本文關(guān)鍵詞：KCTD10對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤侵襲及遷移的影響

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【摘要】：目的:檢測(cè)KCTD10(potassium channel tetramerisation domain containing 10)在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的表達(dá)情況,初步探討KCTD10的表達(dá)與神經(jīng)膠質(zhì)瘤的惡性程度的關(guān)系,并在細(xì)胞水平上探究KCTD10的表達(dá)對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲及遷移的影響。方法:收集神經(jīng)膠質(zhì)瘤樣本15例,3株神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞。采用蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot)技術(shù)檢測(cè)臨床樣本中KCTD10的表達(dá),合成KCTD10特異性siRNA慢病毒,轉(zhuǎn)入神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞BT325內(nèi),轉(zhuǎn)染6 d后在mRNA及蛋白質(zhì)水平檢測(cè)KCTD10的表達(dá)。劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)沉默KCTD10的表達(dá)對(duì)BT325細(xì)胞遷移能力的影響,利用Transwell實(shí)驗(yàn)及基質(zhì)膠侵襲實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)沉默后的BT325細(xì)胞侵襲、遷移能力的變化。通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time quantitative PCR,Q-PCR)或Western Blot技術(shù)檢測(cè)沉默后神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞BT325中侵襲性相關(guān)基因MMP2、MMP9、VEGFA、HIF1A等的變化。明膠酶譜實(shí)驗(yàn)檢測(cè)沉默KCTD10后BT325細(xì)胞培養(yǎng)上清中活性MMP2大小。結(jié)果:Western Blot實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),KCTD10在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的表達(dá)較正常腦組織明顯增高。劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)沉默KCTD10的細(xì)胞發(fā)現(xiàn),BT325細(xì)胞遷移能力明顯下降(P0.05),Transwell小室檢測(cè)發(fā)現(xiàn),沉默后的BT325細(xì)胞的侵襲、遷移能力明顯降低(P0.05)。Western Blot與Q-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn),沉默KCTD10基因的表達(dá)后遷移侵襲相關(guān)基因MMP2、MMP9、VEGFA、HIF1A的表達(dá)顯著降低(P0.05)。明膠酶譜實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),在沉默KCTD10的BT325細(xì)胞培養(yǎng)基中發(fā)現(xiàn),活性MMP2減少。結(jié)論:KCTD10在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中高表達(dá),提示其與神經(jīng)膠質(zhì)瘤具有相關(guān)性。在神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞BT325中干擾KCTD10的表達(dá)能明顯降低神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移、侵襲能力。干擾KCTD10的表達(dá)后,MMP2,MMP9,HIF1A,VEGFA等基因的mRNA與蛋白水平均下降,提示干擾KCTD10引起的侵襲與遷移能力下降,可能是通過(guò)參與調(diào)控這些基因的信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)。
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.4

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8 戴捷,于\，

本文編號(hào)：1164652