本文關(guān)鍵詞：急性髓系白血病中TFPI-2基因甲基化檢測及地西他濱對K562細(xì)胞抑制效應(yīng)的研究

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【摘要】：目的:檢測組織因子途徑抑制物-2(TFPI-2)基因在急性髓系白血病(AML)中甲基化狀態(tài),研究去甲基化藥物地西他濱對白血病K562細(xì)胞TFPI-2基因去甲基化和對K562細(xì)胞的抑制效應(yīng),為臨床上應(yīng)用地西他濱治療AML和探尋新的白血病分子治療靶基因提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1.將患者分為初治急性髓系白血病組和缺鐵性貧血組,采用特異性甲基化聚合酶鏈反應(yīng)(MS-PCR)法檢測兩組病人TFPI-2基因甲基化狀態(tài)。2.采用CCK-8法和臺盼藍(lán)細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測不同濃度地西他濱處理K562細(xì)胞不同時(shí)間后對細(xì)胞增殖的影響。3.采用MS-PCR、RT-PCR、Western-Blot法檢測不同濃度地西他濱處理K562細(xì)胞后TFPI-2基因甲基化狀態(tài)、mRNA及蛋白表達(dá)的改變。結(jié)果:1.TFPI-2基因在急性髓系白血病患者中甲基化陽性率(包括完全甲基化和非完全甲基化)達(dá)63.63%(21/33),而對照組缺鐵性貧血患者TFPI-2基因均未發(fā)生甲基化;差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.CCK-8結(jié)果經(jīng)整體分析發(fā)現(xiàn):不同濃度地西他濱組間比較、時(shí)間點(diǎn)比較及濃度組與時(shí)間點(diǎn)的交互作用均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。進(jìn)行精細(xì)比較發(fā)現(xiàn),同一時(shí)間下,k562細(xì)胞的存活率隨著地西他濱濃度增高呈下降趨勢,各濃度組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);同一地西他濱濃度,k562細(xì)胞的存活率隨著地西他濱處理時(shí)間的延長呈下降趨勢,各時(shí)間組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。3.臺盼藍(lán)計(jì)數(shù)法結(jié)果的整體分析發(fā)現(xiàn):不同濃度地西他濱組間比較、時(shí)間點(diǎn)比較及濃度組與時(shí)間點(diǎn)的交互作用均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。進(jìn)行精細(xì)比較發(fā)現(xiàn),同一時(shí)間下,隨著地西他濱作用濃度的增加,各組細(xì)胞數(shù)呈下降趨勢。但地西他濱作用于k562細(xì)胞24小時(shí)時(shí),各濃度地西他濱組細(xì)胞計(jì)數(shù)相對于未加藥組細(xì)胞計(jì)數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),而不同濃度地西他濱作用于k562細(xì)胞48、72小時(shí)后,細(xì)胞計(jì)數(shù)隨地西他濱濃度的增加而下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。同一地西他濱濃度,各組細(xì)胞數(shù)隨時(shí)間的延長均呈上升趨勢,各濃度組除24小時(shí)細(xì)胞計(jì)數(shù)與0小時(shí)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外(p0.05),48小時(shí)、72小時(shí)的細(xì)胞計(jì)數(shù)皆高于0小時(shí),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。4.地西他濱處理后k562細(xì)胞48小時(shí)后,tfpi-2基因出現(xiàn)去甲基化效應(yīng),且呈藥物濃度依賴性;與此同時(shí),k562細(xì)胞tfpi-2基因mrna和蛋白表達(dá)增加,表達(dá)量相對于未經(jīng)地西他濱處理組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論:1.急性髓系白血病中tfpi-2基因常常發(fā)生高甲基化。2.k562細(xì)胞tfpi-2基因啟動(dòng)子高甲基化是其表達(dá)下調(diào)的主要原因。3.地西他濱能夠逆轉(zhuǎn)k562細(xì)胞中tfpi-2基因的高甲基化狀態(tài),恢復(fù)tfpi-2基因的mrna和蛋白的表達(dá),可能參與抑制k562細(xì)胞的增殖。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R733.71

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本文編號：1145761