本文關(guān)鍵詞：丙戊酸鈉聯(lián)合紫杉醇促進肺癌A549細胞凋亡的實驗研究

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【摘要】：肺癌在惡性腫瘤的發(fā)病率及死亡率中均居首位,其中非小細胞肺癌占肺癌新發(fā)病例的80%-85%,約1/3肺癌患者確診時已為局部晚期。傳統(tǒng)化療有效率及中位生存期并不盡如人意,且多數(shù)化療藥物在胃腸道及血液系統(tǒng)毒副反應(yīng)非常大,常常是藥物應(yīng)用的劑量限制性毒副反應(yīng),其中有很大部分患者因此對化療望而卻步。腫瘤的發(fā)病機制極其復(fù)雜,不可能依賴單一藥物或治療方法而取得理想效果。因此,在不增加患者毒副反應(yīng)的前提下,尋找能協(xié)同增加化療效果、提高化療有效率及延長患者生存期的藥物成為腫瘤醫(yī)生的研究熱點。近年來,紫杉醇(PTX)被廣泛應(yīng)用于非小細胞肺癌的治療,其抗癌機制為:紫杉醇可作用于細胞微管/微管蛋白,抑制微管解聚,使微管束的排列異常,導(dǎo)致紡錘體失去正常功能,促使細胞死亡。紫杉醇聯(lián)合鉑類是目前治療非小細胞肺癌最常用的化療方案之一。紫杉醇相比于順鉑等非小細胞肺癌的一線化療藥物,具有抗癌作用顯著,副作用低的優(yōu)點,得到了臨床上的廣泛應(yīng)用。隨著表觀遺傳調(diào)控劑抗腫瘤研究的深入,開展包括HDAC抑制劑在內(nèi)的綜合治療方案的臨床探索具有現(xiàn)實的意義,VPA便是這種新的、安全性高的HDAC抑制劑。丙戊酸鈉(VPA)屬于短鏈脂肪酸類HDAC抑制劑,國內(nèi)外學(xué)者應(yīng)用VPA對多種血液系統(tǒng)及實體惡性腫瘤進行基礎(chǔ)研究,證實其有明顯的抑制腫瘤的作用。丙戊酸鈉與其他化療藥物相比,具有較低的毒性,且有良好的有效率。目的:探討丙戊酸鈉單藥及聯(lián)合紫杉醇是否能夠增加肺癌A549細胞的凋亡及其可能相關(guān)機制,探索新的思路用于肺癌的治療,為臨床抗肺癌治療提供理論依據(jù)。方法:1細胞來源:肺癌A549細胞由承德醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)研究所贈送2實驗分組:設(shè)立空白對照組、紫杉醇組、丙戊酸鈉組、紫杉醇與丙戊酸鈉的聯(lián)合用藥組3mtt法檢測丙戊酸鈉對肺癌a549細胞增殖的影響4流式細胞儀檢測各組a549細胞凋亡情況及對細胞周期的影響5熒光定量pcr法測定各組細胞bcl-2、bax及caspase3基因表達量的差異6westernblot法測定各組細胞bcl-2、bax及caspase3蛋白表達的差異7數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析:每個實驗至少重復(fù)三次,統(tǒng)計數(shù)據(jù)使用spss19.0統(tǒng)計軟件,分別用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)的數(shù)據(jù)進行表示。多組之間的比較使用單因素方差分析法,兩組之間的比較使用lsd法,p0.05則表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1mtt法檢測丙戊酸鈉對肺癌a549細胞增殖的影響:先篩查出各藥物作用細胞24h的ic20,分別為:丙戊酸鈉為5.80mmol/l、紫杉醇為0.05μg/ml,并以此作為后續(xù)實驗各干預(yù)組的藥物濃度。mtt法檢測不同濃度的丙戊酸鈉作用于a549細胞24h、48h及72h后的抑制率,結(jié)果示,同一作用時間,隨著丙戊酸鈉濃度的升高,抑制率也逐漸升高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);同一丙戊酸鈉濃度,隨著作用時間的延長,抑制率也逐漸升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),說明丙戊酸鈉對肺癌a549細胞增殖具有抑制作用,且呈劑量依懶性及時間依賴性。2流式細胞儀檢測丙戊酸鈉聯(lián)合紫杉醇對肺癌a549細胞凋亡及細胞周期的影響:實驗分4組,空白對照組、紫杉醇組(0.05μg/ml)、丙戊酸鈉組(5.80mmol/l)、聯(lián)合用藥組(ptx0.05μg/ml+vpa5.80mmol/l),各組藥物作用24h后,流式細胞儀檢測證實丙戊酸鈉與紫杉醇有聯(lián)合促肺癌細胞凋亡的作用,4個組的總凋亡率呈上升趨勢,且聯(lián)合用藥組的總凋亡率最高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。與空白對照組相比,紫杉醇組g2/m期細胞比例明顯增多,丙戊酸鈉g0/g1期細胞比例明顯增多(p0.05),聯(lián)合用藥組的細胞在g0/g1期百分比明顯增加,且較丙戊酸鈉組更為明顯(p0.05),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義3熒光定量pcr及westernblot法檢測兩藥聯(lián)合對肺癌a549細胞中bcl-2、bax及caspase3基因及其蛋白表達的影響:實驗分組同上,藥物作用24h后,與空白對照組比較,各用藥組A549細胞中Bcl-2基因及蛋白的表達均降低,且聯(lián)合用藥組的表達最低,各用藥組A549細胞中Bax及Caspase3基因及蛋白的表達均升高,且聯(lián)合用藥組的表達最高(P0.05,各組差異有統(tǒng)計學(xué)意義)。表明隨著藥物的聯(lián)合作用,Bcl-2的表達逐漸降低,Bax及Caspase3的表達逐漸升高結(jié)論:丙戊酸鈉能夠抑制A549細胞的增殖,且呈現(xiàn)劑量依懶性及時間依賴性,能夠?qū)549細胞生長阻滯在G0/G1期,且丙戊酸鈉與紫杉醇聯(lián)合應(yīng)用,對于抑制肺癌細胞的增殖具有協(xié)同作用。其機制可能與其能夠上調(diào)A549細胞中凋亡因子Bax及Caspase3的表達,下調(diào)A549細胞中Bcl-2的表達有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：承德醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2

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7 通訊員 劉e，

本文編號：1173819