本文關(guān)鍵詞：姜黃素通過抑制NF-κB通路逆轉(zhuǎn)吸煙誘導(dǎo)膀胱上皮細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化

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【摘要】：背景與研究目的膀胱癌是世界上發(fā)病率較高的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤之一,其中最常見的病理類型是移行上皮細(xì)胞癌,具有復(fù)發(fā)性,浸潤性和難治愈性等特點(diǎn)。流行病學(xué)研究已經(jīng)證實(shí)香煙暴露是膀胱癌的重要誘發(fā)因素之一,但香煙暴露與膀腫癌進(jìn)展的分子機(jī)制尚未得到充分研究。研究顯示上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)在腫瘤細(xì)胞的進(jìn)展中起到至關(guān)重要的作用。大量研究證實(shí)姜黃素對多種腫瘤細(xì)胞的生長均有抑制作用。實(shí)驗(yàn)著重研究香煙暴露對膀胱移行上皮細(xì)胞EMT的影響,并探討NF-κB通路在EMT中的作用及姜黃素的干預(yù)效應(yīng)。方法首先通過MTT實(shí)驗(yàn)篩選出對膀胱正常上皮細(xì)胞(SV-HUC-1 cells)沒有毒性的香煙懸液(cigarette smoking extract,CSE)濃度。(1)觀察CSE處理對SV-HUC-1細(xì)胞形態(tài)的影響,使用顯微鏡進(jìn)行拍照并記錄。(2)利用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和transwell小室實(shí)驗(yàn)觀察CSE處理對細(xì)胞的遷移和侵襲能力的變化,并用顯微鏡拍攝記錄。(3)CSE處理后,觀察細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)志物蛋白及m RNA水平的變化,采用Western Blotting和q RT-PCR及免疫熒光的方法檢測。(4)接著應(yīng)用Western Blotting檢測了CSE處理后細(xì)胞內(nèi)NF-κB通路標(biāo)志性蛋白的變化。(5)繼而用NF-κB通路特異性抑制劑觀察其對CSE誘導(dǎo)的SV-HUC-1細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化作用的逆轉(zhuǎn)效果。(6)最后將CSE和姜黃素聯(lián)合處理細(xì)胞,觀察姜黃素對CSE引起的SV-HUC-1細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的逆轉(zhuǎn)作用。結(jié)果(1)通過MTT檢測不同香煙懸液濃度下的細(xì)胞活性,我們發(fā)現(xiàn)1%時(shí)細(xì)胞活性下降至80%以下,存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。最終選擇香煙懸液的濃度為選用0.1%,0.25%,0.5%做為實(shí)驗(yàn)劑量。(2)將SV-HUC-1細(xì)胞暴露于選定的香煙懸液下7天后,觀察細(xì)胞形態(tài),發(fā)現(xiàn)正常的膀胱移行上皮細(xì)胞呈現(xiàn)飽滿的圓形,橢圓形,細(xì)胞呈凝聚狀態(tài)。處理后細(xì)胞變成長梭形,形似蝌蚪狀,細(xì)胞之間較為分散。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)及transwell小室實(shí)驗(yàn)證明細(xì)胞的遷移及侵襲能力升高。(3)經(jīng)香煙懸液處理7天后,Western Blotting,q RT-PCR及免疫熒光檢測細(xì)胞的標(biāo)志物。發(fā)現(xiàn)上皮標(biāo)志物:E-Cadherin、ZO-1表達(dá)下降,間質(zhì)標(biāo)志物:vimentin、N-cadherin表達(dá)上調(diào)。(4)NF-κB通路激活,一定香煙懸液濃度下,隨著香煙懸液濃度增加,NF-κB特異性蛋白:p65,p50的核表達(dá)水平升高,胞質(zhì)中的磷酸化IKKα/β(phosphorylated IKKα/β)升高,而通路的抑制劑IκB持續(xù)降低。通過蛋白檢測證實(shí)當(dāng)NF-κB通路活性被抑制劑PDTC有效抑制時(shí),香煙懸液誘導(dǎo)的SV-HUC-1細(xì)胞上皮間質(zhì)化被成功逆轉(zhuǎn)。上皮標(biāo)志物:E-Cadherin、ZO-1表達(dá)上調(diào),間質(zhì)標(biāo)志物:vimentin、N-cadherin的表達(dá)下調(diào)。細(xì)胞形態(tài)及細(xì)胞的遷移侵襲能力被抑制。(5)姜黃素通過抑制NF-κB通路活性,達(dá)到抑制香煙懸液誘導(dǎo)的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化作用的效果。通過蛋白及基因檢測,發(fā)現(xiàn)上皮蛋白表達(dá)水平上調(diào),間質(zhì)蛋白表達(dá)水平下降。結(jié)論1、香煙懸液誘導(dǎo)膀胱移行上皮細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化。2、NF-κB通路在香煙懸液引起的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中起到重要的作用,為流行病學(xué)調(diào)查起到相互印證的作用,同時(shí)為分子靶向治療提供科學(xué)依據(jù)。3、姜黃素對膀胱癌的發(fā)生發(fā)展有一定的干預(yù)治療效果,且為膀胱癌的分子治療提供了新的方向及治療后的預(yù)防提供了新的方法。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.14

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本文編號：1172445