非小細(xì)胞肺癌患者血液循環(huán)DNA含量及完整性的研究
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【摘要】:(一)免提取cfDNA含量及完整性檢測方法建立及性能評價背景非小細(xì)胞肺癌是肺癌中最常見的類型,包括腺癌,鱗癌,細(xì)支氣管肺泡癌和大細(xì)胞癌。大約70%的患者在確診時,已是晚期或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,不能得到很好的治療,所以盡早發(fā)現(xiàn)非常重要。腫瘤患者血液中的游離DNA(cell free DNA,cfDNA)包括循環(huán)腫瘤DNA(circulating tumor DNA,ctDNA),主要來源于細(xì)胞的凋亡和壞死。血液循環(huán)中的癌細(xì)胞和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的癌細(xì)胞同樣釋放cfDNA,可以通過檢測cfDNA含量來估算腫瘤負(fù)荷、評價治療效果。DNA的完整性(Integrity)有別于非腫瘤人群是腫瘤患者cfDNA的另一個顯著特征。目前定量常用PCR方法,第一步需要提取血液循環(huán)DNA,這是一個極容易產(chǎn)生誤差的步驟。即便不考慮操作者的因素,提取方法和試劑的不同就會造成巨大誤差。目的研究一種方法,不經(jīng)過DNA提取步驟,直接對血液中的循環(huán)DNA進(jìn)行定量,可以去除DNA提取試劑盒和操作人員差異造成的DNA提取誤差。方法通過提取和免提取cfDNA直接定量的兩種方法來對比檢測cfDNA,比較兩者的擴(kuò)增效率,精密度及準(zhǔn)確度。結(jié)果我們通過特殊的技術(shù)工藝處理,可以直接用血清進(jìn)行定量PCR,不影響PCR反應(yīng),擴(kuò)增效率與提純DNA一致,可精確檢測出低至ng水平的血清游離DNA,檢測范圍1-10000ng/ml,本方法具有較高的準(zhǔn)確度及精密度。相比先用試劑盒提取cfDNA,在定量結(jié)果的穩(wěn)定性、重復(fù)性等方面都有顯著改善。(二)非小細(xì)胞肺癌患者cfdna含量及完整性的研究背景近年來,血液循環(huán)dna(cfdna)作為一種潛在的腫瘤標(biāo)志物已經(jīng)受到越來越多人的關(guān)注,因為它的檢測創(chuàng)傷很小而且方便,所以比較容易被人們接受。cfdna的水平在健康人和良性疾病病人中較低,但是在非小細(xì)胞肺癌患者的血液中有非常明顯的增加。癌癥病人的循環(huán)腫瘤dna的完整性也是其重要特征之一。因此聯(lián)合cfdna的含量和完整性可能是診斷癌癥的一個很好的指標(biāo)。目的通過比較非小細(xì)胞肺癌患者和健康人的循環(huán)dna的含量及完整性,來評價循環(huán)dna含量及完整性用于診斷nsclc的臨床價值。方法采用本實驗室創(chuàng)立的免提取血液循環(huán)dna含量及完整性檢測的pcr技術(shù),對非小細(xì)胞肺癌患者及健康人的循環(huán)dna進(jìn)行定量,分析比較兩組的區(qū)別。結(jié)果1.nsclc病人組及健康對照組的cfdna含量中位數(shù)(四分位距)分別為212(622.25)ng/ml和65.4(290.65)ng/ml,二者差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,p0.05;而完整性指數(shù)(dii)的中位數(shù)(四分位距)分別是0.0764(0.276)和0.066(0.186),兩組之間的差異無顯著性,p0.05。2.cfdna含量和完整性指數(shù)(dii)在不同性別、年齡及腫瘤病理類型間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義,p值均大于0.05;而在不同病理分期的組間差異都具有統(tǒng)計學(xué)意義,p0.05。3.循環(huán)dna含量用來區(qū)分nsclc患者和健康人群的auc是0.659,此時的敏感性為72.3%,特異性為59.5%,cut-off值為87.5ng/ml。(三)非小細(xì)胞肺癌組織egfr信號途徑相關(guān)基因突變的檢測背景目前,與nsclc靶向治療相關(guān)幾個信號途徑已經(jīng)被研究多年,其中最主要的是表皮生長因子受體(epidermalgrowthfactorreceptor,egfr)信號途徑,針對該途徑研制開發(fā)的酪氨酸酶抑制劑(tyrosinekinaseinhibitor,tki),常用的藥物有厄洛替尼,吉非替尼,西妥昔單抗等,都在臨床上取得了不錯的療效。egfr信號通路中,egfr、kras、pik3等基因是否存在缺失、重排或點突變,都可以顯著影響上述靶向藥物療效。所以,臨床上在應(yīng)用靶向藥物之前,常規(guī)都會進(jìn)行相關(guān)靶點基因的檢測。目的對臨床上非小細(xì)胞肺癌患者經(jīng)常發(fā)生的egfr信號途徑相關(guān)基因突變進(jìn)行檢測,分析患者的突變情況與臨床因素之間的聯(lián)系。方法采集手術(shù)時nsclc患者新鮮腫瘤組織,提取基因組dna,經(jīng)過特異性引物擴(kuò)增后,用焦磷酸測序檢測待測突變。結(jié)果1.56名患者腫瘤組織中,共有9名檢出egfr19外顯子缺失突變,8名檢出21外顯子l858r堿基替換,1名檢出18外顯子g719s/c突變;還有2名檢出kras第12密碼子突變,1名檢出pik3ca的e545k點突變。綜合看來,egfr的突變率為32.14%,kras的突變率為3.57%,pik3ca突變率為1.79%。2.nsclc患者腫瘤組織的egfr的突變率在不同病理分期、病理類型之間有顯著性差異,p0.05。結(jié)論1.免提取cfdna定量pcr方法,具有較高的準(zhǔn)確度及精密度,線性范圍能夠達(dá)到1-10000ng/ml,與試劑盒提取法相比,在定量結(jié)果穩(wěn)定性、重復(fù)性等方面都有顯著改善。2.基于LINE1基因的免提取定量PCR方法,能夠很好地對NSCLC病人的血液循環(huán)DNA含量及完整性進(jìn)行測定。3.非小細(xì)胞肺癌患者循環(huán)DNA含量顯著高于健康人;NSCLC病人cfDNA含量、完整性指數(shù)(DII)與患者的病理分期相關(guān),分期越早,含量及完整性越低,提示檢測此標(biāo)志物水平有助于評估疾病的嚴(yán)重程度;cfDNA含量用于診斷NSCLC的靈敏度是72.3%,特異度是59.5%,cut-off值為87.5 ng/ml,此時ROC曲線下面積是0.659。4.非小細(xì)胞肺癌腫瘤組織中主要檢出的突變是EGFR突變,KRAS和PIK3CA基因突變檢出率較低。EGFR突變檢出率與病理分期、病理類型都相關(guān)。分期越晚,檢出率越高;腺癌的檢出率最高。
【學(xué)位授予單位】:濟(jì)南大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類號】:R734.2
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1 MA Wen li;DNA Diagnosis and Gene Therapy:Advances and Prospects in the 21st Century[J];深圳大學(xué)學(xué)報;2000年04期
2 葛學(xué)銘,陸應(yīng)麟,付生法,范文紅,劉爽;A NOVEL HUMAN DNA SEQUENCE WITH TUMOR METASTASIS SUPPRESSIVE ACTIVITY[J];Chinese Journal of Cancer Research;2000年02期
3 曹暉,劉玉萍,小松かつ子,畢培曦,邵鵬柱;DNA Molecular Profiling:A New Approach to Quality Control of Chinese Drugs[J];Chinese Journal of Integrated Traditional and Western Medicine;2000年01期
4 ;DNA REPAIR CAPACITY IN LUNG CANCER PATIENTS[J];癌變.畸變.突變;2001年04期
5 黃力拉,朱剛勁;被拐賣及失蹤兒童采血驗DNA前的心理問題及對策[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2001年03期
6 安小惠 ,王一理 ,來寶長 ,耿一萍 ,司履生;CONSTRUCTION OF HUMAN INTERLUEKIN-18 DNA VACCINE AND IT'S EXPRESSION IN MAMMALIAN CELLS[J];Journal of Xi'an Medical University;2001年02期
7 ;A Study of PCR with DNA Extracted from Single Cell Isolated from Histological Sections[J];遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2001年01期
8 王軍陽,范桂香,勝利,袁育康;THE CONSTRUCTION AND PRELIMINARY APPRAISEMENT OF HSV-2 gD GENE DNA VACCINE[J];Academic Journal of Xi'an Jiaotong University;2002年02期
9 董菁 ,成軍 ,王勤環(huán) ,施雙雙 ,王剛 ,斯崇文;CLONING AND ANALYSIS OF THE GENOMIC DNA SEQUENCE OF AUGMENTER OF LIVERR EGENERATION FROM RAT[J];Chinese Medical Sciences Journal;2002年02期
10 ;Real time observation of the photocleavage of single DNA molecules[J];Chinese Science Bulletin;2003年07期
中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條
1 Michael J.Siefkes;Cory O.Brant;Ronald B.Walter;;A novel real-time XL-PCR for DNA damage detection[A];漁業(yè)科技創(chuàng)新與發(fā)展方式轉(zhuǎn)變——2011年中國水產(chǎn)學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2011年
2 ;Hormonal Regulation and Tumorigenic Role of DNA Methyltransferase[A];2011中國婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會議暨浙江省計劃生育與生殖醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會暨生殖健康講習(xí)班論文匯編[C];2011年
3 Dongmei Zhao;Fan Jin;Yuli Qian;Hefeng Huang;;Expression patterns of Dnmtl and Dnmt3b in preimplantational mouse embryos and effects of in-vitro cultures on their expression[A];中華醫(yī)學(xué)會第十次全國婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會議婦科內(nèi)分泌會場(婦科內(nèi)分泌學(xué)組、絕經(jīng)學(xué)組、計劃生育學(xué)組)論文匯編[C];2012年
4 姜東成;蔣稼歡;楊力;蔡紹皙;K.-L.Paul Sung;;在聚吡咯微點致動下的DNA雜交行為[A];2008年全國生物流變學(xué)與生物力學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2008年
5 白明慧;翁小成;周翔;;聯(lián)鄰苯二酚類小分子作為DNA交聯(lián)劑的研究[A];第六屆全國化學(xué)生物學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2009年
6 張曄;杜智;楊斌;高英堂;;檢測外周血中游離DNA的應(yīng)用前景(綜述)[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會第29屆學(xué)術(shù)年會暨首屆生物醫(yī)學(xué)工程前沿科學(xué)研討會論文集[C];2009年
7 周紅;鄭江;王良喜;丁國富;魯永玲;潘文東;羅平;肖光夏;;CpG DNA誘導(dǎo)全身炎癥反應(yīng)綜合征的作用及其機(jī)制研究[A];全國燒傷創(chuàng)面處理、感染專題研討會論文匯編[C];2004年
8 ;EFFECTS OF Ku70-DEFICIENT ON ARSENITE-INDUCED DNA DOUBLE STRAND BREAKS, CHROMOSOMAL ALTERATIONS AND CELL CYCLE ARREST[A];海峽兩岸第三屆毒理學(xué)研討會論文摘要[C];2005年
9 李經(jīng)建;冀中華;蔡生民;;小溝結(jié)合方式中的DNA媒介電荷轉(zhuǎn)移[A];第十三次全國電化學(xué)會議論文摘要集(下集)[C];2005年
10 ;The interaction between Levofloxacine Hydrochloride and DNA mediated by Cu~(2+)[A];湖北省化學(xué)化工學(xué)會2006年年會暨循環(huán)經(jīng)濟(jì)專家論壇論文集[C];2006年
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1 本報記者 袁滿;平安:把“領(lǐng)先”作為DNA[N];經(jīng)濟(jì)觀察報;2006年
2 舒放;編織一個DNA納米桶[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2006年
3 閆潔;英兩無罪公民起訴要求銷毀DNA記錄[N];新華每日電訊;2008年
4 何德功;日本制成診斷魚病的“DNA書”[N];農(nóng)民日報;2004年
5 本報記者 張巍巍;DNA樣本也能作假[N];科技日報;2009年
6 周斌偉 鄒巍;蘇州警方應(yīng)用DNA技術(shù)一年偵破案件1887起[N];人民公安報;2011年
7 本報記者 楊天笑;揭秘“神探”DNA[N];蘇州日報;2011年
8 第四軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室教授 李福洋;破除法老DNA的咒語[N];東方早報;2011年
9 常麗君;DNA電路可檢測導(dǎo)致疾病的基因損傷[N];科技日報;2012年
10 常麗君;效率和質(zhì)量:“DNA制造業(yè)”兩大障礙被攻克[N];科技日報;2012年
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1 唐陽;基于質(zhì)譜技術(shù)的基因組DNA甲基化及其氧化衍生物分析[D];武漢大學(xué);2014年
2 池晴佳;DNA動力學(xué)與彈性性質(zhì)研究[D];重慶大學(xué);2015年
3 胡璐璐;哺乳動物DNA去甲基化過程關(guān)鍵酶TET2的三維結(jié)構(gòu)與P暬蒲芯縖D];復(fù)旦大學(xué);2014年
4 馬寅洲;基于滾環(huán)擴(kuò)增的DNA自組裝技術(shù)的研究[D];南京大學(xué);2014年
5 黃學(xué)鋒;精子DNA碎片的臨床意義:臨床和實驗研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年
6 隋江東;APE1促進(jìn)DNA-PKcs介導(dǎo)hnRNPA1磷酸化及其在有絲分裂期端粒保護(hù)中的作用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年
7 劉松柏;結(jié)構(gòu)特異性核酸酶FEN1在DNA復(fù)制及細(xì)胞周期過程中的功能性研究[D];浙江大學(xué);2015年
8 王璐;哺乳動物中親本DNA甲基化的重編程與繼承[D];中國科學(xué)院北京基因組研究所;2015年
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10 龍湍;水稻T-DNA插入突變?nèi)后w側(cè)翼序列的分離分析和OsaTRZ2的克隆與功能鑒定[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年
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1 董洪奎;面向可視化納米操作的DNA運動學(xué)建模及誤差實時校正方法[D];沈陽理工大學(xué);2014年
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,本文編號:1166938
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