本文關(guān)鍵詞：乳桿菌菌株抑制結(jié)腸癌腺細(xì)胞HT-29細(xì)胞增殖的菌體功能分子研究

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【摘要】：結(jié)腸癌是當(dāng)今對(duì)人類(lèi)健康具有嚴(yán)重危害的一種癌癥。大量數(shù)據(jù)表明飲食中導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的產(chǎn)生主要是大量攝取高脂肪、高能量類(lèi)的食物。而經(jīng)常攝取益生菌對(duì)于預(yù)防和緩解結(jié)腸癌癥狀具有潛在的價(jià)值。本文以8株植物乳桿菌的胞外多糖(exopolysaccharides,EPS)、表面蛋白(S-layer protein,S層蛋白)以及熱滅活菌體為對(duì)象,研究其抑制結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29增殖的效果。首先提取乳桿菌胞外多糖和表面蛋白,并制備熱滅活菌體。采用MTS法評(píng)價(jià)菌體表面蛋白、胞外多糖及熱滅活菌體對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29體外增殖的抑制作用;通過(guò)流式細(xì)胞儀研究乳桿菌胞外多糖和表面蛋白誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡情況;并研究植物乳桿菌的胞外多糖和表面蛋白的抗氧化作用,即對(duì)DPPH自由基、羥基自由基(OH·)以及超氧陰離子自由基(O2-·)的清除作用;最后對(duì)所得的優(yōu)良菌株耐酸耐膽鹽的能力進(jìn)行研究。研究結(jié)果如下:1.所研究的8株乳桿菌,產(chǎn)胞外多糖的能力各不相同。其中3號(hào)菌株最高,其濃度可達(dá)到6.36 mg/mL,最低的是14號(hào)菌株,濃度為3.95 mg/m L;不同菌株產(chǎn)表面蛋白的能力也存在差異,其中3號(hào)菌株產(chǎn)表面蛋白含量最高,其濃度可達(dá)到49.25 mg/mL,最低的是9號(hào)菌株,獲得表面蛋白濃度為2.06 mg/mL。2.乳桿菌胞外多糖、表面蛋白和熱滅活菌體均可不同程度的抑制結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29增殖,各菌株之間差異顯著(p0.05)。在胞外多糖濃度為250μg/m L時(shí),3號(hào)菌和31號(hào)菌抑制結(jié)腸癌腺體細(xì)胞HT-29增殖顯著高于其他菌株(p0.05),3號(hào)菌抑制率為14.28%;3號(hào)菌株表面蛋白濃度在500μg/mL時(shí)對(duì)HT-29細(xì)胞增殖抑制率為30.76%,顯著高于(p0.05)LGG的抑制率10.30%;13和31號(hào)菌株熱滅活菌體濃度為108 cfu/mL時(shí),抑制結(jié)腸癌腺體細(xì)胞HT-29增殖顯著高于(p0.05)其它菌株,13號(hào)菌抑制率為14.11%;流式細(xì)胞分析發(fā)現(xiàn),3號(hào)菌表面蛋白濃度為500μg/m L時(shí),可以誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡,其凋亡率為84.86%,3號(hào)菌胞外多糖濃度為500μg/m L時(shí),可以誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡,其凋亡率為75.78%。3.3和13號(hào)菌胞外多糖濃度為500μg/m L時(shí),對(duì)DPPH的清除率顯著高于(p0.05)其它菌株和LGG,3號(hào)菌對(duì)DPPH的清除率為30.82%;3號(hào)菌表面蛋白對(duì)DPPH的清除率8.54%,顯著高于(p0.05)其它菌株;13號(hào)菌胞外多糖濃度為500μg/mL時(shí),對(duì)O2-·清除率為59.44%,顯著高于(p0.05)其它菌株;3號(hào)菌表面蛋白對(duì)O2-·清除率為13.34%,顯著高于(p0.05)其它菌株;3號(hào)菌胞外多糖濃度為500μg/m L時(shí)對(duì)OH·清除率為39.2%,顯著高于(p0.05)其他菌株和LGG,3號(hào)菌表面蛋白對(duì)OH·清除率為13.01%,顯著高于(p0.05)其它菌株和LGG。4.3號(hào)菌在pH 3.0條件下培養(yǎng)18 h后,活菌存活數(shù)較少,在pH 2.0條件下培養(yǎng)18 h后無(wú)法存活。在膽鹽濃度為0.4%作用18 h后,仍有較多的活菌數(shù),3號(hào)菌的耐酸耐膽鹽能力和LGG相近,說(shuō)明3號(hào)菌具有較好的耐酸耐膽鹽能力。從上述結(jié)果可以得出:通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)3號(hào)菌Lactobacillus plantarum 3的表面蛋白和胞外多糖可以抑制結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29增殖,具有清除活性氧的功能;3號(hào)菌株具有較好的耐酸耐膽鹽能力,是一株具有潛在益生功能的菌株。
【學(xué)位授予單位】：大連工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R735.35

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本文編號(hào)：1138513