本文關(guān)鍵詞：BNIP3在胰腺癌中的表達(dá)及調(diào)控凋亡的作用和機(jī)制

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【摘要】：目的:Bcl-2/腺病毒E1B19kDa結(jié)合蛋白3(BNIP3)是Bcl-2蛋白家族BH3-only亞家族的非典型成員,盡管研究表明BNIP3作為缺氧誘導(dǎo)因子的靶基因在多種疾病過(guò)程中承擔(dān)著重要的角色,比如心肌缺血,細(xì)胞自噬,細(xì)胞凋亡,但是關(guān)于BNIP3功能不同的研究往往得出相互矛盾的結(jié)果。本實(shí)驗(yàn)旨在探討B(tài)NIP3在胰腺癌組織標(biāo)本中的表達(dá)及其臨床意義,研究BNIP3在胰腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)及其調(diào)控胰腺癌細(xì)胞凋亡的作用和機(jī)制。方法:(1)利用免疫熒光(IF)及免疫組織化學(xué)法(IHC)檢測(cè)BNIP3在70對(duì)胰腺癌組織和相應(yīng)癌旁組織中的定位及表達(dá),并分析BNIP3的表達(dá)與臨床病理因素、其他凋亡相關(guān)蛋白及腫瘤凋亡及增殖的關(guān)系;(2)利用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶聯(lián)反應(yīng)(RT-PCR)和Western blot檢測(cè)BNIP3在胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1,Bx Pc-3,CaPan-1,SW1990、CFPAC-1、Patu-8988中的表達(dá)情況,分別用siRNA-BNIP3轉(zhuǎn)染胰腺癌細(xì)胞株靶向沉默BNIP3的表達(dá),用BNIP3全基因質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染胰腺癌細(xì)胞株上調(diào)其表達(dá),利用RT-PCR和Western blot確認(rèn)RNAi靶向沉默及質(zhì)粒過(guò)表達(dá)BNIP3的效果;(3)沉默BNIP3及上調(diào)其表達(dá)后,利用細(xì)胞凋亡檢測(cè)、線粒體膜電位檢測(cè),細(xì)胞活性氧檢測(cè),Western blot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá),研究BNIP3調(diào)控胰腺癌細(xì)胞凋亡的作用及機(jī)制;(4)利用甲基化PCR檢測(cè)6株胰腺癌細(xì)胞的甲基化狀態(tài),去甲基化藥物處理細(xì)胞,分析BNIP3甲基化和其表達(dá)的相關(guān)性;(5)利用CHIP實(shí)驗(yàn)分析BNIP3甲基化對(duì)缺氧誘導(dǎo)因子和其啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合的影響。結(jié)果:(1)BNIP3在胰腺癌組織中的陽(yáng)性率明顯低于癌旁組織,且兩者的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=19.457,P0.001),兩者陽(yáng)性表達(dá)率分別為35.7%和72.9%;BNIP3的表達(dá)與臨床病理因素的分析結(jié)果顯示,BNIP3的低表達(dá)與腫瘤大小、腫瘤分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而與性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤分級(jí)無(wú)明顯相關(guān),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。胰腺癌組織中BNIP3的表達(dá)和促凋亡蛋白表達(dá)Bax正相關(guān),和抑凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)負(fù)相關(guān),其低表達(dá)與腫瘤細(xì)胞增殖活躍、凋亡減少有關(guān);(2)RT-PCR和Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,常氧條件下BNIP3的mRNA和蛋白水平在六株胰腺癌細(xì)胞株中除一株低表達(dá)外,其余的5株均表達(dá)沉默,且缺氧條件培養(yǎng)并未誘導(dǎo)其表達(dá)。(3)通過(guò)上調(diào)及下調(diào)BNIP3表達(dá)發(fā)現(xiàn)BNIP3可以調(diào)控線粒體途徑相關(guān)凋亡蛋白的表達(dá),和誘導(dǎo)細(xì)胞活性氧的產(chǎn)生、線粒體膜電位的下降及細(xì)胞凋亡。(4)甲基化PCR檢測(cè)證實(shí)BNIP3啟動(dòng)子區(qū)的高甲基化和其在胰腺癌中的低表達(dá)密切相關(guān),BNIP3啟動(dòng)子區(qū)的甲基化影響了缺氧誘導(dǎo)因子HIF-1α和其啟動(dòng)子區(qū)缺氧反應(yīng)元件的結(jié)合。結(jié)論:BNIP3在胰腺癌組織中低表達(dá),BNIP3的低表達(dá)與腫瘤大小、腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。在體外實(shí)驗(yàn)中BNIP3啟動(dòng)子區(qū)的高甲基化抑制了HIF-1α和BNIP3的結(jié)合并使其表達(dá)沉默,進(jìn)而為胰腺癌細(xì)胞逃避BNIP3誘導(dǎo)的線粒體途徑促進(jìn)細(xì)胞凋亡作用提供了條件。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以推斷,恢復(fù)胰腺癌中BNIP3的表達(dá)則可以增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)缺氧誘導(dǎo)凋亡的敏感性,有望成為潛在的治療靶點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.9

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 胡珊珊;張洪典;陳傳貴;巴一;于振濤;;BNIP3 HIF-1α在食管鱗癌中的表達(dá)及其臨床病理意義[J];中國(guó)腫瘤臨床;2013年09期

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本文編號(hào)：1163125