本文關(guān)鍵詞：TLR7激活對BxPC-3細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的影響及甲羥戊酸代謝途徑對BxPC-3細(xì)胞增殖的影響

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【摘要】：目的探討TLR7配體Gardiquimod對BxPC-3細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的影響及其可能的信號機制。方法 (1)培養(yǎng)人原位胰腺癌BxPC-3細(xì)胞,細(xì)胞經(jīng)過不同時間點(0h,0.2h,0.5h,1.0 h,3.0 h,6.0 h,12.0 h,24.0 h)TLR7的配體Gardiquimod (3μg/ml)的處理后,實時熒光定量PCR (Real-Time PCR)技術(shù)分析細(xì)胞因子IFN-λ1、P53、 PTEN、VEGF、MMP-9和TIMP-1在mRNA轉(zhuǎn)錄水平的變化；(2)Western Blot技術(shù)檢測分析可能激活的絲裂原蛋白激活激酶-胞外信號調(diào)節(jié)激酶(MAPKs-ERK1/2)信號通路；(3)加入MAPKs-ERK1/2特異性阻斷劑PD98059阻斷信號通路,探討MAPKs-ERK1/2信號通路對TLR7激活后相關(guān)的細(xì)胞因子表達(dá)的影響。結(jié)果(1)實時熒光定量的結(jié)果顯示,TLR7的激活能夠不同程度的上調(diào)細(xì)胞因子的表達(dá),其中ITN-λ1和MMP-9上調(diào)大約3倍,TIMP-1、P53和PTEN上調(diào)大約2倍；VEGF的表達(dá)呈現(xiàn)隨時間波動變化的現(xiàn)象；(2)TLR7的激活劑Gardiquimod能夠激活MAPKs-ERK1/2信號通路；(3)特異性阻斷劑PD98059能夠有效阻斷ERK1/2的磷酸化作用；(4)其上述的相關(guān)細(xì)胞因子的降低與其阻斷劑的加入有關(guān)。結(jié)論發(fā)現(xiàn)表明TLR7的激活能夠上調(diào)IFN-λ1、P53、PTEN、VEGF、MMP-9和TIMP-1等因子的表達(dá),其與MAPKs-ERK1/2信號通路能部分相關(guān)。目的 探討甲羥戊酸代謝途徑對細(xì)胞增殖的影響及其可能的機制。方法加入羥甲基戊二酰輔酶A還原酶抑制劑-普伐他丁(Pravastatin, PRA),法尼基焦磷酸合成酶抑制劑-阿倫磷酸鈉(alendronate, ALD)來阻斷甲羥戊酸代謝途徑并分析其對細(xì)胞增殖的影響。然后我們通過加入下游產(chǎn)物如甲羥戊酸(mevalonic acid, MVA)、膽固醇(Cholesterol, CH)、法尼酯焦磷酸(farnesoldiphosphate,FPP)、牛兒基牛兒焦磷酸(geranylgeranyl pyrophosphate, GGPP)來補充PRA和ALD對細(xì)胞的影響,從而分析甲羥戊酸代謝途徑中產(chǎn)物對細(xì)胞增殖的影響。(1)培養(yǎng)人原位胰腺癌BxPC-3細(xì)胞,MTS比色法分析甲羥戊酸代謝途徑中產(chǎn)物對細(xì)胞增殖的影響。(2)流式細(xì)胞技術(shù)檢測甲羥戊酸代謝途徑中產(chǎn)物對細(xì)胞周期的影響。(3)Western Blot分析甲羥戊酸代謝途徑對細(xì)胞的相關(guān)增殖蛋白Cyclin B1, P53和信號途徑MAPK、PBK-AKT等表達(dá)的變化。結(jié)果 (1)MTS結(jié)果顯示：PRA和ALD都能夠抑制細(xì)胞增殖,MA和PRA同時加入能夠補救PRA對細(xì)胞的抑制作用,而MA與ALD同時加入則不能補救。CH, FPP和GGPP三者分別單獨和PRA或ALD同時加入能夠補救PRA和ALD的作用,單獨的MA, CH, FPP和GGPP對細(xì)胞無太大作用。(2)通過流式細(xì)胞檢測結(jié)果表明：PRA能夠阻滯細(xì)胞周期于G1,而ALD能夠阻滯細(xì)胞周期于S。(3)通過Western Blot結(jié)果顯示,PRA能夠上調(diào)P53,下調(diào)Cyclin E的表達(dá),ALD能夠下調(diào)CyclinB1的表達(dá)；而CH, FPP和GGPP能夠?qū)RA和ALD的效應(yīng)有部分補救作用,而MA只能補救PRA; PRA能夠上調(diào)p-P38的表達(dá),ALD能夠上調(diào)p-AKT的表達(dá)。結(jié)論 甲羥戊酸代謝途徑中的PRA和ALD能夠抑制細(xì)胞的增殖,CH, FPP和GGPP能夠補救PRA和ALD對細(xì)胞的抑制作用,而MA只能補救PRA。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R73-3

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本文編號：1138345