RN181成功后,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡的情況;Western blot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白bax、bcl-2和自噬相關(guān)蛋白beclin1和p62的表達(dá);加入p38-MAPK激動(dòng)劑茴香霉素(Anisomycin),Western blot檢測(cè)p38-MAPK的磷酸化水平,流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡率,Western blot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Cleaved Caspase-3,bax和bcl-2的表達(dá),檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白beclin1和p62的表達(dá)。結(jié)果:1.過表達(dá)RN181后,流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果提示,過表達(dá)RN181組(凋亡率為54.76±1.8%),與對(duì)照組(凋亡率為40.9±0.78%)比較,凋亡率有顯著增加(P0.01),提示過表達(dá)RN181促進(jìn)肝癌細(xì)胞Hep G2的凋亡。Western blot結(jié)果示過表達(dá)RN181組相較于對(duì)照組,顯著上調(diào)bax蛋白的表達(dá)(P0.05),以及顯著下調(diào)bcl-2蛋白表達(dá)(P0.05),提示過表達(dá)RN181可以促進(jìn)肝癌細(xì)胞Hep G2的凋亡。2.Western blot結(jié)果提示,過表達(dá)RN181組相較于對(duì)照組,顯著上調(diào)beclin1蛋白的表達(dá)(P0.05),以及顯著下調(diào)p62蛋白表達(dá)(P0.01),提示過表達(dá)RN181可以促進(jìn)肝癌細(xì)胞Hep G2的自噬。3.Western blot結(jié)果提示,與對(duì)照組相比,過表達(dá)RN181明顯下調(diào)磷酸化p38-MAPK(簡(jiǎn)稱P-p38)蛋白的表達(dá)水平(P0.05),同時(shí)單獨(dú)茴香霉素處理(80 ng/m L,0.5 h),P-p38蛋白表達(dá)量明顯升高(P0.05)。加入茴香霉素后,Western blot結(jié)果表明,與過表達(dá)RN181組比較,過表達(dá)RN181+茴香霉素共處理組的bax、Cleaved Caspase-3和beclin1蛋白表達(dá)水平均明顯下降(P0.01),同時(shí)bcl-2蛋白表達(dá)量明顯增加(P0.01),以及p62蛋白表達(dá)量明顯增加(P0.001);。上述結(jié)果提示,p38-MAPK通路介導(dǎo)了RN181促進(jìn)肝癌Hep G2細(xì)胞凋亡和自噬作用。結(jié)論:RN181通過抑制p38-MAPK通路促進(jìn)肝癌細(xì)胞Hep G2的凋亡與自噬。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7

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本文編號(hào)：1187558