本文關(guān)鍵詞：新型全反式維甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基維甲酸酯對(duì)人肝癌細(xì)胞株HepG2增殖的影響及其分子機(jī)制的研究

  更多相關(guān)文章： ATPR 肝癌HepG2細(xì)胞 增殖 凋亡

【摘要】：目的研究新型全反式維甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基維甲酸酯(4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl retinate, ATPR)對(duì)人肝癌細(xì)胞株HepG2體外增殖的影響,并初步探究可能的機(jī)制。方法使用人肝癌HepG2細(xì)胞為研究模型,全反式維甲酸(all-trans retinoic acid, ATRA)和ATPR分別處理細(xì)胞后,MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力；平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞體外克隆形成能力：為更明確ATRA和ATPR對(duì)HepG2增殖的作用,使用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞周期分布；Hoechst染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。此外,為初步探討潛在的分子機(jī)制,細(xì)胞免疫熒光法檢測(cè)腫瘤抑制因子p53蛋白的表達(dá)和定位情況。實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄PCR (qRT-PCR)和Western blot分別檢測(cè)p53基因轉(zhuǎn)錄和蛋白翻譯水平；Western blot法檢測(cè)MDM2 (murine double minute 2), p53凋亡刺激蛋白(apoptosis stimμlating protein of p53, ASPP)家族,周期相關(guān)蛋白(p21、周期蛋白(cyclin)D、cyclinE,周期蛋白依賴性激酶(cyclin-dependent kinase, CDK)4、CDK6)和凋亡相關(guān)蛋白(Bax、Bcl-2和caspase-3)的表達(dá)情況。最后,為分析ATRA和ATPR對(duì)核內(nèi)維甲酸受體的影響,Western blot檢測(cè)了維甲酸受體(retinoic acid receptors, RARs)和維甲酸類(lèi)X受體(retinoid x receptors, RXRs)的表達(dá)。結(jié)果MTT結(jié)果顯示,ATRA和ATPR均可以抑制人肝癌細(xì)胞株HepG2的生長(zhǎng)活力,且具有濃度和時(shí)間依賴性,但在同濃度、同一處理時(shí)間下,ATPR較ATRA的抑制率更高。平板克隆實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞術(shù)顯示,ATPR可顯著抑制HepG2細(xì)胞的克隆形成能力,并將細(xì)胞阻滯在G0/G1期,而ATRA無(wú)明顯抑制作用。Hoechst染色顯示,ATPR可以誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞的凋亡,免疫熒光顯示,ATPR組的p53蛋白在細(xì)胞核內(nèi)的熒光密度增加,同樣地,qRT-PCR和Western blot也表明ATPR能夠增強(qiáng)p53 mRNA和蛋白的表達(dá)水平。此外,ATPR能夠上調(diào)ASPP1、p21、Bax和caspase-3的水平,下調(diào)MDM2、iASPP、cyclinD、CDK6、cyclinE和Bcl-2的水平,而ASPP2和CDK4的表達(dá)無(wú)明顯變化。對(duì)于維甲酸受體蛋白的表達(dá),Western blot結(jié)果顯示,與細(xì)胞對(duì)照組相比,ATRA和ATPR均能夠增加RARα以及減少RXRβ和RXRγ的表達(dá),但ATPR作用更顯著,而RARy和RXRa的表達(dá)在各組之間無(wú)明顯變化。此外,ATRA可以明顯降低RARβ的表達(dá)量,而ATPR對(duì)其表達(dá)無(wú)明顯影響。結(jié)論在同濃度、同等作用時(shí)間下,與ATRA相比,ATPR對(duì)人肝癌細(xì)胞株HepG2的體外增殖抑制作用更強(qiáng)。其作用機(jī)制可能是ATPR通過(guò)結(jié)合不同的維甲酸受體后,上調(diào)p53的轉(zhuǎn)錄、翻譯和ASPP1的表達(dá)水平,以及下調(diào)MDM2和iASPP表達(dá),來(lái)調(diào)控下游凋亡和周期相關(guān)蛋白,進(jìn)而引起G0/G1期阻滯和細(xì)胞凋亡。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R735.7

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