本文關(guān)鍵詞：miR-10b調(diào)控HOXD10在食管癌侵襲、轉(zhuǎn)移中的研究

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【摘要】：目的通過檢測mi R-10b及其潛在靶基因HOXD10在食管癌細(xì)胞及組織中的表達(dá),在細(xì)胞中進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染及敲除,檢測轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞的核酸和蛋白表達(dá)變化以及侵襲遷移能力的改變情況,探討二者的調(diào)控關(guān)系及在食管癌中侵襲、轉(zhuǎn)移的作用。方法通過熒光定量PCR技術(shù)及蛋白免疫印跡技術(shù)驗證30對食管癌組織及癌旁組織和食管癌細(xì)胞系KYSE30、KYSE70、KYSE140、KYSE150、EC9706、食管永生化上皮SHEE及其癌變細(xì)胞系SHEEC中mi R-10b的表達(dá),分析其表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系,對患者進(jìn)行電話隨訪并分析mi R-10b對患者生存預(yù)后的影響。利用生物信息軟件預(yù)測到下游靶基因為HOXD10,驗證HOXD10在食管組織和細(xì)胞上的表達(dá),并用慢病毒表達(dá)載體對mi R-10b低表達(dá)食管癌細(xì)胞株KYSE30、KYSE140進(jìn)行過表達(dá)轉(zhuǎn)染及對mi R-10b高表達(dá)食管癌細(xì)胞株EC9706進(jìn)行敲除,用RT-PCR和Western Blot方法檢測HOXD10的表達(dá)改變的情況,闡明mi R-10b對HOXD10調(diào)控關(guān)系,通過Wound healing實驗和Transwell實驗檢測轉(zhuǎn)染及抑制前后細(xì)胞株的侵襲、遷移能力,并檢測促轉(zhuǎn)移因子MMP-9的表達(dá)情況,探明mi R-10b調(diào)控HOXD10基因在食管癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用。結(jié)果1.食管癌細(xì)胞和組織中mi R-10b的表達(dá):食管癌細(xì)胞系中,KYSE30、KYSE70、KYSE140、KYSE150細(xì)胞系上mi R-10b表達(dá)較低,EC9706表達(dá)較高,人食管永生化上皮SHEE較其癌變細(xì)胞系SHEEC表達(dá)低;在組織中,食管癌組織較對應(yīng)食管癌旁正常組織mi R-10b表達(dá)較高(P=0.017),在癌中淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)移組mi R-10b較未發(fā)生轉(zhuǎn)移高(P=0.038),與年齡、性別、腫瘤大小、分化程度無關(guān)(P0.05);mi R-10b高表達(dá)組與低表達(dá)組對生存期的影響無明顯差異(P0.05)。2.食管癌細(xì)胞和組織中HOXD10的表達(dá):在食管癌細(xì)胞系中,HOXD10m RNA的表達(dá)在KYSE30、KYSE70、KYSE140中表達(dá)較高,其余較低,HOXD10蛋白水平表達(dá)最高的是KYSE140,最低的是KYSE150;在食管組織中,食管癌組織HOXD10 m RNA水平較對應(yīng)食管癌旁正常組織較低(P=0.018),蛋白水平同樣癌組織低于癌旁組織。3.mi R-10b調(diào)控HOXD10基因的表達(dá):生物信息學(xué)軟件預(yù)測提示,HOXD10可能是mi R-10b靶基因之一,在不同細(xì)胞系用慢病毒載體過表達(dá)或抑制mi R-10b,HOXD10蛋白表達(dá)下調(diào)或上調(diào)(P0.05),對HOXD10 m RNA水平無明顯影響(P0.05)。4.mi R-10b促進(jìn)食管癌細(xì)胞的遷移和侵襲:劃痕實驗和細(xì)胞遷移侵襲實驗中,mi R-10b在細(xì)胞系過表達(dá)和抑制前后,細(xì)胞的遷移、侵襲能力隨著mi R-10b表達(dá)上調(diào)或下調(diào)而增加或降低(P0.05)。敲除HOXD10之后,也可以促進(jìn)細(xì)胞的遷移和侵襲(P0.05),效果類似mi R-10b過表達(dá)。5.HOXD10可負(fù)調(diào)控促轉(zhuǎn)移因子MMP-9影響食管癌侵襲轉(zhuǎn)移:細(xì)胞系中HOXD10基因抑制之后,促轉(zhuǎn)移因子MMP-9蛋白水平上調(diào),并且MMP-9在食管癌組織中呈高表達(dá)。結(jié)論1.mi R-10b在食管癌中表達(dá)上調(diào),與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。2.HOXD10是mi R-10b的下游靶點,mi R-10b負(fù)調(diào)控HOXD10增強食管癌細(xì)胞的侵襲遷移能力。3.mi R-10b促進(jìn)食管癌侵襲轉(zhuǎn)移的作用機制可能是通過負(fù)調(diào)控HOXD10從而上調(diào)MMP-9而實現(xiàn)。
【學(xué)位授予單位】：河南科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.1

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 孫衍昶;郭t$t$;賽克;王翦;王潔;陳芙蓉;張宗平;陳忠平;;MicroRNA-181b提高U87細(xì)胞對VM-26的敏感性研究[J];中國神經(jīng)腫瘤雜志;2013年02期

2 汪章勛;周權(quán);孟慧敏;張軍;黃勃;;金龜子綠僵菌MicroRNA在蟬蛻和蠶血淋巴誘導(dǎo)下的差異表達(dá)分析[J];安徽科技學(xué)院學(xué)報;2013年05期

3 Tianzhi Huang;Angel Alvarez;Bo Hu;Shi-Yuan Cheng;;Noncoding RNAs in cancer and cancer stem cells[J];Chinese Journal of Cancer;2013年11期

4 Wenwen Jia;Wen Chen;Jiuhong Kang;;The Functions of MicroRNAs and Long Non-coding RNAs in Embryonic and Induced Pluripotent Stem Cells[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2013年05期

5 安麗娜;董斐斐;王國坤;單冬凱;荊清;;MicroRNA與動脈粥樣硬化[J];國際心血管病雜志;2013年04期

6 馮楠楠;孫品;夏昭林;;凋亡相關(guān)的microRNA分子研究進(jìn)展[J];工業(yè)衛(wèi)生與職業(yè)病;2013年05期

7 陳娟娟;艾劍剛;黃世峰;曹炬;張莉萍;;HBx介導(dǎo)miR-221上調(diào)-ERα下調(diào)致HepG2細(xì)胞惡性增殖[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2013年20期

8 張世芳;魏彩虹;陸健;張小寧;周鑫磊;張淑珍;王光凱;曹家雪;趙福平;張莉;杜立新;;深度測序鑒定綿羊microRNA轉(zhuǎn)錄組[J];中國畜牧獸醫(yī);2013年09期

9 張義;李龍;岳信;田夫;;miRNA與腫瘤的研究進(jìn)展[J];長江大學(xué)學(xué)報(自科版);2013年36期

10 Juan Liu;Chang-Ping Wu;Bin-Feng Lu;Jing-Ting Jiang;;Mechanism of T cell regulation by microRNAs[J];Cancer Biology & Medicine;2013年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 Ruiwen Fan;Shanshan Yang;Zhanquan Shi;Kaiyuan Ji;Xiaoyun Jia;Jianbo Yao;George W Smith;Changsheng Dong;;Identification of a novel miRNA important for melanogenesis in alpaca(Lama Pacos)[A];2013中國駝業(yè)進(jìn)展[C];2013年

2 曾清華;周箐;康秀華;;血清microRNA的檢測及在肺癌診斷中應(yīng)用的進(jìn)展[A];江西省第二次中西醫(yī)結(jié)合呼吸疾病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2012年

3 秦燕;張玲云;張德玖;;核糖體展示技術(shù)在非編碼核酸研究中的應(yīng)用[A];生命科學(xué)——專題：RNA研究的新技術(shù)和新方法（第26卷第3期）[C];2014年

4 李文峰;鐘伯雄;蘇松坤;;蜜蜂級型分化機理[A];2014年全國蜂產(chǎn)品市場信息交流會暨中國（哈爾濱）蜂業(yè)博覽會論文集[C];2014年

5 宋毅;謝延風(fēng);張鈴鐺;馮清林;劉明冬;張鵬;范仕兵;杜江峰;;MiRNA在垂體泌乳素腺瘤中表達(dá)的初步研究[A];全國高血壓防治知識推廣培訓(xùn)班暨健康血壓中國行海南�？跁撐木C合刊[C];2014年

6 陳軼;陳益耀;蔡曼妮;巫華志;;非酒精性脂肪性肝病患者血清miR-29b水平變化及臨床意義[A];中國轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)和整合醫(yī)學(xué)研討會論文綜合刊[C];2015年

7 Junli Guo;Shaoping Zheng;Zhihong Weng;Keping Xie;Shaojiang Zheng;;Molecular Biomarkers of Pancreatic Intraepithelial Neoplasias and Implications in Early Diagnosis and Therapeutic Intervention[A];第七屆生命科學(xué)聯(lián)合學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2015年

8 Shaosheng Wang;Xiaohong Zhao;Jie Wang;Yingmei Wen;LinJing Zhang;Dezhu Wang;Huili Chen;Qiuxia Chen;Wei Xiang;;Upregulation of micro RNA-203 is associated with advanced tumor progression and poorprognosis in epithelial ovarian cancer[A];第七屆生命科學(xué)聯(lián)合學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2015年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 賈蓓;A型血友病人非整合誘導(dǎo)多能干細(xì)胞建系及其細(xì)胞疾病模型的建立[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

2 邵耘;MicroRNA-101與環(huán)氧化酶-2在胃癌組織中的表達(dá)及意義[D];南京醫(yī)科大學(xué);2013年

3 佘笑梅;三氧化二砷對急性早幼粒細(xì)胞白血病NB4細(xì)胞株Warburg效應(yīng)的影響和機制[D];華中科技大學(xué);2013年

4 陳琦;慢病毒介導(dǎo)的FoxP2 knockdown蝙蝠模型建立與功能研究及長翼蝠小RNA轉(zhuǎn)錄組的分析研究[D];華東師范大學(xué);2013年

5 盧一鳴;基于統(tǒng)計建模方法研究真核生物基因表達(dá)調(diào)控系統(tǒng)[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2013年

6 鄢文;microRNA-19促進(jìn)人肺腺癌細(xì)胞株A549向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化[D];南方醫(yī)科大學(xué);2011年

7 茍麗娟;人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為軟骨細(xì)胞過程中microRNA作用機制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

8 李海霞;神經(jīng)病理性疼痛相關(guān)microRNAs在感覺神經(jīng)傳導(dǎo)通路中功能的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

9 賈曉健;以HDL受體SR-BI基因3'UTR為靶點的microRNA和小分子化合物的發(fā)現(xiàn)及作用機制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

10 虞桂;冠心病不穩(wěn)定性心絞痛血瘀證的microRNA生物標(biāo)志物研究[D];中國中醫(yī)科學(xué)院;2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 周冉;灰葉胡楊microRNA的鑒定與調(diào)控機制研究[D];蘭州大學(xué);2013年

2 劉會鋒;MiR-143對腎癌細(xì)胞株A498增殖及凋亡影響的研究[D];鄭州大學(xué);2013年

3 賈勐;microRNA-21在甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞TPC-1中的作用[D];鄭州大學(xué);2013年

4 周麗;miR-135a/b在肺癌細(xì)胞耐藥中的作用及相關(guān)機制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2013年

5 曹影;miR-137對人喉癌細(xì)胞株Hep-2細(xì)胞增殖的影響[D];南京醫(yī)科大學(xué);2013年

6 張小龍;miR-125b在乳腺癌中對MKNK2的靶向調(diào)控[D];華東師范大學(xué);2013年

7 高利飛;miR-224及miR-378e在大腸癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

8 張潔;鯊魚肝臟中與肝再生相關(guān)的microRNAs研究[D];浙江理工大學(xué);2013年

9 董淼;半夏miRNA的檢測及其靶基因的鑒定[D];浙江理工大學(xué);2013年

10 燕華;柔紅霉素對HL-60敏感細(xì)胞microRNA-21等五種microRNAs表達(dá)的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年

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本文編號：1138838