發(fā)布時(shí)間：2017-11-12 02:01

  本文關(guān)鍵詞：丙戊酸鈉聯(lián)合紫杉醇促進(jìn)肺癌A549細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：肺癌在惡性腫瘤的發(fā)病率及死亡率中均居首位,其中非小細(xì)胞肺癌占肺癌新發(fā)病例的80%-85%,約1/3肺癌患者確診時(shí)已為局部晚期。傳統(tǒng)化療有效率及中位生存期并不盡如人意,且多數(shù)化療藥物在胃腸道及血液系統(tǒng)毒副反應(yīng)非常大,常常是藥物應(yīng)用的劑量限制性毒副反應(yīng),其中有很大部分患者因此對化療望而卻步。腫瘤的發(fā)病機(jī)制極其復(fù)雜,不可能依賴單一藥物或治療方法而取得理想效果。因此,在不增加患者毒副反應(yīng)的前提下,尋找能協(xié)同增加化療效果、提高化療有效率及延長患者生存期的藥物成為腫瘤醫(yī)生的研究熱點(diǎn)。近年來,紫杉醇(PTX)被廣泛應(yīng)用于非小細(xì)胞肺癌的治療,其抗癌機(jī)制為:紫杉醇可作用于細(xì)胞微管/微管蛋白,抑制微管解聚,使微管束的排列異常,導(dǎo)致紡錘體失去正常功能,促使細(xì)胞死亡。紫杉醇聯(lián)合鉑類是目前治療非小細(xì)胞肺癌最常用的化療方案之一。紫杉醇相比于順鉑等非小細(xì)胞肺癌的一線化療藥物,具有抗癌作用顯著,副作用低的優(yōu)點(diǎn),得到了臨床上的廣泛應(yīng)用。隨著表觀遺傳調(diào)控劑抗腫瘤研究的深入,開展包括HDAC抑制劑在內(nèi)的綜合治療方案的臨床探索具有現(xiàn)實(shí)的意義,VPA便是這種新的、安全性高的HDAC抑制劑。丙戊酸鈉(VPA)屬于短鏈脂肪酸類HDAC抑制劑,國內(nèi)外學(xué)者應(yīng)用VPA對多種血液系統(tǒng)及實(shí)體惡性腫瘤進(jìn)行基礎(chǔ)研究,證實(shí)其有明顯的抑制腫瘤的作用。丙戊酸鈉與其他化療藥物相比,具有較低的毒性,且有良好的有效率。目的:探討丙戊酸鈉單藥及聯(lián)合紫杉醇是否能夠增加肺癌A549細(xì)胞的凋亡及其可能相關(guān)機(jī)制,探索新的思路用于肺癌的治療,為臨床抗肺癌治療提供理論依據(jù)。方法:1細(xì)胞來源:肺癌A549細(xì)胞由承德醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)研究所贈送2實(shí)驗(yàn)分組:設(shè)立空白對照組、紫杉醇組、丙戊酸鈉組、紫杉醇與丙戊酸鈉的聯(lián)合用藥組3mtt法檢測丙戊酸鈉對肺癌a549細(xì)胞增殖的影響4流式細(xì)胞儀檢測各組a549細(xì)胞凋亡情況及對細(xì)胞周期的影響5熒光定量pcr法測定各組細(xì)胞bcl-2、bax及caspase3基因表達(dá)量的差異6westernblot法測定各組細(xì)胞bcl-2、bax及caspase3蛋白表達(dá)的差異7數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析:每個(gè)實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)三次,統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)使用spss19.0統(tǒng)計(jì)軟件,分別用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)的數(shù)據(jù)進(jìn)行表示。多組之間的比較使用單因素方差分析法,兩組之間的比較使用lsd法,p0.05則表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1mtt法檢測丙戊酸鈉對肺癌a549細(xì)胞增殖的影響:先篩查出各藥物作用細(xì)胞24h的ic20,分別為:丙戊酸鈉為5.80mmol/l、紫杉醇為0.05μg/ml,并以此作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)各干預(yù)組的藥物濃度。mtt法檢測不同濃度的丙戊酸鈉作用于a549細(xì)胞24h、48h及72h后的抑制率,結(jié)果示,同一作用時(shí)間,隨著丙戊酸鈉濃度的升高,抑制率也逐漸升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);同一丙戊酸鈉濃度,隨著作用時(shí)間的延長,抑制率也逐漸升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),說明丙戊酸鈉對肺癌a549細(xì)胞增殖具有抑制作用,且呈劑量依懶性及時(shí)間依賴性。2流式細(xì)胞儀檢測丙戊酸鈉聯(lián)合紫杉醇對肺癌a549細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的影響:實(shí)驗(yàn)分4組,空白對照組、紫杉醇組(0.05μg/ml)、丙戊酸鈉組(5.80mmol/l)、聯(lián)合用藥組(ptx0.05μg/ml+vpa5.80mmol/l),各組藥物作用24h后,流式細(xì)胞儀檢測證實(shí)丙戊酸鈉與紫杉醇有聯(lián)合促肺癌細(xì)胞凋亡的作用,4個(gè)組的總凋亡率呈上升趨勢,且聯(lián)合用藥組的總凋亡率最高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。與空白對照組相比,紫杉醇組g2/m期細(xì)胞比例明顯增多,丙戊酸鈉g0/g1期細(xì)胞比例明顯增多(p0.05),聯(lián)合用藥組的細(xì)胞在g0/g1期百分比明顯增加,且較丙戊酸鈉組更為明顯(p0.05),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義3熒光定量pcr及westernblot法檢測兩藥聯(lián)合對肺癌a549細(xì)胞中bcl-2、bax及caspase3基因及其蛋白表達(dá)的影響:實(shí)驗(yàn)分組同上,藥物作用24h后,與空白對照組比較,各用藥組A549細(xì)胞中Bcl-2基因及蛋白的表達(dá)均降低,且聯(lián)合用藥組的表達(dá)最低,各用藥組A549細(xì)胞中Bax及Caspase3基因及蛋白的表達(dá)均升高,且聯(lián)合用藥組的表達(dá)最高(P0.05,各組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。表明隨著藥物的聯(lián)合作用,Bcl-2的表達(dá)逐漸降低,Bax及Caspase3的表達(dá)逐漸升高結(jié)論:丙戊酸鈉能夠抑制A549細(xì)胞的增殖,且呈現(xiàn)劑量依懶性及時(shí)間依賴性,能夠?qū)549細(xì)胞生長阻滯在G0/G1期,且丙戊酸鈉與紫杉醇聯(lián)合應(yīng)用,對于抑制肺癌細(xì)胞的增殖具有協(xié)同作用。其機(jī)制可能與其能夠上調(diào)A549細(xì)胞中凋亡因子Bax及Caspase3的表達(dá),下調(diào)A549細(xì)胞中Bcl-2的表達(dá)有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：承德醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 崔堯元,朱衛(wèi),李秋平,張煜,余勇,張曉彪,江瀛川,胡凡,周浩;丙戊酸鈉治療癲癇的臨床應(yīng)用[J];中國臨床醫(yī)學(xué);2001年05期

2 鄭凱;;丙戊酸鈉可引起胎兒出生缺陷[J];藥品評價(jià);2010年06期

3 張敬軍;丙戊酸鈉的應(yīng)用進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué).神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)分冊;1996年01期

4 陳偉鵬;練小蘭;張勝佳;;丙戊酸鈉用于臨床治療癲癇的療效及安全性分析[J];中國現(xiàn)代醫(yī)生;2014年03期

5 牛德旺,陳江平,王瑞芳;口服丙戊酸鈉致腹痛8例誤診分析[J];河南實(shí)用神經(jīng)疾病雜志;2001年05期

6 霍曉筠,王富偉;丙戊酸鈉對兒童肝臟酶活性的影響[J];遼寧藥物與臨床;2001年03期

7 張敬軍,高英麗,陳青;丙戊酸鈉治療原發(fā)性三叉神經(jīng)痛的療效觀察[J];泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2001年04期

8 孟秀麗,孟榮英;丙戊酸鈉治療癲癇56例臨床分析[J];武警醫(yī)學(xué);2001年05期

9 時(shí)穎華;丙戊酸半鈉及丙戊酸:胰腺炎![J];藥物不良反應(yīng)雜志;2001年02期

10 楊萬成,楊小東;丙戊酸鈉中毒1例報(bào)告[J];黑龍江醫(yī)學(xué);2002年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 黃Pr元;徐運(yùn);;丙戊酸鈉治療缺血性腦損傷的作用及機(jī)制探討[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

2 毛凱;;36例丙戊酸鈉治療癲癇的臨床應(yīng)用[A];2004年中國西部藥學(xué)論壇論文匯編（下冊）[C];2004年

3 任榕娜;黃鈴沂;陳新民;葉禮燕;黃俊景;;丙戊酸鈉兒童用藥個(gè)體化的臨床研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十四次全國兒科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

4 毛凱;文友民;;36粒丙戊酸鈉治療癲癇的臨床應(yīng)用的初論[A];中國藥學(xué)會應(yīng)用藥理專業(yè)委員會第三屆學(xué)術(shù)會議、中國藥理學(xué)會制藥工業(yè)專業(yè)委員會第十三屆學(xué)術(shù)會議暨2008生物醫(yī)藥學(xué)術(shù)論壇論文匯編[C];2008年

5 趙晶;張明;羅新明;陳夏;李俊;;丙戊酸鈉對癲癇患者腎功能的影響及其相關(guān)因素[A];江西省第五次中西醫(yī)結(jié)合神經(jīng)科學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2011年

6 丁美萍;包穎穎;陳忠;劉志蓉;徐瓏瓏;;胰島素抵抗與丙戊酸鈉治療[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

7 張一攀;;丙戊酸鈉治療對血清瘦素、胰島素的影響[A];第九次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2006年

8 曾艷;;丙戊酸鈉血藥濃度接近或超過有效濃度范圍上限的患者肝腎功能、血常規(guī)結(jié)果分析[A];第二屆全國治療藥物監(jiān)測學(xué)術(shù)年會會議指南[C];2012年

9 趙熙婷;裴保方;;一例丙戊酸鈉血藥濃度低下的病例分析[A];2010年臨床藥學(xué)學(xué)術(shù)年會暨第六屆臨床藥師論壇論文集[C];2010年

10 陳子蓉;鄭金甌;黃東紅;;廣西農(nóng)村地區(qū)癲癇及丙戊酸鈉療效的初步研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉紅虹;癲癇藥 丙戊酸鈉莫長用[N];家庭醫(yī)生報(bào);2007年

2 常紅軍;丙戊酸鈉的新用途[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2006年

3 阿勝　編譯;丙戊酸鈉可增加新生兒出生缺陷風(fēng)險(xiǎn)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2010年

4 常怡勇;丙戊酸鈉治療癌痛有效[N];中國醫(yī)藥報(bào);2001年

5 劉揚(yáng);丙戊酸鈉拉動增長 加巴噴丁不可小覷[N];中國醫(yī)藥報(bào);2005年

6 齡訊;歐盟提示碳青霉烯類藥品和丙戊酸的相互作用[N];中國醫(yī)藥報(bào);2010年

7 通訊員 劉e，

本文編號：1173819