本文關(guān)鍵詞：染料木黃酮與內(nèi)源性雌二醇對人乳腺癌細胞雙向生物學(xué)作用及其分子機制初步研究

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【摘要】：目的 乳腺癌是婦女最常見的惡性腫瘤之一,嚴重威脅著女性人群的健康。染料木黃酮是大豆異黃酮家族的主要抗癌因子之一,其作為類雌激素與人體內(nèi)源性激素對女性乳腺癌的共同影響是決定其防控乳腺癌作用效果的關(guān)鍵點。流行病學(xué)及體外實驗表明具有防治乳腺癌的作用,且人體不同時期其防治效果不同,在青春期就開始食用豆制品,可抑制乳腺癌的發(fā)生,絕經(jīng)期前大豆異黃酮攝入量與乳腺癌發(fā)病風(fēng)險呈明顯的負相關(guān),但在絕經(jīng)后則有可能會刺激乳腺癌的增長,表明內(nèi)源性雌激素水平不同其防治效果不同�，F(xiàn)有報導(dǎo)均以染料木黃酮單體來研究對乳腺癌細胞的作用,而忽略人體內(nèi)內(nèi)源性雌激素與其的交互作用,得出不同甚至相反的結(jié)果,此外,雌激素受體類型不同,染料木黃酮生物學(xué)效應(yīng)存在較大差別。對大豆異黃酮和乳腺癌關(guān)系的爭論顯得更加尖銳,缺乏強有力的、足以達成共性的支持證據(jù)。本研究將染料木黃酮、內(nèi)源性雌激素與不同雌激素受體類型三者有機結(jié)合,選用乳腺癌細胞MDA-MB-231 (ERβ)和乳腺癌細胞T47D (ERa+ERβ),探索在不同雌二醇水平下(絕經(jīng)前和絕經(jīng)后)染料木黃酮對其增殖的抑制作用,進而檢測不同雌二醇水平下染料木黃酮作用后兩株乳腺癌細胞周期、細胞凋亡所受的影響,以全基因組表達譜芯片作為一種高通量的基因表達分析工具,獲取不同處理方式下差異表達基因譜,并驗證。方法 在MTT實驗中雌二醇設(shè)計Opmol/L、80pmol/L、800pmol/L 1000pmol/L、1600pmol/L共5個水平,每個雌二醇水平對應(yīng)設(shè)計染料木黃酮濃度為Oμmol/L、5μmol/L、20μmol/L、40μmol/L共5個水平,用含相應(yīng)受試物的培養(yǎng)基分別培養(yǎng)乳腺癌細胞MDA-MB-231(ERβ)和乳腺癌細胞T47D (ERa+ERβ)各96小時后,經(jīng)MTT法檢測細胞吸光度值,并計算細胞增殖抑制率。染料木黃酮濃度為20μmol/L時,應(yīng)用流式細胞術(shù)探討不同雌二醇水平(Opmol/L、80pmol/L、800pmol/L)對兩株細胞周期、細胞凋亡影響的差異。染料木黃酮濃度為20μmol/L,不同雌二醇水平(Opmol/L、80pmol/L、00pmol/L)下,采用Agilent單標表達譜基因芯片對差異表達基因進行了篩選并應(yīng)用實時熒光定量PCR技術(shù)隨機選擇差異基因EGFR驗證基因芯片結(jié)果的可靠性。結(jié)果 MTT實驗結(jié)果顯示,雌二醇水平為Opmol/L和80pmol/L時,染料木黃酮抑制乳腺癌細胞MDA-MB-231 (ERp)增殖的有效劑量為20μmol/L;雌二醇為800pmol/L時,10 μmol/L染料木黃酮可顯著抑制乳腺癌細胞MDA-MB-231 (ERp)增殖；雌二醇水平為Opmol/L時,染料木黃酮濃度在10pmol/L即可發(fā)揮對乳腺癌細胞T47D (ERa+ERβ)增殖明顯的抑制作用,而當雌二醇水平為80pmol/L和800pmol/L時,染料木黃酮抑制乳腺癌細胞T47D(ERa+ERp)增殖作用的濃度較高為20μmol/L。各雌二醇水平下,染料木黃酮在20『mol/L時使乳腺癌細胞MDA-MB-231(ERβ)細胞周期阻滯在G0/G1期和S期；使乳腺癌細胞T47D (ERa+ERβ)細胞周期阻滯在G2/M期。在染料木黃酮濃度為20μmol/L時,不同雌二醇水平下,同空白對照組比較,乳腺癌細胞MDA-MB-231 (ERp)凋亡率增強；對乳腺癌細胞T47D(ERa+ERβ),染料木黃酮濃度20μmol/L,雌二醇水平為80pmol/L時細胞凋亡率高于雌二醇水平為800pmol/L時,說明雌二醇在婦女絕經(jīng)后水平時,染料木黃酮誘導(dǎo)乳腺癌細胞T47D (ERa+ERβ)凋亡的作用大于雌二醇在婦女絕經(jīng)前水平。選取的乳腺癌細胞MDA-MB-231 (ERβ)組用基因表達譜芯片篩選出差異表達基因49個,其中上調(diào)表達的基因有35個,下調(diào)表達的基因有14個。通過功能分類對差異基因的功能進行分析發(fā)現(xiàn)：其中生物過程與分子功能占了絕大部分。選取的乳腺癌細胞T47D (ERa+ERβ)組用基因表達譜芯片篩選出差異表達基因84個,其中上調(diào)表達的基因有69個,下調(diào)表達的基因有15個。通過功能分類對差異基因的功能進行分析發(fā)現(xiàn)：其中生物過程與細胞組分占了絕大部分。以ACTB為內(nèi)參基因,我們利用RT-qPCR技術(shù)對隨機選取的兩組乳腺癌細胞共有的上調(diào)差異基因EGFR對基因芯片結(jié)果進行了驗證,驗證的結(jié)果與基因芯片篩選的結(jié)果一致。結(jié)論 染料木黃酮對乳腺癌細胞MDA-MB-231 (ERβ)和乳腺癌細胞T47D (ERa+ERβ)增殖的抑制作用、細胞周期阻滯、細胞凋亡情況、差異表達基因EGFR表達的影響會因雌二醇水平的不同和雌激素受體的不同而有所差異,但其具體作用機制還有待更進一步研究。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9

【參考文獻】

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本文編號：1138553