本文關(guān)鍵詞：β-arrestin2在Toll-like receptor 9激動(dòng)劑誘導(dǎo)的人A549細(xì)胞炎癥反應(yīng)中作用的基礎(chǔ)研究

  更多相關(guān)文章： 腫瘤 非小細(xì)胞肺癌 炎癥 β-arrestin2 先天免疫 TLR-9 A549細(xì)胞系

【摘要】：研究背景和研究目的肺癌已經(jīng)是公認(rèn)的最常見的惡性腫瘤之一,并且已成為我國甚至是世界人口惡性腫瘤死亡原因的首位。在肺癌中,大約有85%的患者被診斷為非小細(xì)胞肺癌,而在這些非小細(xì)胞患者中,他們的5年存活率一般低于15%。β-arrestin2是視覺抑制蛋白,它在各種疾病中的作用已經(jīng)得到廣泛的研究,近幾年來,人們發(fā)現(xiàn)β-arrestin2在腫瘤的發(fā)生過程中可能起到重要的作用。β-arrestin2能夠通過GPCR的激活引發(fā)下游MAPK信號(hào)通路的激活,許多的研究表明MAPK信號(hào)通路與細(xì)胞的凋亡以及炎癥有關(guān)。炎癥反應(yīng)是有機(jī)體免疫過程中的一個(gè)基本的保護(hù)措施。越來越多的證據(jù)表明炎癥反應(yīng)是一個(gè)重要的起始因子,它能夠誘導(dǎo)許多其他的疾病。在很多情況下,慢性炎癥能夠促進(jìn)腫瘤的發(fā)生,主要是通過促進(jìn)血管生成、促進(jìn)細(xì)胞的增殖或者轉(zhuǎn)移來實(shí)現(xiàn)的。越來越多的研究表明,在調(diào)節(jié)腫瘤的發(fā)生和形成過程中,免疫系統(tǒng)起著重要的作用,在這個(gè)過程中,先天免疫和后天免疫中的一些成分均有參加。一些成分能夠通過免疫監(jiān)視作用使腫瘤細(xì)胞死亡從而最終抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng),然而,其他的有些成分則能夠促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)。TLR是先天免疫系統(tǒng)中的一個(gè)重要組成成分,并且對(duì)于識(shí)別PAMP和DAMP具有重要作用。人們已經(jīng)知道,細(xì)菌或者細(xì)菌的提取物能夠與未甲基化的CG序列結(jié)合從而起到抗腫瘤的作用,并且這對(duì)于免疫系統(tǒng)也有著比較強(qiáng)的作用。另外,有研究表明,TLR9似乎在一些腫瘤的發(fā)生中起著重要的作用。并且有研究表明TLR-9在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)量很高,然而另一些研究表明在非小細(xì)胞肺癌患者的血清中β-arrestin2的含量與正常人相比偏低,說明TLR-9和β-arrestin2都能夠影響非小細(xì)胞肺癌的形成。那么這二者之間又有著什么聯(lián)系呢?因?yàn)楸疚闹饕霃倪@個(gè)切入點(diǎn)開展研究。本文主要是想研究β-arrestin2在TLR-9介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中是否起作用,并且是如何起作用的。研究結(jié)果1.TLR-9激動(dòng)劑ODN2216能夠促進(jìn)A549細(xì)胞的生長(zhǎng)本論文中,首先檢測(cè)了TLR-9激動(dòng)劑ODN2216對(duì)A549細(xì)胞存活率的影響。加藥處理后,用SRB染色法檢測(cè)細(xì)胞的存活率,可以看到10ug/ml的ODN2216能夠促進(jìn)A549細(xì)胞的生長(zhǎng)。2.過表達(dá)β-arrestin2能夠抑制A549細(xì)胞的生長(zhǎng)本論文要研究β-arrestin2的功能,因而檢測(cè)了過表達(dá)β-arrestin2對(duì)A549細(xì)胞的影響。用SRB方法檢測(cè)過表達(dá)β-arrestin2目的基因后A549細(xì)胞的存活率,可以看到發(fā)現(xiàn)β-arrestin2的存在抑制了A549細(xì)胞的生長(zhǎng)。3.過表達(dá)β-arrestin2能夠引起抑制炎性因子mRNA水平由于上述結(jié)果表明過表達(dá)β-arrestin2能夠促進(jìn)A549細(xì)胞的生長(zhǎng),而已經(jīng)有許多研究表明,在腫瘤細(xì)胞中,炎癥反應(yīng)能夠促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng),因而實(shí)驗(yàn)中用RT-PCR方法檢測(cè)了過表達(dá)β-arrestin2對(duì)A549細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響。結(jié)果表明β-arrestin2能夠抑制A549細(xì)胞中炎性因子IL6和IL8的釋放。4.β-arrestin2與MAPK信號(hào)通路的相互關(guān)系由于MAPK信號(hào)通路一直被認(rèn)為與炎癥反應(yīng)有關(guān)。已經(jīng)有報(bào)道指出,遭受創(chuàng)傷的患者體內(nèi)p38MAPK的磷酸化水平以及炎性因子TNFα、IL-6的表達(dá)水平都隨創(chuàng)傷程度的增加而有所升高,另外的一些研究表明p38MAPK的激活能夠引起炎癥因子表達(dá)量的升高。本論文中,當(dāng)過表達(dá)β-arrestin2后,炎性因子降低,猜測(cè)是不是與MAPK信號(hào)通路有關(guān),因而用western blot檢測(cè)p38和JNK的磷酸化水平變化,發(fā)現(xiàn)p38和JNK的磷酸化水平均降低。5.β-arrestin2不能抑制Toll-like receptor 9激動(dòng)劑引起的炎性因子mRNA水平的升高已經(jīng)有報(bào)道指出,TLR-9的激動(dòng)劑ODN2216能夠促進(jìn)細(xì)胞釋放炎性因子。因而實(shí)驗(yàn)過程中先過表達(dá)β-arrestin2,然后再用TLR-9激動(dòng)劑處理過表達(dá)的細(xì)胞,。用RT-PCR方法檢測(cè)炎性因子IL6和IL8的變化,發(fā)現(xiàn)β-arrestin2的過表達(dá)并不能抑制住TLR-9引起的炎性因子的升高。結(jié)論由上述結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)TLR-9的激動(dòng)劑ODN2216能夠促進(jìn)A549細(xì)胞的生長(zhǎng)。過表達(dá)β-arrestin2后細(xì)胞內(nèi)釋放的炎性因子水平降低。過表達(dá)β-arrestin2后MAPK信號(hào)通路中的P38和JNK的磷酸化水平均降低。但是當(dāng)用siRNA處理A549細(xì)胞后,P38和JNK的磷酸化水平并沒有發(fā)生顯著的升高。過表達(dá)β-arrestin2之后,用TLR-9的激動(dòng)劑處理,發(fā)現(xiàn)β-arrestin2并不能抑制Toll-like receptor 9激動(dòng)劑引起的炎性因子mRNA水平的升高。
【關(guān)鍵詞】：腫瘤 非小細(xì)胞肺癌 炎癥 β-arrestin2 先天免疫 TLR-9 A549細(xì)胞系
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• ABSTRACT9-12
• 縮略詞表12-14
• 前言14-26
• 1. 肺癌與非小細(xì)胞肺癌14
• 2. Arrestins和G蛋白偶聯(lián)受體14-17
• 3. 炎癥反應(yīng)17-19
• 4. MAPK信號(hào)通路19-21
• 5. 免疫和TLR921-24
• 6. G418原理24-26
• 第一部分 G418篩選β-arrestin2穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞系26-38
• 前言26-28
• 1. 材料試劑與主要儀器設(shè)備28-31
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法31-34
• 結(jié)果34
• 討論34-35
• 附圖35-38
• 第二部分 β-arrestin2過表達(dá)對(duì)于TLR-9引起的A549細(xì)胞炎癥反應(yīng)功能的研究38-56
• 前言38-39
• 1. 材料與主要儀器設(shè)備39-43
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法43-48
• 結(jié)果48-49
• 討論49-50
• 附圖50-56
• 第三部分 棕櫚酸(PA)引起H9C2細(xì)胞系凋亡的機(jī)理研究56-66
• 前言56-57
• 1. 材料試劑與主要儀器設(shè)備57-58
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法58-59
• 結(jié)果59-60
• 附圖60-63
• 討論63-66
• 參考文獻(xiàn)66-74
• 致謝74-75
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表75

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本文編號(hào)：1132592