RNA結(jié)合蛋白RNPC1調(diào)控乳腺癌ERα表達(dá)的機制研究
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【摘要】:目的:研究RNA結(jié)合蛋白RNPC1在乳腺癌中調(diào)節(jié)ERα表達(dá)的具體機制,并研究ERα反饋調(diào)節(jié)RNPC1的機制。探討RNPC1與ERα之間的反饋調(diào)節(jié)環(huán)路的生物學(xué)效應(yīng)以及在乳腺癌內(nèi)分泌治療中的意義。材料和方法:用免疫組化的方法檢測90例乳腺癌組織中RNPC1和ERα表達(dá)情況,并用免疫熒光明確RNPC1和ERα在乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)定位。運用慢病毒轉(zhuǎn)染法,在乳腺癌細(xì)胞株MCF-7、BT474、MDA-MB-231、SUM1315中分別構(gòu)建RNPC1、ERα的過表達(dá)和干擾模型,并用實時熒光定量PCR(q RT-PCR)和Western blot檢測轉(zhuǎn)染效率并檢測RNPC1和ERα的m RNA和蛋白的表達(dá)水平。用放線菌素D分別處理RNPC1過表達(dá)(RNPC1)和對照(NC)細(xì)胞株,及RNPC1(sh RNPC1)干擾和對照(SCR)細(xì)胞株,在各個時間點用q RT-PCR檢測剩余的ERα轉(zhuǎn)錄子。運用RNA免疫共沉淀(RIP)實驗檢測RNPC1蛋白ERα的轉(zhuǎn)錄子結(jié)合,RNA電泳遷移率(REMSA)實驗明確RNPC1結(jié)合ERα的轉(zhuǎn)錄子的結(jié)合位點;雙熒光素酶報告實驗明確這些結(jié)合位點的功能。用CCK-8實驗檢測RNPC1干擾細(xì)胞株在雌激素處理之后的增殖能力的變化。MCF-7和BT474細(xì)胞,用q RT-PCR和Western blot檢測雌激素處理之后,內(nèi)源性RNPC1和ERα的表達(dá)變化。結(jié)果:在ERα陽性的乳腺癌組織中,RNPC1的表達(dá)明顯增加,差別有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。RNPC1主要在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中表達(dá),ERα主要在細(xì)胞核中表達(dá)。在MCF-7和BT474細(xì)胞系中,異源性過表達(dá)RNPC1后,ERα的表達(dá)明顯增多;而RNPC1干擾后,ERα的表達(dá)也明顯降低。RNPC1干擾與過表達(dá)對ERβ的表達(dá)無影響。在MDA-MB-231和SUM1315細(xì)胞系中RNPC1過表達(dá)與干擾對ERα的表達(dá)無影響。過表達(dá)RNPC1后,ERα的m RNA穩(wěn)定性增強;干擾RNPC1后,ERα的m RNA穩(wěn)定性降低。RNPC1能與ERα的m RNA3’端非編碼區(qū)AU/U富含區(qū)域結(jié)合。在乳腺癌細(xì)胞中過表達(dá)ERα能明顯降低RNPC1的表達(dá);干擾ERα能增加RNPC1的表達(dá)。在雌激素處理下,RNPC1干擾后增殖能力明顯增強;內(nèi)源性的RNPC1表達(dá)降低。結(jié)論:在乳腺癌組織中RNPC1與ERα的表達(dá)存在明顯的相關(guān)性。RNPC1在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中高表達(dá),ERα在細(xì)胞核中高表達(dá)。異源性過表達(dá)RNPC1能增加ERα的表達(dá),干擾RNPC1能減少ERα的表達(dá)。RNPC1能與ERα的m RNA的3’端非編碼區(qū)AU/U富含區(qū)域結(jié)合并增強其穩(wěn)定性。異源性過表達(dá)ERα能反饋降低RNPC1表達(dá)。雌激素能抑制內(nèi)源性RNPC1的表達(dá)。RNPC1與ERα之間的反饋調(diào)節(jié)環(huán)路有望為乳腺癌內(nèi)分泌治療和研究提供新的方向。
【學(xué)位授予單位】:南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類號】:R737.9
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