本文關(guān)鍵詞：全基因組、干細胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子甲基化水平及基因突變在髓系惡性腫瘤預(yù)后判斷中的作用

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【摘要】：第一部分急性髓細胞白血病患者全基因組5-m C水平檢測【目的】探討髓系惡性腫瘤急性髓細胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者全基因組5-甲基胞嘧啶(5-m C)水平及地西他濱對5-m C的影響,分析與AML患者臨床特點的關(guān)系及對預(yù)后的影響�！痉椒ā恳�2013年1月至2014年12月于蘇州大學附屬第二醫(yī)院血液科就診的42例AML(男性22例,女性20例,中位年齡63歲)經(jīng)地西他濱20mg/(m2·d)×3~5d方案聯(lián)合化療治療的患者為研究對象,分別于地西他濱去甲基化治療前1天、治療后1天及治療后7天采集外周血,采用全基因5-甲基胞嘧啶定量分析法檢測外周血中5-m C含量。42例AML患者按病期分為初治組(20例)、復(fù)發(fā)難治組(10例)、緩解組(12例),其中以緩解組作為陽性對照組,另以13例缺鐵性貧血患者作為正常對照組。【結(jié)果】(1)正常對照組5-m C含量為0.043±0.018ng,陽性對照組為0.052±0.022ng,兩組5-m C含量相當,差異無意義(p0.05);初治組和復(fù)發(fā)難治組5-m C含量分別為0.160±0.089ng、0.270±0.136ng,明顯高于正常對照組和陽性對照組,并且復(fù)發(fā)難治組高于初治組(p0.05)。(2)地西他濱去甲基化治療后1天及7天,陽性對照組5-m C含量分別為0.050±0.016ng和0.046±0.009ng,較治療前無明顯變化(p0.05);初治組5-m C含量分別為0.084±0.030ng和0.055±0.028ng,均較治療前下降,并且兩者差異亦有意義(p0.05);復(fù)發(fā)難治組5-m C含量分別為0.190±0.127ng和0.142±0.112ng,較治療前降低(p0.05),但兩者間無明顯差異(p0.05)。(3)治療后獲CR患者5-m C含量為0.063±0.037,NR患者5-m C含量為0.127±0.105,與正常對照組比較,CR組接近正常,NR組顯著高于正常(p0.05)。(4)治療前5-m C水平與患者臨床特征,如性別、年齡、FAB分型、原始細胞數(shù)、外周血細胞計數(shù)(白細胞、血紅蛋白、血小板數(shù))無明顯相關(guān)性(p0.05)。(5)治療前5-m C水平影響AML患者的OS及DFS,5-m C低于中位水平0.113ng的患者較高于0.113ng的患者OS和DFS長�！窘Y(jié)論】(1)初治及復(fù)發(fā)難治的AML患者全基因組甲基化水平升高。(2)地西他濱去甲基化治療后全基因組甲基化水平下降,緩解后接近正常。(3)全基因組甲基化水平對AML患者的OS及DFS有影響。第二部分急性髓細胞白血病患者干細胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Sox2、Oct4、Klf4、C-Myc和Nanog啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)檢測【目的】探討髓系惡性腫瘤急性髓細胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)干細胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Sox2、Oct4、Klf4、C-Myc和Nanog啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)及地西他濱治療后甲基化狀態(tài)改變情況,并分析對預(yù)后的影響�！痉椒ā恳�2013年1月至2014年12月于蘇州大學附屬第二醫(yī)院血液科就診的42例AML(男性22例,女性20例,中位年齡63歲)均經(jīng)地西他濱20mg/(m2·d)×3~5d方案聯(lián)合化療治療的患者為研究對像,分別于地西他濱去甲基化治療前1天及治療后7天采集外周血,采用甲基化特異性PCR(methylation-specific PCR,MSP)技術(shù)檢測患者外周血中Sox2、Oct4、Klf4、C-myc和Nanog基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)及去甲基化治療后改變情況。42例AML患者按病期分為初治組(20例)、復(fù)發(fā)難治組(10例)、緩解組(12例),其中以緩解組作為陽性對照組,另以13例缺鐵性貧血患者作為正常對照組�！窘Y(jié)果】(1)正常對照組中僅Sox2和Nanog基因檢測到甲基化,陽性率為15.4%和30%;陽性對照組中Sox2、Oct4、Klf4、C-myc和Nanog基因甲基化陽性率分別為50%、50%、41.7%、33.3%和100%,明顯高于正常對照組(p0.05)。初治及復(fù)發(fā)難治的30例患者中均檢測到Sox2、Oct4、K lf4、C-myc和Nanog基因甲基化,陽性率分別為90%、76.7%、70%、86.7%和100%,除Nanog基因,余基因甲基化陽性率均高于兩對照組(p0.05)。(2)治療前初治組Sox2、Oct4、Klf4、C-Myc和Nanog基因甲基化率分別為85%、75%、70%、80%和100%,復(fù)發(fā)難治組分別為100%、80%、70%、100%和100%,均高于正常對照組(p0.05),但兩組甲基化率接近(p0.05)。Sox2和C-Myc基因在初治和復(fù)發(fā)組中甲基化率高于陽性對照組(p0.05),余基因在三組間差異無意義(p0.05)。(3)地西他濱去甲基化治療后,陽性對照組各基因甲基化率無顯著變化(p0.05);初治組Sox2、Oct4、K lf4和C-Myc基因甲基化陽性率分別為33.3%、40%、21.4%、45%,與治療前比差異有意義(p0.05);復(fù)發(fā)難治組Sox2、K lf4和C-Myc基因甲基化陽性率較治療前降低,分別為33.3%、0%和50%,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。(4)各基因甲基化率與患者性別、年齡、FAB分型、原始細胞計數(shù)、血細胞計數(shù)無明顯相關(guān)性(p0.05);存在Sox2或Oct4基因甲基化的患者OS及DFS短于未甲基化者,共存Sox2和Oct4基因甲基化的患者較僅存在一種基因甲基化的患者OS縮短。【結(jié)論】(1)AM患者存在干細胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Sox2、Oct4、Klf4、C-Myc和Nanog啟動子區(qū)甲基化。(2)地西他濱去甲基化治療后Sox2、Oct4、Klf4和C-Myc甲基化陽性率下降。(3)Sox2和Oct4基因甲基化對預(yù)后有重要影響。第三部分骨髓增生異常綜合征患者TET2、DNMT3A、ASXL1基因突變研究【目的】探討髓系惡性腫瘤骨髓增生異常綜合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者TET2、DNMT3A和ASXL1基因突變與臨床特征的關(guān)系及對預(yù)后的影響。【方法】懫用基因組擴增直接測序法檢測2013年3月至2014年9月于蘇州大學附屬第二醫(yī)院血液科就診的20例MDS患者(男性12例,女性8例,中位年齡66歲)骨髓中TET2(exon3、exon11)、DNMT3A(exon23)、ASXL1(exon12)基因的突變情況,以6例健康供者外周血標本作為正常對照�！窘Y(jié)果】(1)正常對照中均未檢出TET2、ASXL1、DNMT3A基因突變;20例MDS患者中3例(15%)檢測到TET2基因突變,1例純合突變,2例雜合突變;4例(20%)檢測到ASXL1基因突變,2例純合突變,2例雜合突變;未檢測到DNMT3A基因exon23突變。1例存在TET2和ASXL1共突變,1例存在ASXL1 2處突變。(2)TET2及ASXL1突變在各亞型、染色體核型、危險分層間突變率無差異;突變患者與野生型患者性別、年齡、外周血細胞計數(shù)等無明顯差異(p0.05),TET2突變、ASXL1突變對生存時間無顯著影響(p0.05)。【結(jié)論】(1)TET2、ASXL1基因突變在MDS患者中常見(突變率10%)。(2)由于本實驗病例數(shù)尚少,TET2、ASXL1基因突變對生存時間的影響尚不確定。
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R733.7

【參考文獻】

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1 趙瑜;王全順;竇麗萍;薄劍;李紅華;靖?;于力;;急性白血病Id4基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)研究[J];中國實驗血液學雜志;2007年06期

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本文編號：1163030