本文關(guān)鍵詞：染料木黃酮與內(nèi)源性雌二醇對(duì)人乳腺癌細(xì)胞雙向生物學(xué)作用及其分子機(jī)制初步研究

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【摘要】：目的 乳腺癌是婦女最常見的惡性腫瘤之一,嚴(yán)重威脅著女性人群的健康。染料木黃酮是大豆異黃酮家族的主要抗癌因子之一,其作為類雌激素與人體內(nèi)源性激素對(duì)女性乳腺癌的共同影響是決定其防控乳腺癌作用效果的關(guān)鍵點(diǎn)。流行病學(xué)及體外實(shí)驗(yàn)表明具有防治乳腺癌的作用,且人體不同時(shí)期其防治效果不同,在青春期就開始食用豆制品,可抑制乳腺癌的發(fā)生,絕經(jīng)期前大豆異黃酮攝入量與乳腺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)呈明顯的負(fù)相關(guān),但在絕經(jīng)后則有可能會(huì)刺激乳腺癌的增長,表明內(nèi)源性雌激素水平不同其防治效果不同�，F(xiàn)有報(bào)導(dǎo)均以染料木黃酮單體來研究對(duì)乳腺癌細(xì)胞的作用,而忽略人體內(nèi)內(nèi)源性雌激素與其的交互作用,得出不同甚至相反的結(jié)果,此外,雌激素受體類型不同,染料木黃酮生物學(xué)效應(yīng)存在較大差別。對(duì)大豆異黃酮和乳腺癌關(guān)系的爭(zhēng)論顯得更加尖銳,缺乏強(qiáng)有力的、足以達(dá)成共性的支持證據(jù)。本研究將染料木黃酮、內(nèi)源性雌激素與不同雌激素受體類型三者有機(jī)結(jié)合,選用乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231 (ERβ)和乳腺癌細(xì)胞T47D (ERa+ERβ),探索在不同雌二醇水平下(絕經(jīng)前和絕經(jīng)后)染料木黃酮對(duì)其增殖的抑制作用,進(jìn)而檢測(cè)不同雌二醇水平下染料木黃酮作用后兩株乳腺癌細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡所受的影響,以全基因組表達(dá)譜芯片作為一種高通量的基因表達(dá)分析工具,獲取不同處理方式下差異表達(dá)基因譜,并驗(yàn)證。方法 在MTT實(shí)驗(yàn)中雌二醇設(shè)計(jì)Opmol/L、80pmol/L、800pmol/L 1000pmol/L、1600pmol/L共5個(gè)水平,每個(gè)雌二醇水平對(duì)應(yīng)設(shè)計(jì)染料木黃酮濃度為Oμmol/L、5μmol/L、20μmol/L、40μmol/L共5個(gè)水平,用含相應(yīng)受試物的培養(yǎng)基分別培養(yǎng)乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231(ERβ)和乳腺癌細(xì)胞T47D (ERa+ERβ)各96小時(shí)后,經(jīng)MTT法檢測(cè)細(xì)胞吸光度值,并計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率。染料木黃酮濃度為20μmol/L時(shí),應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)探討不同雌二醇水平(Opmol/L、80pmol/L、800pmol/L)對(duì)兩株細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡影響的差異。染料木黃酮濃度為20μmol/L,不同雌二醇水平(Opmol/L、80pmol/L、00pmol/L)下,采用Agilent單標(biāo)表達(dá)譜基因芯片對(duì)差異表達(dá)基因進(jìn)行了篩選并應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)隨機(jī)選擇差異基因EGFR驗(yàn)證基因芯片結(jié)果的可靠性。結(jié)果 MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,雌二醇水平為Opmol/L和80pmol/L時(shí),染料木黃酮抑制乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231 (ERp)增殖的有效劑量為20μmol/L;雌二醇為800pmol/L時(shí),10 μmol/L染料木黃酮可顯著抑制乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231 (ERp)增殖；雌二醇水平為Opmol/L時(shí),染料木黃酮濃度在10pmol/L即可發(fā)揮對(duì)乳腺癌細(xì)胞T47D (ERa+ERβ)增殖明顯的抑制作用,而當(dāng)雌二醇水平為80pmol/L和800pmol/L時(shí),染料木黃酮抑制乳腺癌細(xì)胞T47D(ERa+ERp)增殖作用的濃度較高為20μmol/L。各雌二醇水平下,染料木黃酮在20『mol/L時(shí)使乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231(ERβ)細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期和S期；使乳腺癌細(xì)胞T47D (ERa+ERβ)細(xì)胞周期阻滯在G2/M期。在染料木黃酮濃度為20μmol/L時(shí),不同雌二醇水平下,同空白對(duì)照組比較,乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231 (ERp)凋亡率增強(qiáng)；對(duì)乳腺癌細(xì)胞T47D(ERa+ERβ),染料木黃酮濃度20μmol/L,雌二醇水平為80pmol/L時(shí)細(xì)胞凋亡率高于雌二醇水平為800pmol/L時(shí),說明雌二醇在婦女絕經(jīng)后水平時(shí),染料木黃酮誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞T47D (ERa+ERβ)凋亡的作用大于雌二醇在婦女絕經(jīng)前水平。選取的乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231 (ERβ)組用基因表達(dá)譜芯片篩選出差異表達(dá)基因49個(gè),其中上調(diào)表達(dá)的基因有35個(gè),下調(diào)表達(dá)的基因有14個(gè)。通過功能分類對(duì)差異基因的功能進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)：其中生物過程與分子功能占了絕大部分。選取的乳腺癌細(xì)胞T47D (ERa+ERβ)組用基因表達(dá)譜芯片篩選出差異表達(dá)基因84個(gè),其中上調(diào)表達(dá)的基因有69個(gè),下調(diào)表達(dá)的基因有15個(gè)。通過功能分類對(duì)差異基因的功能進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)：其中生物過程與細(xì)胞組分占了絕大部分。以ACTB為內(nèi)參基因,我們利用RT-qPCR技術(shù)對(duì)隨機(jī)選取的兩組乳腺癌細(xì)胞共有的上調(diào)差異基因EGFR對(duì)基因芯片結(jié)果進(jìn)行了驗(yàn)證,驗(yàn)證的結(jié)果與基因芯片篩選的結(jié)果一致。結(jié)論 染料木黃酮對(duì)乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231 (ERβ)和乳腺癌細(xì)胞T47D (ERa+ERβ)增殖的抑制作用、細(xì)胞周期阻滯、細(xì)胞凋亡情況、差異表達(dá)基因EGFR表達(dá)的影響會(huì)因雌二醇水平的不同和雌激素受體的不同而有所差異,但其具體作用機(jī)制還有待更進(jìn)一步研究。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1138553