本文關(guān)鍵詞：Apelin-13誘導(dǎo)JNK信號(hào)途徑調(diào)控Bcl-2對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞自噬的影響

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【摘要】：目的:研究Apelin-13處理肝癌Hep G2細(xì)胞后對(duì)JNK及Bcl-2磷酸化的影響,探討Apelin-13激活肝癌Hep G2細(xì)胞中的自噬調(diào)控機(jī)制。方法:1.Hep G2細(xì)胞培養(yǎng)及分組:RPMI l640培養(yǎng)基加入10%胎牛血清,用于培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞株Hep G2,置于恒溫37℃、5%CO2、充分濕度飽和的細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)細(xì)胞分為Apelin-13組,分別為:對(duì)照組(10%FBS)、0.0001μmol/L組、0.001μmol/L組、0.01μmol/L組、0.1μmol/L組。SP600125組分別為:對(duì)照組(10%FBS)、Apelin-13(0.1μmol/L)組、Apelin-13(0.1μmol/L)+SP600125(20μmol/L)、SP600125(20μmol/L)組、DMSO(溶媒)組;2.Western blot法:檢測(cè)Apelin-13、JNK抑制劑SP600125分別處理肝癌Hep G2細(xì)胞后,JNK、Bcl-2磷酸化蛋白水平的改變及Beclin1的蛋白表達(dá);3.q RT-PCR法:檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組Beclin1 m RNA的表達(dá)水平;4.MDC熒光染色法:MDC染色后熒光倒置顯微鏡下觀察各組細(xì)胞中自噬小體的生成情況。結(jié)果:1.Western blot法:分別用濃度為0μmol/L、0.0001μmol/L、0.001μmol/L、0.01μmol/L、0.1μmol/L的Apelin-13處理肝癌Hep G2細(xì)胞24h后,各組中p JNK蛋白的相對(duì)表達(dá)量如下:0.333±0.007,0.425±0.015,0.529±0.019,0.883±0.036,1.554±0.021,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);p Bcl-2蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別是:0.241±0.038,0.475±0.027,1.224±0.032,1.753±0.052,3.072±0.016,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);Beclin1蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別是:0.281±0.007、0.485±0.015、1.540±0.015、2.061±0.010、2.931±0.012,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。加入JNK抑制劑SP600125處理肝癌Hep G2細(xì)胞后,各組p JNK蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別是:0.446±0.020、1.018±0.012、0.132±0.006、0.138±0.079、0.462±0.018;Apelin-13(0.1μmol/L)組與其余各組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),Apelin-13(0.1μmol/L)+SP600125(20μmol/L)組與SP600125(20μmol/L)組比較差異無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而與其他組別比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);p Bcl-2蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別是:0.029±0.002、1.878±0.036、0.217±0.010、0.196±0.015、0.031±0.024,Apelin-13(0.1μmol/L)組與其他各組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)、Apelin-13(0.1μmol/L)+SP600125(20μmol/L)組與SP600125(20μmol/L)組比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而與其他組別比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);Beclin1蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別是:0.145±0.012、1.387±0.017、0.449±0.038、0.119±0.018、0.158±0.007;Apelin-13(0.1μmol/L)組、Apelin-13(0.1μmol/L)+SP600125(20μmol/L)組及SP600125(20μmol/L)組與其他組別比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);2.q RT-PCR法:Apelin-13處理肝癌Hep G2細(xì)胞后Beclin1 m RNA的相對(duì)表達(dá)量分別是:1.011±0.010、1.735±0.115、2.269±0.007、3.137±0.113、4.157±0.235;實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);加入JNK抑制劑SP600125處理肝癌Hep G2細(xì)胞后,Beclin1 m RNA的相對(duì)表達(dá)量分別是:1.054±0.074、7.865±0.219、1.563±0.102、0.813±0.012、1.012±0.093;Apelin-13(0.1μmol/L)組、Apelin-13(0.1μmol/L)+SP600125(20μmol/L)組和SP600125(20μmol/L)組與其他組別比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);3.MDC熒光染色法:隨著Apelin-13濃度的升高,在熒光倒置顯微鏡中肝癌Hep G2細(xì)胞中被MDC染色的呈現(xiàn)藍(lán)綠色熒光顆粒的小體增多。而隨著JNK的抑制劑SP600125加入后,肝癌Hep G2細(xì)胞中的藍(lán)綠色熒光小體較Apelin-13(0.1μmol/L)組明顯減少。結(jié)論:Apelin-13能通過JNK信號(hào)通路調(diào)節(jié)Bcl-2的磷酸化介導(dǎo)肝癌Hep G2細(xì)胞中的自噬。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.7

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1 陳鵬;楊成明;曾春雨;王旭開;熊秀勤;何多芬;;JNK信號(hào)途徑通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)介導(dǎo)心肌梗死后心力衰竭小鼠心肌組織的凋亡[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年24期

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1 余加;Apelin-13誘導(dǎo)JNK信號(hào)途徑調(diào)控Bcl-2對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞自噬的影響[D];南華大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：1166034