本文關(guān)鍵詞：多種腫瘤相關(guān)抗原自身抗體對肺癌的診斷價(jià)值評價(jià)

  更多相關(guān)文章： 腫瘤相關(guān)抗原 自身抗體 肺癌診斷

【摘要】：肺癌是最常見的惡性腫瘤之一,在全球范圍內(nèi)嚴(yán)重威脅人類健康,肺癌的早期診斷對于肺癌病人的治療及預(yù)后均具有重要意義。目前研究發(fā)現(xiàn),腫瘤相關(guān)抗原(tumor associated antigen,TAA)自身抗體可以在肺癌患者血清中持續(xù)穩(wěn)定的存在,且在肺癌患者血清與正常對照血清中存在差異,提示其可能作為肺癌早期診斷的血清學(xué)免疫標(biāo)志物。目的本研究選擇9種肺癌候選TAA(ENO1,p53,Survivin,Koc,IMP1,Ral A,FTL,AHSG和14-3-3ζ),以ENO1重組蛋白為代表進(jìn)行原核表達(dá)純化從而獲得抗原蛋白,進(jìn)而以獲得的重組蛋白為抗原,檢測血清中相應(yīng)抗體含量,評價(jià)其對肺癌的診斷價(jià)值與意義,并找出一組對肺癌診斷價(jià)值較高的TAA并聯(lián)組合,為TAA作為肺癌血清學(xué)免疫診斷指標(biāo)提供科學(xué)依據(jù)。方法1.p ET-30a(+)-ENO1重組質(zhì)粒的構(gòu)建與ENO1重組蛋白的純化:將ENO1目的基因片段插入p ET-30a(+)表達(dá)載體構(gòu)建p ET-30a(+)-ENO1重組表達(dá)質(zhì)粒。采用特異性PCR、雙酶切以及測序的方法對重組質(zhì)粒進(jìn)行鑒定。將p ET-30a(+)-ENO1重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至BL21感受態(tài)細(xì)胞進(jìn)行表達(dá),并對誘導(dǎo)條件進(jìn)行優(yōu)化,采用鎳離子親和層析的方法對ENO1蛋白進(jìn)行純化。2.采用蛋白免疫印跡(Western blotting)的方法對純化后的ENO1蛋白進(jìn)行驗(yàn)證。3.采用酶聯(lián)免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)方法檢測肺癌患者及正常對照血清中九種TAA自身抗體含量,比較其在兩組血清中的水平。4.以正常對照血清中自身抗體含量均值加上兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差為截?cái)嘀?計(jì)算自身抗體陽性率,采用篩檢試驗(yàn)評價(jià)指標(biāo)評價(jià)TAA自身抗體對肺癌的診斷價(jià)值。5.用并聯(lián)檢測的方法將7個(gè)有意義的指標(biāo)進(jìn)行并聯(lián),評價(jià)各TAA組合對肺癌的診斷價(jià)值并找出最佳的TAA組合。結(jié)果1.成功構(gòu)建p ET-30a(+)-ENO1重組表達(dá)質(zhì)粒。序列分析結(jié)果顯示,ENO1基因編碼區(qū)序列全長1305bp,與NCBI數(shù)據(jù)庫中公布的人ENO1基因編碼區(qū)序列同源性為99%;該基因編碼的434個(gè)氨基酸序列與NCBI數(shù)據(jù)庫中公布的ENO1蛋白氨基酸序列同源性為100%。轉(zhuǎn)化p ET-30a(+)-ENO1重組質(zhì)粒于BL21大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞中,通過IPTG誘導(dǎo)條件的優(yōu)化,確定其最佳誘導(dǎo)濃度為0.01mmol/L,最佳誘導(dǎo)時(shí)間為6個(gè)小時(shí)。并成功獲得具有免疫反應(yīng)性且濃度及純度均較高的ENO1重組蛋白。2.酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)結(jié)果:p53,FTL,Koc,Survivin,14-3-3ζ和Ral A 7種指標(biāo)自身抗體水平及抗體陽性率在肺癌患者血清中均高于正常對照組(P0.05)。3.單個(gè)指標(biāo)對肺癌的診斷靈敏度普遍偏低,在9.63%-28.89%之間,其中p53自身抗體檢測靈敏度最高(28.89%)。說明單個(gè)指標(biāo)對肺癌的診斷價(jià)值較低。4.TAA組合檢測明顯提高了診斷靈敏度及約登指數(shù),其中以p53,FTL,ENO1,Koc,Ral A和Survivin6個(gè)指標(biāo)并聯(lián)檢測效果最理想,其檢測靈敏度為52.59%,特異度為86.30%,約登指數(shù)為0.39,陽性似然比和陰性似然比分別為3.84和0.55,一致率為69.44%,Kappa值為0.40,為本研究中的最優(yōu)組合。5.臨床特征分析顯示,Survivin自身抗體陽性率在老年組(≥60歲)病人中明顯高于非老年組(60歲)(P0.05),其余腫瘤家族史、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況、組織分型及腫瘤分期等因素對各指標(biāo)及6個(gè)TAA最佳組合檢測肺癌陽性率均無影響(P0.05)。結(jié)論1.肺癌病例組中ENO1,p53,FTL,Koc,Survivin,14-3-3ζ和Ral A 7個(gè)TAA自身抗體陽性率高于對照血清,可能是肺癌潛在的生物標(biāo)志物。2.單個(gè)指標(biāo)檢測時(shí)診斷價(jià)值較低;并聯(lián)檢測p53,FTL,ENO1,Koc,Ral A和Survivin6個(gè)TAA自身抗體明顯提高其對肺癌的診斷價(jià)值。3.腫瘤家族史、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況、組織分型及腫瘤分期等因素對各指標(biāo)及最佳TAA組合檢測肺癌陽性率均無影響。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李瑜,于新;抗氧化修飾低密度脂蛋白自身抗體不是卒中的危險(xiǎn)因素[J];國外醫(yī)學(xué)腦血管疾病分冊;2000年05期

2 張瑾;087 自身抗體致腎上腺梗塞1例[J];國外醫(yī)學(xué).護(hù)理學(xué)分冊;2002年03期

3 葉兵;同種免疫后自身抗體的形成:輸血是自身免疫溶血性貧血的危險(xiǎn)因素嗎?[J];國外醫(yī)學(xué).輸血及血液學(xué)分冊;2004年02期

4 Bitsch A.,Dressel A. ,Meier K. ,袁海峰;原發(fā)進(jìn)展型多發(fā)性硬化癥患者干擾素β-1b治療的自身抗體合成[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(神經(jīng)病學(xué)分冊);2005年06期

5 汪俊軍;朱雁飛;強(qiáng)紅娟;張春妮;;人血清氧化低密度脂蛋白自身抗體的提取和初步鑒定[J];臨床檢驗(yàn)雜志;2006年01期

6 冶麗娜;蔣瑩;;慢性丙型肝炎病毒感染者血清自身抗體的檢測及意義[J];北京醫(yī)學(xué);2013年03期

7 李琳蕓;;抗細(xì)胞漿型自身抗體的臨床意義初步探討[J];檢驗(yàn)醫(yī)學(xué);2013年02期

8 孫榮武,康熙雄,劉立,蘆偉;健康老人自身抗體的研究分析[J];老年醫(yī)學(xué)雜志;1981年01期

9 李柏巖;;自身抗體和β-腎上腺素受體[J];國外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊);1982年06期

10 朱英英;康桂玉;陳國任;孫素花;高慧;;自身抗體正常人群中459例抽樣檢查報(bào)告[J];西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);1983年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 唐古生;吳豫;沈茜;;自身抗體的特點(diǎn)與臨床應(yīng)用趨勢[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國中青年檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2012年

2 李永哲;;自身抗體臨床應(yīng)用進(jìn)展[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議資料匯編[C];2008年

3 歐蒙;;自身抗體相關(guān)抗原改良技術(shù)[A];全國臨床免疫檢驗(yàn)研討會暨第六屆全國臨床免疫學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

4 李新;;自身抗體的檢測在肝功能異�；颊咧械奶接慬A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中華醫(yī)學(xué)會檢驗(yàn)分會成立30周年慶典大會資料匯編[C];2009年

5 龍麗;賈汝琳;栗占國;趙智;;蛋白質(zhì)芯片技術(shù)檢測自身抗體在臨床應(yīng)用的可行性分析[A];第十二屆全國風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

6 韓蔚偉;盧靜;王大兵;;健康老年人群血清自身抗體水平調(diào)查及評價(jià)[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議資料匯編[C];2008年

7 劉亞楠;李莉;;介導(dǎo)過敏反應(yīng)的自身抗體在疾病中的臨床意義[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國中青年檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2012年

8 董怡;;自身抗體在風(fēng)濕病的50年和未來[A];中華醫(yī)學(xué)會第11屆全國內(nèi)科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2007年

9 劉玉峰;;天然抗角蛋白自身抗體:昨天、今天和明天[A];2002中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2002年

10 毛雁飛;王芳;張國華;;冷型反應(yīng)性自身抗體伴抗-C型配血困難1例[A];第十屆全軍檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 郭智;什么是自身抗體[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2008年

2 吳一福;天然抗角蛋白自身抗體研究進(jìn)展[N];中國醫(yī)藥報(bào);2003年

3 劉燕玲;識別隱匿性糖尿病LADA[N];健康報(bào);2006年

4 胥金章 黃顯斌;激素與免疫攻擊[N];健康報(bào);2003年

5 胥金章 黃顯斌;激素治非典為啥有效[N];科技日報(bào);2003年

6 胥金章、唐顯斌;中國軍隊(duì)專家治療非典研究獲得突破[N];人民日報(bào)海外版;2003年

7 本報(bào)記者 魯海燕 通訊員 胥金章 黃顯斌;專家解讀激素治療之謎[N];華夏時(shí)報(bào);2003年

8 ;推進(jìn)基礎(chǔ)研究 強(qiáng)化薄弱環(huán)節(jié)[N];中國醫(yī)藥報(bào);2004年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 任鵬飛;定量檢測TAA自身抗體方法的建立及其在肝癌血清學(xué)診斷中的價(jià)值[D];鄭州大學(xué);2015年

2 徐爽;早期宮頸癌患者外周血中腫瘤相關(guān)抗原自身抗體的研究[D];吉林大學(xué);2015年

3 金永龍;宮頸癌和乳腺癌患者血漿中腫瘤相關(guān)抗原自身抗體的研究[D];吉林大學(xué);2015年

4 張聚良;血管內(nèi)皮生長因子變異體基因的構(gòu)建、表達(dá)及表達(dá)產(chǎn)物體內(nèi)誘導(dǎo)自身抗體產(chǎn)生的研究[D];中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué);2003年

5 虞偉;基于自身抗體譜檢測型免疫芯片的制作研究與臨床初步應(yīng)用[D];東南大學(xué);2003年

6 付剛;改善心力衰竭預(yù)后的相關(guān)研究[D];吉林大學(xué);2014年

7 關(guān)松磊;肺癌和食管癌外周血免疫調(diào)節(jié)因子及腫瘤相關(guān)抗原的自身抗體研究[D];吉林大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王英;新型自身抗體SP1對原發(fā)性干燥綜合征診斷的意義[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2015年

2 祁松楠;陣列技術(shù)應(yīng)用于非小細(xì)胞肺癌診療的研究[D];蘇州大學(xué);2015年

3 董超;三種眼外肌自身抗體在甲狀腺相關(guān)性眼病患者血清中的表達(dá)及意義[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

4 彭玲;自身抗體譜檢測數(shù)據(jù)挖掘與報(bào)告解讀[D];四川醫(yī)科大學(xué);2015年

5 薛冰霜;自發(fā)酮癥起病糖尿病患者臨床特點(diǎn)的回顧性分析[D];南京大學(xué);2013年

6 錢興龍;MGMT自身抗體指導(dǎo)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤化療的臨床價(jià)值探討[D];蘇州大學(xué);2015年

7 谷立通;外周血腫瘤相關(guān)抗原的自身抗體與肝細(xì)胞癌發(fā)生的關(guān)系研究[D];吉林大學(xué);2016年

8 夏俊芬;腫瘤相關(guān)自身抗體聯(lián)合檢測對乳腺癌的診斷價(jià)值[D];鄭州大學(xué);2016年

9 渠彥紅;多種腫瘤相關(guān)抗原自身抗體對肺癌的診斷價(jià)值評價(jià)[D];鄭州大學(xué);2016年

10 王廣杰;自身抗體的精密測定及其診斷價(jià)值[D];大連醫(yī)科大學(xué);2013年

，

本文編號：1164678