納米羥基磷灰石攜載lefty-1基因?qū)θ巳橄侔┘毎臍?/H1>
發(fā)布時間：2017-11-11 19:20
本文關(guān)鍵詞：納米羥基磷灰石攜載lefty-1基因?qū)θ巳橄侔┘毎臍?/strong>
更多相關(guān)文章： 納米HAp 基因治療 lefty-1 人乳腺癌細胞 殺傷效應
【摘要】：基因治療的關(guān)鍵是在于選擇合適的基因載體。納米羥基磷灰石(HAp)具有良好的生物相容性和生物降解性在基因載體中有著廣泛的運用。本課題通過水熱共沉淀法合成了三種納米HAp顆粒,并將顆粒負載質(zhì)粒DNA(pDNA),研究其基因負載量和對基因釋放性能。對納米HAp顆粒進行體外降解性能研究,并觀察顆粒是否能夠進入細胞以及可能的入胞機制。最后,研究其攜載lefty-1基因?qū)θ巳橄侔┘毎臍Ч?并對納米HAp顆粒的生物相容性進行了檢測。具體研究內(nèi)容和結(jié)果如下:1)分別以十二烷基三甲基溴化銨(DTAB)、聚乙烯亞胺(PEI)和絲膠蛋白為調(diào)控劑,共沉淀法成功制備三種納米HAp顆粒。實驗結(jié)果表明:合成的三種顆粒形貌分別為棒狀、長梭狀和球形,主要晶型都為羥基磷灰石,平均長徑大小分別150 nm、350 nm和50 nm左右,有機物的含量分別為3.81%、8.96%和7.41%。2)體外HAp顆粒降解實驗在不同pH值的PBS溶液中進行,研究其體外降解性能,并對降解91天后的顆粒進行表征測試。實驗結(jié)果表明:HAp顆粒在弱酸性條件下降解速度最快,降解百分比也最大,且降解具有pH響應性。降解后長梭狀顆粒的形貌發(fā)生部分變化,出現(xiàn)棒狀和針狀形貌,顆粒的粒徑變小,但顆粒的主要晶型沒有改變。說明制備的納米HAp顆粒是一種可降解的材料,可作為一種緩釋性基因載體。3)通過混合孵育法制備HAp-pDNA復合物并研究其負載效率,以及在不同pH條件下基因的釋放效率;將制備的HAp-pDNA復合物轉(zhuǎn)染人乳腺癌細胞(MCF-7和MDA-MB-231),研究其轉(zhuǎn)染效率。實驗結(jié)果表明:制備的三種納米HAp顆粒都能有效地負載質(zhì)粒DNA,并且在弱酸性pH條件下可實現(xiàn)對質(zhì)粒DNA的持續(xù)釋放,具有一定的pH響應性。制備的HAp-pDNA復合物成功轉(zhuǎn)染了人乳腺癌細胞,并且經(jīng)PEI調(diào)控合成的長梭狀納米HAp顆粒對MCF-7細胞具有更高的轉(zhuǎn)染效率。4)細胞攝取顆粒實驗通過FITC-羅丹明鬼筆環(huán)肽染色實驗和TEM直接觀察法進行。實驗結(jié)果表明:納米HAp顆粒能夠被細胞攝取,進入細胞后分布在細胞質(zhì)和細胞核中。顆粒進入細胞的方式主要是通過胞吞作用,以吞噬小泡的方式進入細胞。分散在培養(yǎng)液中的顆粒進入細胞后會團聚在一起,并且對細胞進行饑餓處理后能促進細胞對顆粒的攝取能力。5)通過LDH乳酸脫氫酶實驗和MTT細胞毒性實驗檢測顆粒的生物相容性,同時,將HAp顆粒負載lefty-1基因,研究其對人乳腺癌細胞的殺傷效應,并通過hocehst染色法和流式細胞儀檢測細胞凋亡情況。實驗結(jié)果表明:所制備的納米HAp顆粒對人乳腺上皮細胞表現(xiàn)極低的細胞毒性,具有良好的生物相容性。納米HAp顆粒攜載lefty-1基因后對人乳腺癌細胞具有良好的殺傷效果,且殺傷效率達到40%左右。Hocehst染色和流式細胞儀實驗結(jié)果表明lefty-1基因?qū)θ橄侔┘毎臍饕ㄟ^促進細胞凋亡作用。本研究首次證明了人源lefty-1基因?qū)θ巳橄侔┘毎臍?納米HAp顆粒攜載lefty-1基因用于乳腺癌治療研究有望成為乳腺癌基因治療的一個新方向。
【學位授予單位】：浙江理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9
【相似文獻】
中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條
1 毛玉昌,章平,徐洪鈞,徐峰,賈彩鳳,錢e，
本文編號：1172740
本文鏈接：http://sikaile.net/yixuelunwen/zlx/1172740.html
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【摘要】：基因治療的關(guān)鍵是在于選擇合適的基因載體。納米羥基磷灰石(HAp)具有良好的生物相容性和生物降解性在基因載體中有著廣泛的運用。本課題通過水熱共沉淀法合成了三種納米HAp顆粒,并將顆粒負載質(zhì)粒DNA(pDNA),研究其基因負載量和對基因釋放性能。對納米HAp顆粒進行體外降解性能研究,并觀察顆粒是否能夠進入細胞以及可能的入胞機制。最后,研究其攜載lefty-1基因?qū)θ巳橄侔┘毎臍Ч?并對納米HAp顆粒的生物相容性進行了檢測。具體研究內(nèi)容和結(jié)果如下:1)分別以十二烷基三甲基溴化銨(DTAB)、聚乙烯亞胺(PEI)和絲膠蛋白為調(diào)控劑,共沉淀法成功制備三種納米HAp顆粒。實驗結(jié)果表明:合成的三種顆粒形貌分別為棒狀、長梭狀和球形,主要晶型都為羥基磷灰石,平均長徑大小分別150 nm、350 nm和50 nm左右,有機物的含量分別為3.81%、8.96%和7.41%。2)體外HAp顆粒降解實驗在不同pH值的PBS溶液中進行,研究其體外降解性能,并對降解91天后的顆粒進行表征測試。實驗結(jié)果表明:HAp顆粒在弱酸性條件下降解速度最快,降解百分比也最大,且降解具有pH響應性。降解后長梭狀顆粒的形貌發(fā)生部分變化,出現(xiàn)棒狀和針狀形貌,顆粒的粒徑變小,但顆粒的主要晶型沒有改變。說明制備的納米HAp顆粒是一種可降解的材料,可作為一種緩釋性基因載體。3)通過混合孵育法制備HAp-pDNA復合物并研究其負載效率,以及在不同pH條件下基因的釋放效率;將制備的HAp-pDNA復合物轉(zhuǎn)染人乳腺癌細胞(MCF-7和MDA-MB-231),研究其轉(zhuǎn)染效率。實驗結(jié)果表明:制備的三種納米HAp顆粒都能有效地負載質(zhì)粒DNA,并且在弱酸性pH條件下可實現(xiàn)對質(zhì)粒DNA的持續(xù)釋放,具有一定的pH響應性。制備的HAp-pDNA復合物成功轉(zhuǎn)染了人乳腺癌細胞,并且經(jīng)PEI調(diào)控合成的長梭狀納米HAp顆粒對MCF-7細胞具有更高的轉(zhuǎn)染效率。4)細胞攝取顆粒實驗通過FITC-羅丹明鬼筆環(huán)肽染色實驗和TEM直接觀察法進行。實驗結(jié)果表明:納米HAp顆粒能夠被細胞攝取,進入細胞后分布在細胞質(zhì)和細胞核中。顆粒進入細胞的方式主要是通過胞吞作用,以吞噬小泡的方式進入細胞。分散在培養(yǎng)液中的顆粒進入細胞后會團聚在一起,并且對細胞進行饑餓處理后能促進細胞對顆粒的攝取能力。5)通過LDH乳酸脫氫酶實驗和MTT細胞毒性實驗檢測顆粒的生物相容性,同時,將HAp顆粒負載lefty-1基因,研究其對人乳腺癌細胞的殺傷效應,并通過hocehst染色法和流式細胞儀檢測細胞凋亡情況。實驗結(jié)果表明:所制備的納米HAp顆粒對人乳腺上皮細胞表現(xiàn)極低的細胞毒性,具有良好的生物相容性。納米HAp顆粒攜載lefty-1基因后對人乳腺癌細胞具有良好的殺傷效果,且殺傷效率達到40%左右。Hocehst染色和流式細胞儀實驗結(jié)果表明lefty-1基因?qū)θ橄侔┘毎臍饕ㄟ^促進細胞凋亡作用。本研究首次證明了人源lefty-1基因?qū)θ巳橄侔┘毎臍?納米HAp顆粒攜載lefty-1基因用于乳腺癌治療研究有望成為乳腺癌基因治療的一個新方向。
【學位授予單位】：浙江理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9
【相似文獻】
中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條
1 毛玉昌,章平,徐洪鈞,徐峰,賈彩鳳,錢e，
本文編號：1172740
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