本文關鍵詞：Keap1在腎細胞癌中的表達及其作用的研究

  更多相關文章： 腎細胞癌 胞漿蛋白Kelch樣環(huán)氧氯丙烷相關蛋白1 轉錄因子NF-E2相關因子2 增殖

【摘要】：腎細胞癌(簡稱腎癌,Renal Cell Carcinoma)是一種常見的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤,在所有泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤中,其發(fā)病率僅次于膀胱癌,患病率約占成人惡性腫瘤的2～3%。根據全國腫瘤登記年報統(tǒng)計結果顯示,腎癌的發(fā)病率和死亡率分別為4.5/10萬和1.46/10萬,男性患者的發(fā)病率約是女性患者的2倍,城市人口的發(fā)病率是農村人口的4倍。近半數腎癌患者在來院就診前已出現癌轉移現象,局限性腎癌患者進行手術治療后,約30%的患者出現復發(fā)。近年來,隨著其發(fā)病率的逐年升高,腎癌對人群的危害日益嚴重。胞漿蛋白Kelch樣環(huán)氧氯丙烷相關蛋白-1(The Kelch-like ECH-associated protein 1, Keap1)是近期發(fā)現的一種相對分子量為69kDa的腫瘤抑制蛋白。研究表明,在不同組織類型的腫瘤中,Keap1在腫瘤組織中的表達明顯異于癌旁正常組織。在肺癌、卵巢癌、肝癌等癌癥患者腫瘤組織中,Keap1基因出現不同結構位點的失活或突變；臨床分析中發(fā)現,在卵巢癌患者腫瘤組織中,Keap1的低表達與高死亡率有關；肺癌組織免疫組化結果分析發(fā)現,Keap1的表達量在正常組織和腫瘤組織之間存在顯著性差異,提示Keap1能夠作為某些腫瘤臨床診斷的潛在指標,應用于臨床檢驗研究。Keap1調控腫瘤發(fā)生發(fā)展的具體作用機制尚不明確,據目前的研究分析,Keap1主要通過三種不同的方式影響腫瘤的發(fā)生和進展。1.正常條件下,Keap1與泛素連接酶E3(Cul-3)形成復合體,結合細胞氧化應激的關鍵轉錄因子NF-E2相關因子2(nuclear factor E2-related factor 2, Nrf2),泛素化降解Nrf2,調控Nrf2-ARE信號通路,影響抗氧化蛋白和Ⅱ相解毒酶的表達,進而影響腫瘤細胞的增殖、凋亡能力以及對化療藥物和放射治療的敏感性；2.Keap1能夠抑制IKB激酶p(IKKβ)的表達,IKKβ是一種重要的致癌因子,它能夠抑制多種抑癌因子的表達,并且能夠激活NF-κB信號通路,調節(jié)腫瘤細胞的增殖、免疫應答、腫瘤生長浸潤等相關基因的表達；3.Keap1能夠與B淋巴細胞瘤-2(B-cell lymphoma-2, Bcl-2)蛋白結合,抑制Bcl-2的表達,誘導細胞凋亡。目前,國內尚缺乏有關Keap1與腎癌發(fā)生發(fā)展關系的研究報道。本研究通過比較Keap1在腎癌患者腫瘤組織和癌旁正常組織中的表達情況,結合體外細胞實驗觀察Keap1對腎癌細胞的生長、增殖的影響,探討Keap1在腎癌發(fā)生和發(fā)展中的作用及機制。目的檢測胞漿蛋白Kelch樣環(huán)氧氯丙烷相關蛋白-1(Keap1)及轉錄因子NF-E2相關因子2(Nrf2)在腎癌患者臨床標本及腎癌細胞系內的表達情況,分析其表達量與臨床病理特征之間的聯系。運用體外細胞實驗觀察Keap1對腎癌細胞系ACHN增殖活性和克隆形成能力的影響,探討Keap1在腎癌的發(fā)生和發(fā)展中的作用及機制。方法1.收集2014年5月至2015年4月山東大學第二醫(yī)院泌尿外科收治的32例腎癌患者的組織標本,通過Q-PCR和免疫組織化學技術分別從mRNA和蛋白水平上檢測Keap1和Nrf2在腎癌腫瘤組織及癌旁正常組織內的表達情況,并分析兩者在不同組織內的表達差異及兩者之間的相關性。2.運用Q-PCR和Western Blot技術檢測Keap1和Nrf2在人腎永生化皮質近曲小管上皮細胞系HK-2和人腎癌細胞系ACHN中的表達差異。3.構建過表達Keap1的瞬轉腎癌細胞系ACHN,檢測過表達Keap1后對Nrf2、Bcl-2的表達的影響。4.運用CCK-8法檢測和克隆形成法檢測過表達Keap1后對腎癌細胞系ACHN增殖活性及克隆形成能力的影響。結果1.臨床標本nRNA水平和蛋白水平檢測結果表明,Keap1在腎癌組織內的表達低于癌旁正常組織,Nrf2在腎癌組織內的表達高于癌旁正常組織。統(tǒng)計學分析顯示,兩者在不同組織內的表達均具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。根據臨床病理資料分析得,兩者的表達強弱與患者病理分型存在相關性,與患者的年齡和性別沒有明顯的差異(P0.05)。2.細胞水平Q-PCR與Western Blot結果顯示,Keap1與Nrf2在兩種細胞系內均有表達,Keap1在腎癌細胞系ACHN中的表達低于人腎永生化皮質近曲小管上皮細胞系HK-2；Nrf2在ACHN中的表達要高于HK-2。3.在ACHN細胞系內轉染過表達Keap1質粒后發(fā)現,Keap1的過表達能夠促進Nrf2的泛素化降解水平,同時也能夠抑制Bcl-2的表達,促進Bax的表達水平。4.在過表達Keapl后,腎癌細胞系ACHN的增殖活性和克隆形成能力均明顯減弱(P0.05)。結論Keap1和Nrf2在腎臟腫瘤和相應癌旁正常組織內均有表達, Keap1在癌旁正常組織內的表達更高,而Nrf2在腎腫瘤組織內的表達更加明顯,這兩者在腫瘤組織內表達呈負相關。本次研究采用了配對的臨床樣本資料,增強了組間的均衡性,證實了Keap1在腎癌患者的不同組織間的差異性。首次證明了在。腎癌細胞系中,Keap1能夠抑制Nrf2和Bcl-2的表達,并能抑制細胞增殖活性和克隆形成能力,為腎臟腫瘤的基因治療提供一個新的思路,并為臨床患者的診斷、治療以及預后效果的評估提供一個新的靶點。
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.11

【相似文獻】

中國期刊全文數據庫 前10條

1 席志軍,俞莉章,郭應祿,張凱,姜學軍,張志文;白細胞介素-6與腎癌細胞生長關系的實驗研究[J];中華醫(yī)學雜志;2000年04期

2 葉雄俊,張志文,林桂亭,金桂花,陳培拉,韓亮,黃世思,艾軍魁,辛殿祺,郭應祿,常智杰;激活轉錄因子5在腎癌細胞系中的表達及意義[J];中華泌尿外科雜志;2003年04期

3 宋東奎,潘周輝,楊太森;人反義血管內皮生長因子基因表達對腎癌細胞的影響[J];中華泌尿外科雜志;2003年08期

4 楊風光;葉烈夫;林樂;李濤;何延瑜;張志文;郭應祿;;過氧化物酶體增殖激活物受體γ配體對腎癌細胞血管生成的影響[J];福建醫(yī)藥雜志;2009年06期

5 龔明軍;;一種腎癌細胞基因復制表達順序研究的新方法[J];中國醫(yī)學創(chuàng)新;2012年26期

6 潘李珍，，張漪;人體腎癌細胞培養(yǎng)1例報告[J];首都醫(yī)科大學學報;1996年01期

7 吳偉成,巖村正嗣,小柴健;甲狀旁腺素相關蛋白在腎癌細胞中的表達及調節(jié)作用[J];中華泌尿外科雜志;1997年07期

8 許寧,石愛平,趙忠文,王乃義;腎癌細胞的凋亡與調控因子的表達[J];中華外科雜志;1998年07期

9 王威,劉梁,董雪,徐香蘭,沈彬,寇慧珠,劉濤,吳明明,虞頌庭;鈣粘蛋白E在腎癌細胞中的表達[J];中國腫瘤臨床;2000年04期

10 施浩強;于德新;;干擾素在腎癌細胞中的生物學效應[J];國際泌尿系統(tǒng)雜志;2006年03期

中國重要會議論文全文數據庫 前9條

1 王威;劉;董雪;徐香蘭;沈彬;寇慧珠;劉濤;吳明明;虞頌庭;;鈣粘蛋白E在腎癌細胞中的表達[A];2000全國腫瘤學術大會論文集[C];2000年

2 王志華;胡志全;葉章群;莊乾元;楊為民;陳志強;劉繼紅;;樹突狀細胞的體外擴增及培養(yǎng)上清液對腎癌細胞的作用[A];第十五屆全國泌尿外科學術會議論文集[C];2008年

3 申文江;孫凌飛;孫新臣;朱麗紅;邵彥;黃淵;;安替可對腎癌細胞的放射敏感性影響[A];第八屆全國中西醫(yī)結合腫瘤學術會議論文集[C];2000年

4 章小平;錢曉輝;李炎生;曾四平;肖亞軍;趙軍;曾甫清;肖傳國;;VHL表達逆轉腎癌細胞的TRAIL耐受性[A];第十五屆全國泌尿外科學術會議論文集[C];2008年

5 楊清滔;谷江;張永春;楊永安;王楠;朱致暉;祝慶亮;;高表達HIF-1α對腎癌細胞增殖及細胞內STC-1、Ca2+水平影響的研究[A];2013年貴州省泌尿外科學術會議論文匯編[C];2013年

6 丁曉飛;沈茂;嚴巧娣;陳光;;pVHL調控NEK-8維持腎癌細胞原纖毛結構穩(wěn)定的機制研究[A];2013醫(yī)學前沿論壇暨第十三屆全國腫瘤藥理與化療學術會議論文集[C];2013年

7 李金鋒;王國民;戎瑞明;朱同玉;;SiRNA對腎癌細胞系COX-2基因的抑制作用及其質粒載體的構建[A];第十五屆全國泌尿外科學術會議論文集[C];2008年

8 朱致暉;谷江;肖海濤;張永春;羅明俊;楊永安;王楠;楊清滔;;人類斯鈣素蛋白1對腎癌細胞中STC-1、HIF-1α及Ca2+影響的研究[A];2013年貴州省泌尿外科學術會議論文匯編[C];2013年

9 申文江;孫凌飛;孫新臣;朱麗紅;邵彥;黃淵;;安替可對腎癌細胞FasR、FasL和Bel-2基因表達的影響及意義[A];第八屆全國中西醫(yī)結合腫瘤學術會議論文集[C];2000年

中國重要報紙全文數據庫 前1條

1 記者 王丹;維生素C可讓腎癌細胞因“饑餓”死亡[N];健康報;2014年

中國博士學位論文全文數據庫 前10條

1 馮陳陳;自噬聯合mTOR通路或磷酸戊糖途徑雙重抑制對腎細胞癌治療的研究[D];復旦大學;2014年

2 陳鵬亮;miR-199靶向調控ROCK1影響腎癌細胞增殖、侵襲及凋亡的機制研究[D];南方醫(yī)科大學;2015年

3 王志峰;索拉非尼對腎癌細胞系786-0干性相關表達影響[D];南方醫(yī)科大學;2015年

4 洪正東;Rock2通過β-catenin/TCF4信號通路調控SCARA5表達影響腎癌細胞增殖的研究[D];南昌大學;2016年

5 朱小軍;5-氮雜-2’-脫氧胞苷和順鉑通過去甲基化作用及增強凋亡酶激活因子1的活性協同誘導腎癌細胞凋亡的實驗研究[D];南方醫(yī)科大學;2016年

6 杜賢進;藍舌病毒湖北株選擇性誘導腎癌細胞死亡及其機制的研究[D];武漢大學;2010年

7 楊林;腎癌細胞來源exosomes的提取鑒定及對腎癌惡性演進的影響和機制研究[D];重慶醫(yī)科大學;2013年

8 畢建斌;腎癌細胞中環(huán)氧合酶-2的表達及非甾體類抗炎藥NS398對腎癌細胞生長抑制作用的研究[D];中國醫(yī)科大學;2006年

9 張琦;紫杉醇或γ線放射介導的自噬現象對Folliculin基因缺陷腎癌細胞放化療敏感性影響的研究[D];山東大學;2014年

10 羅延誠;MicroRNA-184在腎細胞癌中低表達的作用及其機制的研究[D];中南大學;2013年

中國碩士學位論文全文數據庫 前10條

1 徐榮;腎癌細胞中內源性Wnt以自分泌的方式刺激Fzd7的胞吞作用[D];蘇州大學;2015年

2 吳本鶴;白介素-2聯合不同劑量索拉菲尼對腎癌細胞的體內外殺傷效應的初步研究[D];安徽醫(yī)科大學;2015年

3 李麗;NFATs-ET1通路在腎癌細胞786O增殖和遷移中的作用及其機制[D];南昌大學醫(yī)學院;2015年

4 韓慶杰;siRNA沉默DAD1基因表達對腎癌細胞A498增殖與侵襲能力的影響[D];南華大學;2015年

5 熊虎;沉默ACTN1基因表達能抑制腎癌細胞的生長且誘導細胞凋亡[D];蘭州大學;2016年

6 史培X;Keap1在腎細胞癌中的表達及其作用的研究[D];山東大學;2016年

7 張黎明;熱休克腎癌細胞凍融瘤苗特異性殺傷效應的研究[D];中國醫(yī)科大學;2009年

8 陳磊;體外侵襲實驗分離高侵襲性和低侵襲性腎癌細胞[D];安徽醫(yī)科大學;2008年

9 陳馨;α干擾素對腎癌細胞生長影響的體外研究[D];浙江大學;2008年

10 田偉華;高劑量維生素C殺死腎癌細胞相關機理研究[D];中國科學技術大學;2011年

本文編號：1150162