發(fā)布時間：2017-11-05 12:01

  本文關鍵詞：RNA結合蛋白RNPC1調(diào)控乳腺癌ERα表達的機制研究

  更多相關文章： RNA結合蛋白 RNPC1 乳腺癌 ERα

【摘要】：目的:研究RNA結合蛋白RNPC1在乳腺癌中調(diào)節(jié)ERα表達的具體機制,并研究ERα反饋調(diào)節(jié)RNPC1的機制。探討RNPC1與ERα之間的反饋調(diào)節(jié)環(huán)路的生物學效應以及在乳腺癌內(nèi)分泌治療中的意義。材料和方法:用免疫組化的方法檢測90例乳腺癌組織中RNPC1和ERα表達情況,并用免疫熒光明確RNPC1和ERα在乳腺癌細胞中的表達定位。運用慢病毒轉(zhuǎn)染法,在乳腺癌細胞株MCF-7、BT474、MDA-MB-231、SUM1315中分別構建RNPC1、ERα的過表達和干擾模型,并用實時熒光定量PCR(q RT-PCR)和Western blot檢測轉(zhuǎn)染效率并檢測RNPC1和ERα的m RNA和蛋白的表達水平。用放線菌素D分別處理RNPC1過表達(RNPC1)和對照(NC)細胞株,及RNPC1(sh RNPC1)干擾和對照(SCR)細胞株,在各個時間點用q RT-PCR檢測剩余的ERα轉(zhuǎn)錄子。運用RNA免疫共沉淀(RIP)實驗檢測RNPC1蛋白ERα的轉(zhuǎn)錄子結合,RNA電泳遷移率(REMSA)實驗明確RNPC1結合ERα的轉(zhuǎn)錄子的結合位點;雙熒光素酶報告實驗明確這些結合位點的功能。用CCK-8實驗檢測RNPC1干擾細胞株在雌激素處理之后的增殖能力的變化。MCF-7和BT474細胞,用q RT-PCR和Western blot檢測雌激素處理之后,內(nèi)源性RNPC1和ERα的表達變化。結果:在ERα陽性的乳腺癌組織中,RNPC1的表達明顯增加,差別有統(tǒng)計學意義(p0.05)。RNPC1主要在細胞核和細胞質(zhì)中表達,ERα主要在細胞核中表達。在MCF-7和BT474細胞系中,異源性過表達RNPC1后,ERα的表達明顯增多;而RNPC1干擾后,ERα的表達也明顯降低。RNPC1干擾與過表達對ERβ的表達無影響。在MDA-MB-231和SUM1315細胞系中RNPC1過表達與干擾對ERα的表達無影響。過表達RNPC1后,ERα的m RNA穩(wěn)定性增強;干擾RNPC1后,ERα的m RNA穩(wěn)定性降低。RNPC1能與ERα的m RNA3’端非編碼區(qū)AU/U富含區(qū)域結合。在乳腺癌細胞中過表達ERα能明顯降低RNPC1的表達;干擾ERα能增加RNPC1的表達。在雌激素處理下,RNPC1干擾后增殖能力明顯增強;內(nèi)源性的RNPC1表達降低。結論:在乳腺癌組織中RNPC1與ERα的表達存在明顯的相關性。RNPC1在細胞核和細胞質(zhì)中高表達,ERα在細胞核中高表達。異源性過表達RNPC1能增加ERα的表達,干擾RNPC1能減少ERα的表達。RNPC1能與ERα的m RNA的3’端非編碼區(qū)AU/U富含區(qū)域結合并增強其穩(wěn)定性。異源性過表達ERα能反饋降低RNPC1表達。雌激素能抑制內(nèi)源性RNPC1的表達。RNPC1與ERα之間的反饋調(diào)節(jié)環(huán)路有望為乳腺癌內(nèi)分泌治療和研究提供新的方向。
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9

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本文編號：1144063