本文關(guān)鍵詞：DADS與RORα激動劑對人胃癌細胞EMT與遷移侵襲的作用

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【摘要】：[目的]本研究在前期工作的基礎(chǔ)上,與RORα激動劑SR1078比較,進一步探討二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)上調(diào)RORα對人胃癌MGC803細胞EMT與遷移侵襲的作用及其分子機制,是否具有RORα激動劑的作用。[方法]分別用DADS、RORα激動劑SR1078、RORα抑制劑T0901317處理MGC803細胞,倒置相差顯微鏡觀察各處理組MGC803細胞形態(tài)變化。MTT法、遷移實驗和侵襲實驗檢測各實驗組MGC803細胞增殖、遷移與侵襲的能力;Western blot檢測各實驗組MGC803細胞總蛋白中RORα、β-catenin、Rac1、TGF-β1、Vimentin與E-cadherin蛋白表達,檢測MGC803細胞核中β-catenin蛋白的表達;免疫熒光檢測RORα,β-catenin、Rac1、TGF-β1、Vimentin與E-cadherin蛋白的表達與定位;免疫共沉淀檢測RORα與β-catenin結(jié)合情況。[結(jié)果]相差顯微鏡檢測結(jié)果顯示,對照組細胞多呈梭形而圓形較少;T0901317組長梭形細胞更多而圓形細胞更少,T0901317+DADS組較T0901317組圓形細胞增多,梭形減少;DADS組與SR1078組細胞大部分呈圓形,梭形細胞明顯減少,而SR1078+DADS組細胞基本呈圓形,較DADS組與SR1078組梭形細胞更為少見。MTT比色法、遷移實驗和侵襲實驗結(jié)果顯示,SR1078組和DADS組較對照組細胞的增殖與遷移侵襲能力顯著抑制(P0.05);T0901317較對照組細胞的增殖與遷移侵襲能力明顯增強(P0.05),而T0901317+DADS組細胞的增殖與遷移侵襲能力較T0901317組明顯下降(P0.05)。Western blot結(jié)果顯示,DADS組和SR1078組較對照組RORα與E-cadherin顯著上調(diào)和Rac1、TGF-β1與Vimentin顯著下調(diào)(P0.05);T0901317組較對照組RORα與E-cadherin顯著下調(diào)和TGF-β1、Rac1與Vimentin顯著上調(diào)(P0.05),而T0901317+DADS組RORα與E-cadherin表達較T0901317組上調(diào)和Rac1、TGF-β1與Vimentin下降(P0.05)。在總蛋白中,各組β-catenin蛋白表達無顯著差異(P0.05),但DADS與SR1078能顯著抑制核內(nèi)β-catenin表達(P0.05),T0901317明顯增強核內(nèi)β-catenin表達(P0.05),而T0901317+DADS組核內(nèi)β-catenin較T0901317下調(diào)(P0.05)。免疫熒光結(jié)果顯示,SR1078組和DADS組的RORα和E-cadherin蛋白陽性染色較對照組增強,TGF-β1、Rac1與Vimentin陽性較對照組減弱,T0901317組以上五種蛋白免疫熒光結(jié)果與DADS和SR1078的結(jié)果相反,而DADS處理T0901317組細胞后,RORα和E-cadherin蛋白陽性較T0901317組陽性增加,TGF-β1、Rac1與Vimentin陽性較T0901317組陽性降低。免疫共沉淀結(jié)果顯示,DADS和SR1078能夠促進RORα與β-catenin結(jié)合,T0901317可抑制這兩種蛋白的結(jié)合,而T0901317+DADS組RORα與β-catenin結(jié)合明顯增加。[結(jié)論]1.DADS可上調(diào)RORα通過Wnt/β-catenin通路抑制MGC803細胞EMT與遷移侵襲。2.RORα激動劑可增強DADS對MGC803細胞EMT與遷移侵襲的作用。3.DADS具有RORα激動劑的作用。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.2

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本文編號：1137456